葡萄抗羟脯氨酸变异细胞系和抗盐变异细胞系的生化特性比较研究

对抗HYP和抗盐的葡萄变异细胞系进行了比较分析 ,结果表明抗HYP变异系细胞的脯氨酸含量是抗盐变异系的 2 .86倍 .在盐胁迫下 ,抗HYP变异系吸收的K+和Na+含量高于抗盐变异系 ,但二者的K+/Na+比值相近 .抗HYP变异系的耐盐和耐PEG的能力 ,明显比抗盐变异系强 .实验表明在筛选葡萄抗逆变异系过程中 ,以HYP作为选择压力更为适合 .

苜蓿抗性变异细胞系的筛选

对准格尔苜蓿进行愈伤组织的诱导,以叠氮化钠和紫外线对苜蓿愈伤组织进行诱变处理,筛选其半致死浓度和剂量,并对诱变处理后的材料进行了脯氨酸含量测定,筛选出了具有抗性的苜蓿愈伤组织,为苜蓿的抗性育种提供基础材料。

普通小麦抗赤霉变异细胞系的离体筛选及其再生系抗性分析

通过禾谷镰刀菌毒素胁迫下的幼胚直接筛选、愈伤组织筛选、一步筛选和多步筛选相结合的方法, 从普通小麦千斤早和小偃22中筛选出了抗镰刀菌毒素变异细胞系,比较分析了不同筛选方法在不同筛选程序上的筛选效果,研究了再生株系R0代的抗赤霉特性。结果表明,利用毒素胁迫对优良品种进行抗赤霉细胞工程定向改良是有效可行的,可获得抗病性显著提高的变异株系;利用幼胚直接多步筛选,在高毒素质量浓度上获得抗性植株的比例和抗性提高的幅度均较从愈伤组织筛选和低毒素质量浓度上获得的效果更好。

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选及特性分析

用经返地卫星搭载诱变处理的豆科牧草紫花苜蓿 (Medicago sativa L .)干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织 ,以 L -乙硫氨酸为筛选剂 ,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系 MEr B.MEr B在脱离选择压 9个月后 ,其对 L-乙硫氨酸的抗性 I50 (生长量半抑制时的 L-乙硫氨酸浓度 )比野生型高 14.2倍 ,表明抗性系抗性表达稳定 .抗性系还表现出对 DL-甲硫氨酸的交叉抗性和对天冬氨酸族其它几种氨基酸的抗性 .游离氨基酸含量分析表明甲硫氨酸含量明显增加 .MEr B抗性系过氧化物同功酶 (POD)和酯酶同工酶谱带 (EST)与野生型有显著差异 ,表明抗性系可能发生了基因变化并产生相应的基因产物 .

胡萝卜抗HgCl_2变异细胞系的筛选

利用胡萝卜下胚轴愈伤组织 ,以HgCl2 为选择剂 ,通过多步正筛选法 ,获得了抗性变异细胞系 .抗性鉴定结果表明 ,在不同HgCl2 浓度的培养基上 ,抗性系的愈伤组织存活率和鲜质量增殖率均明显高过亲本系 ,抗性系的细胞膜透性也发生了变化 .对抗性系和亲本系愈伤组织进行再分化的结果表明 ,在连续 3～ 4代的分化培养之后 ,愈伤组织都能再生绿苗 .提出了该项研究在预防和治理重金属污染方面的重要意义 .

苜蓿乙硫氨酸抗性变异细胞系的筛选

用经返地卫星搭载诱变处理的豆科牧草紫花苜蓿 (Medicago sativa L .)干种子种植后长出的花序为外植体诱导愈伤组织 ,以 L -乙硫氨酸为筛选剂 ,通过多步正筛选途径获得了苜蓿乙硫氨酸抗性细胞系 MEr B.MEr B在脱离选择压力 9个月后 ,其对 L-乙硫氨酸的抗性 I50 (生长量半抑制时的 L-乙硫氨酸浓度 )比野生型高 14.2倍 ,表明抗性系抗性表达稳定 .抗性系还表现出对 DL-甲硫氨酸的交叉抗性和对天冬氨酸族其它几种氨基酸的抗性 .游离氨基酸含量分析表明甲硫氨酸含量明显增加 .MEr B抗性系过氧化物同功酶 (POD)和酯酶同工酶谱带 (EST)与野生型有显著差异 ,表明抗性系可能发生了基因变化并产生相应的基因产物 .

葡萄耐盐细胞系的筛选及特性研究

以NaCl作选择压力 ,将长期继代培养的葡萄愈伤组织经正选择方法筛选出耐 0 .75 %的变异细胞系 ,并对其进行了生理生化特性研究。发现耐盐细胞对逆境的忍受能力远高于对照系。而且变异系细胞的游离脯氨酸含量明显高于对照系 ,是对照系的 4.2 6倍 ,游离氨基酸的总量是对照系的 1 .2倍。在盐压下 ,耐盐细胞的K+含量总是高于对照系 ,而Na+含量则低于对照系 。

草木樨抗乙硫氨酸变异系的筛选

用草木樨的愈伤组织，经ＮａＮ３诱变和筛选得到了抗ｄｌ－乙硫氨酸变异细胞系．该变异系在离开选择压力５个月后，仍明显表现出高于对照系的抗性．ｄｌ－乙硫氨酸变异细胞系愈伤组织中蛋氨酸含量是对照的３１倍，其可溶性蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱、过氧化物酶同功酶图谱。

小麦耐甘露醇变异系生理特性分析

目的对二次离体筛选获得的小麦耐甘露醇变异细胞系进行生理生化及分子生物学鉴定。方法检测该变异细胞系在甘露醇,NaCl和聚乙二醇(PEG-6000)模拟的渗透胁迫环境中的耐受生长能力,并测定变异系在甘露醇胁迫下游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、Na+/K+含量等生理生化特性及可溶性蛋白质组成和基因组DNA多态性等分子特征。结果通过愈伤组织在甘露醇,NaCl和聚乙二醇(PEG-6000)模拟的渗透胁迫条件下的生长实验,发现变异系细胞系可以在对照细胞系不能生长的20%甘露醇,1.5%NaCl和20%PEG-6000胁迫条件下,分别表现出14.5%(见图1),12.8%(见图2),41.8%(见图3)的相对生长量;在20%甘露醇胁迫条件下变异系细胞系游离脯氨酸积累量为对照系的80%(见图4),可溶性糖积累量为对照系的1.2倍(见图5),可溶性蛋白含量为对照系的1.3倍(见表1)。在相同浓度的甘露醇模拟的渗透胁迫环境中变异系再生植株比对照植株相能维持较高的K+/Na+比值(见表2)。与对照相比,耐甘露醇变异细胞系再生植株可溶性蛋白SDS-PAGE发生显著变化:6条新可溶性蛋白谱带出现在变异系再生植株中,同时对照系中的1条可溶性蛋白谱带在突变株中缺失(见图6)。变异系植株与对照株RAPD带型呈现一定的多态性(见图7),表明变异系基因组DNA与对照相比发生了突变。结论所研究的小麦耐甘露醇变异细胞系是一个具有较强渗透胁迫耐受能力,可用于进一步育种工作的良好突变体材料。

耐受偏二甲肼的芦苇变异株系的筛选

四氧化二氮/偏二甲肼(Unsymmetricaldimethyl_hybrazine,简称UDMH)为常用的航天器双组元液体推进剂。偏二甲肼沸点低,具有“三致”毒性,可在使用过程中释放到环境中,对污染地的生物多样性和人类健康构成威胁,因此迫切需要清除环境中的偏二甲肼。该文采用细胞工程的技术手段,以芦苇幼苗的下胚轴为材料诱导愈伤组织,继而通过逐步提高筛选压力选育出可耐受偏二甲肼的变异细胞系,再诱导变异细胞系分化,为可治理含偏二甲肼的废水的人工湿地处理系统的构建提供理想的工程植物。结果表明:芦苇的愈伤组织在含有0.5mg·L-12,4D的MS培养基上生长良好;偏二甲肼对该愈伤组织生长的半致死剂量为16.3mmol·L-1;在分别含有1.63、3.26和8.15mmol·L-1偏二甲肼的筛选培养基上进行3～6次继代培养后,可得到较稳定的抗性细胞系,培养23d后的相对生长量分别为对照的90.4%、84.3%和43.4%,培养43d后的相对生长量分别为对照的95.6%、91.7%和46.8%;但是只有前两类抗性细胞系可在含0.1g·L-1KT、0.01g·L-1NAA和相应浓度的偏二甲肼的MS培养基中诱导分化;将绿色再生苗转移到不含激素但含偏二甲肼的培养基上强化根的生长,再经过35d左右的适应性驯化,70%以上的再生苗可成功地转移至温室中培养,为日后人工湿地系统的构建奠定了基础。