精氨酸对变异链球菌生物膜及牙骨质再矿化作用的体外研究

目的:观察精氨酸对变异链球菌生物膜和牙骨质再矿化的作用,探讨精氨酸对根面龋预防的临床效果及可行性。方法:以不加精氨酸为对照组,采用4种不同质量浓度的精氨酸溶液处理变异链球菌生物膜,研究精氨酸在龋病预防中的效果。24 h后通过pH值测定、结晶紫染色,观察不同质量浓度精氨酸溶液对变异链球菌生物膜的影响。收集无龋坏的人前磨牙制备牙骨质块,构建人工根面龋模型并随机分为对照组(人工唾液处理)、实验组(7.5、15.0和30.0 g/L精氨酸处理)共4组,经梯度精氨酸溶液处理后,进行20 d再矿化实验,通过扫描电镜、能谱仪观察精氨酸对脱矿牙骨质物理及化学构成的影响,分析精氨酸对根面龋早期的治疗效果。结果:相较于对照组,精氨酸处理对变异链球菌生物膜具有明显的抑制效果(P<0.001);根面牙骨质表面结构更为致密,Ca、P含量升高(P<0.001);与低质量浓度精氨酸相比,高质量浓度精氨酸组对生物膜的抑制和根面龋的再矿化作用更为显著。结论:精氨酸对变异链球菌生物膜形成有良好的抑制作用,且能促进根面龋牙骨质再矿化,在根面龋的预防及早期治疗方面效果显著。

变异链球菌与口腔致龋微生物相互作用的研究进展

随着人口老龄化速度的加快,老年人患龋情况日益严峻。变异链球菌是主要致龋菌,乳杆菌和血链球菌等也参与了龋病的发生发展,而戈登链球菌可以抑制龋病。本文就变异链球菌与上述口腔微生物相互作用作一综述,为老年龋病防治提供新思路。

变异链球菌氧化应激调控机制的研究进展

龋病发生发展与牙菌斑生物膜微生态平衡密切相关。氧化应激是调控口腔微生物群落组成及结构的重要因素。变异链球菌与龋病的发生发展密切相关,变异链球菌氧化应激耐受能力会影响其在牙菌斑生物膜中的竞争力。变异链球菌氧化应激调控机制包括合成还原酶、通过金属调节蛋白调控铁、锰等金属离子摄入、转录调节因子Spx、从胞外摄取谷胱甘肽及相关的信号传导系统等。目前的研究焦点为变异链球菌如何通过氧化应激反应适应复杂的外环境及对口腔微生态的影响。通过针对关键信号通路设计靶向小分子化合物等途径,抑制变异链球菌氧化应激能力,削弱其毒力,对于口腔微生态调节和龋病防治具有重要意义。

植物化学成分对变异链球菌生物被膜的抑制机制研究进展

变异链球菌(Streptococcus mutans)是致龋关键致病菌,能黏附于牙齿表面并形成生物被膜。近年来,植物化学成分抑制生物被膜的功能广受关注,是挖掘新型生物被膜抑制剂的重要来源。该文总结变异链球菌菌体表面黏附过程、双组分调控系统、群体感应系统对生物被膜的调控机制。以生物被膜的形成机制为基础,探讨黄酮、多酚、萜类等植物性化学成分对变异链球菌生物被膜的抑制机制,抑制作用主要体现在:抑制双组分调控系统、群体感应系统关键酶活力;改变菌体表面特性;抑菌作用;破坏生物被膜分子间作用力。该文为开发抗变异链球菌生物被膜的植物源性制剂提供理论参考。

不同浓度的赤藓糖醇对变异链球菌生物膜结构的影响

目的探讨不同浓度的赤藓糖醇对变异链球菌生物膜结构的影响.方法采用激光共聚焦显微镜结合死菌与活菌荧光染色技术,对比不同浓度的赤藓糖醇对变异链球菌生物膜结构的影响.结果随着赤藓糖醇浓度的增加,变异链球菌生物膜各层活菌百分比减少,厚度变薄,细菌密度降低,且差异均有统计学意义(P<0.05).结论赤藓糖醇对变异链球菌有抑制作用,作用随浓度增加而增强.

变异链球菌hit基因功能及致龋力影响的初步分析

目的:初步探讨hit基因对变异链球菌生长和致龋力的影响。方法:通过同源重组构建变异链球菌hit基因缺陷株(Δhit)、hit基因回补株(ΔhitC、ΔhitC-eGFP);观察不同pH下Smu.Δhit、Smu.ΔhitC和ATCC25175模式菌株生长曲线;通过结晶紫染色、蒽酮染色、扫描电镜等实验,比较生长、生物膜形成、粘附、菌体形态差异及耐酸特性;通过人工龋实验,在体外模拟菌株对牙釉产生龋样损坏的差异。结果:成功构建Smu.Δhit、Sum.ΔhitC和Smu.ΔhitC-eGFP菌株;观察发现Smu.Δhit较ATCC25175菌株生长迅速,随着pH值降低,Smu.Δhit生长受到部分抑制,ATCC25175则完全被抑制;Smu.Δhit菌体呈“椭圆球状平铺附着”分散在牙釉面上,胞外生物膜量较少;Smu.Δhit造成的龋样损坏明显强于ATCC25175。结论:hit基因调控变异链球菌生长繁殖,Smu.Δhit缺陷株生长速率显著高于亲本株,更耐受酸性环境,对人牙釉面破坏性更强。

环介导等温扩增技术结合视觉图像系统检测变异链球菌的效果评价

目的:利用环介导等温扩增技术(LAMP)与视觉图像系统相结合的方法对变异链球菌进行定量检测,探讨其检测效果。方法:利用环介导等温扩增技术对变异链球菌进行扩增,搭建视觉图像系统实现实验结果定量测定,建立细菌浓度与实验结果的函数关系。结果:使用LAMP对2.2~2.2×10^(6)CFU/mL浓度的变异链球菌进行检测,检测下限达到2.2 CFU/mL。并使用视觉图像系统对检测结果进行采集、识别并结果进行了量化,量化的结果与细菌浓度呈良好线性关系。结论:LAMP与视觉图像系统相结合的方式可为椅旁变异链球菌的快速检测提供新途径。

中药五倍子对牙体硬组织及树脂材料表面变异链球菌的抑菌作用研究

目的评估中药五倍子对牙体硬组织及树脂材料表面形成的变异链球菌生物膜的抗菌作用,为其应用于口腔领域提供一定的实验依据。方法分别在牙釉质磨片、牙本质磨片和牙本质与树脂相交界面上接种变异链球菌,随后分别用8 g/L五倍子液、16 g/L五倍子液和2 mL/L洗必泰作用处理。处理12 h后,使用扫描电镜观察不同表面上变异链球菌的形态及生物膜的形成,应用激光共聚焦显微镜观察并计算各组处理后活菌占比的变化。结果五倍子及洗必泰处理组均未形成变异链球菌生物膜,洗必泰处理组仅可见破碎的细菌;五倍子处理组细菌形态发生了一定的变化,未表现变异链球菌特有的串珠样结构。此外,激光共聚焦观察结果提示各组处理后活菌比例显著减少(P<0.05)。结论中药五倍子可以使牙体硬组织表面及树脂材料以及其界面的变异链球菌形态发生改变,并抑制其生物膜的形成,提示五倍子有望作为中药防龋药物应用于口腔临床。

不同低聚糖对变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌作用的体外研究

为更好地了解功能性低聚糖对口腔微生物的影响,本文采用体外实验方法,研究不同低聚糖对变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌生长、产酸、粘附性和生物被膜形成量等的影响。胰蛋白胨大豆肉汤(Trypticase Soy Broth,TSB)培养基中加入不同浓度的低聚半乳糖、低聚木糖、低聚果糖和低聚异麦芽糖制备培养基培养变异链球菌、牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌,测定细菌在培养基中48 h生长过程中的OD值、pH、黏附能力及生物被膜形成量等指标。比较分析不同低聚糖对细菌发酵前后生长、产酸及黏附能力等特性的影响。结果表明:四种低聚糖对三种病原菌均有不同程度的抑制作用。其中,低聚木糖对三种病原菌的生长抑制效果最强;浓度为0.5%的低聚木糖和低聚半乳糖即能明显抑制三种菌液的产酸能力;相比糖醇和其它低聚糖,低聚木糖浓度≥5%时,对三种病原菌的抑制率均大于60%;7%浓度的四种低聚糖对三种病原菌的黏附率均<50%;低聚半乳糖和低聚木糖浓度>5%时,对三种病原菌生物被膜的形成具有较好的抑制作用。与山梨糖醇相比,复配糖(低聚木糖、木糖醇、低聚半乳糖)对三种病原菌的生长抑制作用更为明显。

新型靶向多肽对变异链球菌作用的初步研究

目的:变异链球菌是主要致龋菌,本文主要研究靶向多肽对变异链球菌的杀菌作用及机制。方法:通过最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)以及杀菌动力学曲线的测定观察靶向抗菌肽对于变异链球菌的抗菌效果,以及通过部分抑菌浓度(FIC)、部分杀菌浓度(FBC)测定靶向抗菌肽和NaF(或CHX)有无协同抗菌作用,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜状态下靶向抗菌肽的作用效果。结果:C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11均具有抗菌活性,但抗菌活性差距较大,并且具有时间依赖性,对生物膜状态的变异链球菌也具有一定的抗菌活性。结论:C8g3pm11、C8gpm11、C16pm11对变异链球菌具有一定的抗菌活性,具有潜在的临床指导意义。

可抑制口腔致病菌变异链球菌的乳酸菌筛选

人体口腔疾病危害颇多,口腔中的致病菌多种多样,乳酸菌的存在可以抑制口腔致病菌变异链球菌的生长,因此文章旨在筛选出能够抑制口腔致病菌变异链球菌生长的乳酸菌。采取自制泡菜水制作富集培养液,利用梯度稀释法对菌落进行初筛、复筛。将变异链球菌作为指示菌,通过牛津杯平板法筛选出对变异链球菌生长有抑制作用的乳酸菌PZ3、PZ7,观察其位于培养基上的抑菌圈得到对变异链球菌生长的抑制作用最明显的乳酸菌PZ-7,其抑菌圈直径为(27±0.25)mm。结果表明,乳酸菌PZ-7对口腔致病菌变异链球菌的生长具有抑制效果,能够很好地抑制牙菌斑的产生。

不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定

目的分离鉴定变异链球菌临床分离株。方法收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养,通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应(PCR)扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ(spaP)、葡糖基转移酶B(gtfB)和葡聚糖酶(dexA)以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定。结果从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株,经生物化学,自动微生物分析系统,变异链球菌的特异性基因spaP、gtfB和dexA的PCR扩增均鉴定为变异链球菌,基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同。结论获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株。

高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选

目的初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株。方法通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力,初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株。结果不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同,其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高,提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株,另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低,提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株。结论通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株。

甘草水煎剂对变异链球菌生长和产酸影响的体外研究

目的研究甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌的抗菌活性。方法取粒径为0.2～3.2mm的甘草颗粒加去离子水煎煮后过滤,滤液为实验用甘草水煎剂。采用液体稀释法测定甘草水煎剂对变异链球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。在不同浓度甘草水煎剂中培养变异链球菌,分别于培养0﹑3﹑7﹑12﹑23、40h时测定细菌悬液光密度值和培养液pH值,绘制变异链球菌的生长曲线和产酸曲线。结果甘草水煎剂对变异链球菌的MIC为50mg·mL-1,浓度小于等于100mg·mL-1的甘草水煎剂对变异链球菌无杀菌作用。甘草水煎剂对变异链球菌生长的抑制作用随浓度的增加而增强。甘草水煎剂对变异链球菌的产酸有一定的抑制作用,在培养12h时抑制作用最强。结论甘草水煎剂对体外培养的变异链球菌生长和产酸均有抑制作用。

赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸作用的对比研究

目的对比相同浓度下赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸的影响。方法分别用含0.5%、1%、2%、4%、8%、12%、16%赤藓糖醇和木糖醇的TPY培养基在厌氧条件下培养变异链球菌,分别于0、2、4、6、8、10、12、18、24h测量液体培养基的光密度值(A值)和pH值,运用SPSS描绘其变化曲线图。结果在0.5%、1%、2%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基高,pH值较木糖醇培养基低,说明变异链球菌在含0.5%、1%、2%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基高。在8%、12%、16%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基低,pH值较木糖醇培养基高,说明变异链球菌在含8%、12%、16%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基低。结论对比木糖醇,低浓度下赤藓糖醇对变异链球菌生长和产酸的抑制作用较弱,高浓度下赤藓糖醇的抑菌效果更强。

茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌生长、产酸的影响

目的探讨茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌生长、产酸的影响。方法采用棋盘稀释法测定茶多酚葡萄柚提取物混合液对变异链球菌的最低抑菌浓度(MIC)值,计算分级抑制浓度(FIC)指数来判定二者的联合效应;并测定低于MIC浓度的茶多酚葡萄柚提取物混合液对变异链球菌产酸的影响。结果茶多酚和GSE单独用药时,其MIC分别为2 mg/ml和46.88 mg/L,联用时可降低单组分的使用浓度,如茶多酚1 mg/ml联用GSE 37.5 mg/L即可达到联合应用的M IC,FIC=0.75。变异链球菌培养前后的△pH值随混合液浓度的降低而明显增加。结论茶多酚与葡萄柚提取物联合应用对变异链球菌的体外抗菌活性具有相加作用,较各自的单组分用药在更低浓度即可有效抑制变异链球菌的生长、产酸。

变异链球菌蛋白质提取方法研究

目的建立稳定、有效的提取变异链球菌蛋白质方法。方法以裂解液为提取介质,分别采用反复冻融超声、超声、热裂解和热裂解超声4种方法提取细菌蛋白质,通过分析细菌破碎程度、蛋白质SDS-PAGE电泳及蛋白质质量浓度,比较各提取方法的效果。结果除热裂解法外,其他3种方法均可有效裂解细菌,其中超声起主要作用,同时这3种方法提取蛋白质的SDS-PAGE条带分布基本相同,但反复冻融超声法提取蛋白质条带丰度最高。蛋白质质量浓度测定显示,反复冻融超声法提取蛋白质质量浓度最高。4种方法均具有较好的稳定性和重复性。结论反复冻融超声法可以有效提取变异链球菌蛋白质,有较好的稳定性和重复性,且操作简单。

兽疫链球菌变异株产生的透明质酸的纯化及表征

用 N-甲基 -N′-硝基 -N-亚硝基胍 ( NTG)对兽疫链球菌进行诱变 ,获得高产菌株 .经过对该菌株的发酵培养 ,将产生的多糖经 Savage法、季铵复合物沉淀法、DEAE-纤维素 ( DE5 2 )离子交换层析法及 SephadexG-75凝胶过滤法分离纯化 .纯化的多糖结构经化学组成分析、核磁共振波谱、红外光谱及圆二色谱鉴定 ,证明了诱变得到的高产菌株 ( Streptococcuszooepidemicus J1 8)再经发酵 ,得到的多糖为透明质酸 .通过刚果红实验证明了透明质酸的构象为单股螺旋结构 ,其平均分子量约为 1 .1 6× 1 0 6 .

不同龋敏感者变异链球菌临床分离株的致龋特性

目的探讨不同龋敏感者变异链球菌临床分离株的生物膜形成和产酸能力。方法牙菌斑组织取自60例学龄前儿童,根据乳牙龋失补牙面(dmfs)指数分为无龋组(dmfs=0)和高龋组(dmfs>8)(n=30)。运用死菌/活菌荧光染色技术结合激光共聚焦扫描显微镜观察分析,计算菌斑组织中变异链球菌分离株的生物膜厚度和细菌密度;酸度计测定培养48 h后的pH值;比较不同龋敏感组变异链球菌的生物膜形成和产酸能力。结果高龋组变异链球菌临床分离株的生物膜厚度和细菌分布密度显著高于无龋组(P<0.05)。初始pH值>5.5时,高龋组和无龋组pH值改变无显著性差异;pH=5.0时,高龋组pH值改变明显大于无龋组(P<0.05)。结论高龋组变异链球菌临床分离株的高致龋力与其较强的生物膜形成能力和产酸能力密切相关。

十肽对变异链球菌生物膜生长和结构影响的实验研究

目的 评价人工合成抗菌肽（十肽）对口腔变异链球菌生物膜生长、结构及活性的影响能力。方法 人工合成十肽（氨基酸序列：KKVVFKVKFK-NH2）通过对细菌生物膜药物最低抑制生物膜形成浓度（MBIC）和药物最低清除已形成生物膜浓度（MBRC）2个指标的测定,研究和评估十肽对变异链球菌单菌生物膜的抑制和清除作用;在激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）下观察十肽作用下变异链球菌生物膜的形态、结构及活性变化。结果 当十肽浓度为62.5~125μg m L^-1时,能够抑制变异链球菌生物膜的形成;当十肽浓度为250~500μg m L^-1时,可破坏已形成24 h后的生物膜,CLSM下观察到十肽作用后生物膜结构残存,死菌增多,生物膜厚度明显降低。结论 新型人工合成抗菌肽（十肽）不仅可抑制主要致龋菌变异链球菌单菌生物膜的生长形成,而且可破坏已经形成24 h后的生物膜结构。