慢性乙型肝炎和肝硬化组织中变异肝细胞结节的分子遗传学改变

目的：探讨慢性乙型肝炎和肝硬化组织中变异肝细胞结节（NAH）的染色体畸变情况,从分子水平进一步证实其肿瘤性本质.方法：利用激光显微切割技术解剖10个NAH,并提取全基因组DNA,通过基于女性X染色体失活的嵌合性及磷酸苷油酸激酶（PGK）和雄激素受体（AR）基因位点多态性的克隆性分析技术,选择出单克隆性的NAH进行微阵列比较基因组杂交（array-CGH）,观察其染色体畸变情况.结果：10个NAH中只有4个为单克隆性增生,可用于进一步分析,且其中一个NAH伴有小细胞改变（SCC）.array-CGH分析结果显示,只有伴有SCC的NAH在染色体1q21.2～q25.2,19q13.12～q13.43和8q区域发现有增缢,在染色体4p和8p上有缺失,并且部分与HCC染色体畸变情况一致.而其它3个不伴有SCC的NAH无染色体畸变发生.结论：伴有SCC改变的NAH是一种真性肿瘤,是一种较晚期的癌前病变.

慢性乙型肝炎和肝硬化组织中变异肝细胞结节的克隆性

目的:利用基于女性体细胞构成组织内X染色体失活嵌合性的磷酸甘油酸激酶和雄激素受体位点克隆性检测技术,探讨肝硬化组织中变异肝细胞结节(NAH)的克隆性.方法:女性乙型肝炎病毒(HBV)相关肝硬化标本石蜡切片,HE染色后通过显微切割获取肝细胞结节,提取基因组DNA,经甲基化敏感的HpaⅡ或HhaⅠ消化,巢式PCR扩增,凝胶电泳显示结果.应用肝细胞癌(HCC)和肝细胞腺瘤组织作为参照病变.结果:HCC5例和肝细胞腺瘤组织1例均为单克隆性.在4例可分析的肝硬化组织中共分离出普通再生结节6个和NAH29个,后者包括混合细胞性病变25个,透明细胞性(糖原储积)病变4个.伴有小细胞性改变(SCC)的5个混合细胞性NAH均显示X染色体失活嵌合性丢失,提示为肿瘤性病变;其中1个取自癌旁的病变与癌组织的灭活带型一致,证明与HCC具有相同的克隆起源;20个不伴SCC的混合细胞性NAH中,7个(35%)为单克隆性病变;检测的4个透明细胞性NAH和6个普通再生结节均未显示出X染色体失活嵌合性丢失,提示为多克隆性病变.结论:HBV相关的肝硬化组织中的部分NAH,尤其是伴有SCC的病变,是单克隆性的,已经属于肿瘤性病变;SCC是NAH病变进展过程中的较晚期改变,是一种癌前病变.

局灶性结节状增生中变异肝细胞结节的检出及其与肝细胞腺瘤的比较

目的研究局灶性结节状增生（FNH）与变异肝细胞病灶（FAH）和结节（NAH）的关系，并对其微血管结构以及细胞增生活性与肝细胞腺瘤（HCA）进行对比观察。方法对5例患者的6个经典FNH和9例患者的10个HCA进行组织学观察，应用免疫组织化学方法检测CD34、Ki-67抗原和细胞角蛋白19（CK19）表达，计算Ki-67标记指数以反映细胞增生活性。结果6个FNH病变中均检测到多个FAH和NAH。HCA和FNH组织中均有CD34标记的微血管，但其密度和分布不同。HCA中微血管弥漫存在；FNH中微血管呈灶性或小结节状分布，主要存在于NAH中。CK19标记显示，FNH中胆小管和胆管阳性，NAH和HCA均为阴性。FNH中，73个NAH的Ki-67标记指数（2．8％）明显高于FNH内NAH未累及的肝实质（0．6％），但与HCA（1．8％）相比差异无统计学意义。结论经典FNH中常见NAH形成，NAH与周围肝实质不同，具有较高的细胞增殖活性以及类似于HCA的CD34阳性微血管结构。

肝细胞再生结节、变异肝细胞结节与肝细胞癌之间的对照观察

目的研究变异肝细胞结节（NAH）的形成和进展及其与肝细胞癌（HCC）的关系。方法对HCC、来自癌周肝组织的NAH和普通再生结节（ORN）各50个进行组织学观察；通过免疫组织化学反应显示不同病变中乙型肝炎病毒（HBV）抗原表达水平，评价细胞增殖活性，检测p53蛋白异常积累。结果在50例HCC切除标本的癌周肝组织中均检测到多个变异肝细胞病灶（FAH）和NAH，自FAH到HCC的演进过程中存在一系列连续的结构和形态变化；与ORN相比，NAH和HCC中HBV表面及核心抗原的表达水平逐渐降低『阳性率分别为70％（35／50）、50％（25／50）、10％（5／50）和60％（30／50）、40％（20／50）、6％（3／50）I（P〈0．05），Ki一67抗原标记指数逐渐升高[分别为（0．58±0．49）％、（2．46±1．05）％和（40．36±26．27）％]（P〈0．05），而p53蛋白异常积聚仅见于部分HCC[46％（23／50）1，其程度随组织学分级的升高而增高[Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级病变中分别为13％（1／8）、41％（11／27）和73％（11／15）].结论NAH在慢性乙型肝炎和肝硬变的切除标本中也可以检测到，有一系列的形态学改变可供识别，具有较高的增殖活性：NAH代表一种常见的HCC前期病变，可用于HCC发生的监测。

人肝细胞癌的癌前期病变

肝实质的大细胞性和小细胞性改变都曾被认为与肝细胞癌 (HCC)发生有关 ,但近年来的研究表明 ,只有后一种情况才可能是一种癌前形态学表型。利用多种动物进行的致癌性试验显示 ,变异肝细胞病灶是肝细胞腺瘤和HCC的前期病变 ;最近的观察表明 ,这种局灶性病变也存在于人病变肝组织中 ,并可通过变异肝细胞结节和 /或小细胞性改变进展为HCC。巨大再生结节 (腺瘤样增生 )是肝硬变组织中的一种较少见病变 ,依据是否伴有小细胞性改变可分为不典型和普通型两种 ;前者与HCC形成有关 ,而后者与其他再生结节相似 ,不属于癌前病变。利用肝组织活检发现各种肿瘤前期病变 ,可作为监测HCC高危人群的一种重要手段。