普洱健齿茶抑制变形球菌附着的实验研究

笔者曾报告.茶中儿茶素和乌龙健齿茶对变形链球菌的生长,以及产生的葡糖基转移酶(GTF)活性具有良好的抑制作用。本实验拟在这一研究基础上,通过菌斑量的测定,胞外多糖的提取和测定,对受普洱健齿茶影响后,降低了酶活性的变形链球菌附着能力进行体外实验观察。

变形球菌对牙齿影响与干涉治疗研究进展

龋病是一种细菌感染的可传播性疾病，变形链球菌群细菌是其主要致病菌，也是口腔中的主要常驻菌之一，在口腔正常菌群中占有一定比例。在世界上的不同种族、不同社会经济背景的人群中均可分离出此菌，但并非所有人均表现龋病。口腔卫生状况差的个体易患龋，然而临床常可见到一些口腔卫生良好且无其他任何已知龋易感因素存在的龋高发患者，

不同釉质黏结剂对牙龈卟啉单胞菌和变形链球菌的影响

背景:光固化型和含氟光固化型釉质黏结剂对酸蚀后的牙釉质表面有一定封闭作用,含氟光固化型釉质黏结剂还能通过释放氟离子实现防龋功能,但缺乏对氟化物较长时间释放的研究,尤其缺乏经历1-3个月氟化物释放后局部致病菌量的变化信息。目的:分析青少年正畸治疗患者上前牙使用不同组分釉质黏结剂黏结固定矫治器引发的龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌和变形链球菌表达变化。方法:选择2016年1-12月就诊于上海市口腔医院接受正畸治疗的青少年患者90例,其中男43例,女47例,平均年龄(13.27±1.12)岁。采用随机数字表法将90例患者分为3组:化学固化组应用Unite™黏结树脂进行固定矫治器的黏结,光固化组应用Transbond XT光固化树脂进行固定矫治器的黏结,含氟光固化组应用GC光固化正畸黏结用水门汀进行固定矫治器的黏结,每组30例。在黏结托槽当天(初始黏结)及第1,2,3个月复诊时收集患者上前牙龈下菌斑标本,应用PCR技术检测牙龈卟啉单胞菌和变形链球菌的增殖表达量。结果与结论:①组内比较:随着黏结时间的增加,化学固化组3个月复诊时的牙龈卟啉单胞菌增殖表达显著高于初始黏结时(P<0.05);光固化组1个月复诊时的牙龈卟啉单胞菌增殖表达低于初始黏结时(P<0.05);含氟光固化组1,2个月复诊时的牙龈卟啉单胞菌增殖表达均低于初始黏结时(P<0.05)。化学固化组复诊1,2,3个月时的变形链球菌表达高于初始黏结时(P<0.05);含氟光固化组复诊1,2,3个月时的变形链球菌增殖表达均低于初始黏结时(P<0.05);光固化组复诊时的变形链球菌增殖表达与初始黏结时比较差异无显著性意义(P>0.05);②组间比较:1个月复诊时,光固化组、含氟光固化组牙龈卟啉单胞菌增殖表达低于化学固化组(P<0.05);2,3个月复诊时,含氟光固化组牙龈卟啉单胞菌增殖表达低于光固化组、化学固化组(P<0.05)。1,2,3个月复诊时,光固化组、含氟光固化组变形链球菌增殖表达低于化学固化组(P<0.05),含氟光固化组变形链球菌增殖表达低于光固化组(P<0.05)。③结果显示,在固定正畸中,使用不同组分的釉质黏结剂黏结托槽后,短期内对患者口内牙龈卟啉单胞菌和变形链球菌的增殖表达有不同程度影响,其中含氟光固化釉质黏结剂在托槽黏结初期有助于减少牙釉质脱矿、龋病和牙周炎症的发生。

变形链球菌LuxS基因缺失对生物膜结构的影响探究

目的探究变形链球菌LuxS基因缺陷株与标准株在生物膜结构上的差异。方法采用釉质磨片为载体,将变形链球菌标准菌株及luxS基因缺陷株按照1∶1比例接种于培养基中,通过培养后观察两者菌落形态学的变化和生长曲线的变化,比较两者生物膜中单个细菌的情况,比较两者在24 h后形成的生物膜结构情况,采用RT-PCR检测菌液中信号分子自诱导物(AI)-2 mRNA的表达水平。结果变形链球菌标准菌株和LuxS基因缺失菌株在菌落形态学上未见明显的表型差别,两者生长曲线的总体变化一致,两者形成的生物膜存在差异,变形链球菌标准菌株形成生物膜结构更紧密,而缺陷株生物膜菌间结构比较稀疏,RT-PCR检测变形链球菌LuxS基因缺陷株的AI-2 mRNA表达水平低于标准菌,差异有统计学意义(P<0.05)。结论变形链球菌LuxS基因缺陷株与标准株在离体模型上培养的生物膜结构发生了变化,LuxS基因缺失会影响生物膜结构。

口腔环境响应性的银纳米颗粒对变形链球菌的抗菌作用

目的开发一种基于淀粉有机模板的银纳米颗粒(silver nanoparticles,AgNPs),该AgNPs在口腔龋损酸性微环境中响应性释放,通过杀灭病原菌抑制生物膜形成和破坏已成熟生物膜的双重抗菌能力,为龋病防治提供新的思路。方法以可溶性淀粉为绿色稳定剂,抗坏血酸为还原剂,硝酸银为银前驱体,使用一锅法制备得到淀粉负载的AgNPs。通过紫外分光光度计、X射线光电子能谱和透射电镜对AgNPs的形貌和结构进行表征,采用细菌稀释平板菌落计数法探究其抗菌能力、使用结晶紫染色探究其抑制生物膜形成能力、通过细菌活死染色探究其破坏成熟生物膜能力。结果紫外分光光度计显示的特征峰和透射电镜图像均表明成功合成了均匀分散在淀粉模板的球形Ag NPs,菌落计数结果显示,在α-淀粉酶的作用下,淀粉模板酶解后释放Ag NPs,对变形链球菌具有良好的杀灭效果(P<0.001),而未经α-淀粉酶作用的淀粉负载的Ag NPs则与对照组结果相比,其差异没有统计学意义(P>0.05)。结晶紫染色结果和细菌荧光显微镜观察图像表明,淀粉负载的AgNPs具有抑制变形链球菌形成生物膜和破坏成熟生物膜的作用。结论使用简单的一锅法绿色合成的淀粉负载的Ag NPs,能在口腔中α-淀粉酶的作用下被释放,杀灭变形链球菌、抑制变形链球菌生物膜的形成,同时还能破坏成熟的生物膜,具有良好的抗菌性能。

龋病患儿唾液中sIgA、MMPs、变形链球菌、远缘链球菌变化与病情程度的相关性

目的探讨龋病患儿唾液中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、基质金属蛋白酶(MMPs)的变化与唾液中变形链球菌、远缘链球菌检出水平的相关性。方法回顾性选取2019年7月至2021年7月自贡市第一人民医院口腔门诊确诊的重度龋病患儿60例(重度组)、轻度龋病患儿60例(轻度组)、无龋病患儿60例(对照组)。采用酶联免疫吸附试验检测3组患儿唾液中sIgA、MMPs水平,采用实时单量PCR技术检测3组儿童唾液中变形链球菌、远缘链球菌水平,并分析sIgA、MMPs与变形链球菌、远缘链球菌的相关性。结果重度组患儿唾液中sIgA、MMP-2、MMP-9水平均分别高于对照组,轻度组sIgA、MMP-9水平分别高于对照组,重度组患儿唾液中sIgA、MMP-2水平均分别高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患儿唾液中变形链球菌、远缘链球菌水平均分别高于轻度组、对照组,轻度组唾液中变形链球菌、远缘链球菌水平分别高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经线性相关法分析,龋病患儿唾液中变形链球菌、远缘链球菌、sIgA、MMP-2、MMP-9水平与龋失补指数均呈正相关关系(r=0.538、0.462、0.668、0.611、0.582,P<0.05)。经多元线性回归法分析,唾液中变形链球菌、远缘链球菌、sIgA、MMP-2、MMP-9水平增加会增大儿童罹患龋齿的风险(P<0.05)。结论唾液中变形链球菌、远缘链球菌、sIgA、MMP-2、MMP-9水平增加与儿童罹患龋齿有关,并且与龋病病情程度呈正相关关系。

变形链球菌对医用钛合金Ti-6Al-4V腐蚀行为研究

采用电化学法、扫描电镜法研究了钛合金Ti-6Al-4V在变形链球菌作用下的腐蚀性。将变形链球菌菌液接种至液体培养基中进行培养两天,然后把钛合金金属与培养基菌液一起共同培养,同时设置无菌组为对照组,同时进行电化学测试。腐蚀30天后,用扫描电镜观察。电化学实验结果显示,含有变形链球菌的自腐蚀腐蚀电位比无菌组低,腐蚀电流密度比无菌组大,扫描电镜结果显示,变形链球菌组的合金表面粗糙度更大。实验结果表明,变形链球菌能增加钛合金Ti-6Al-4V的腐蚀倾向和腐蚀速率。

LED协同Ag/ZnO对变形链球菌再成膜能力影响的实验设计

将科研成果融入实验教学,结合细菌培养、生理指标测定与代谢通路研究,设计了纳米材料抑制细菌再成膜能力的综合实验。实验使用口腔临床常用的发光二极管(LED)治疗灯和Ag/ZnO复合纳米颗粒处理生物膜状龋齿重要致病菌——变形链球菌(S.mutans),证明了这一协同处理对残存S.mutans细菌再成膜能力的抑制作用,并通过研究相关代谢通路,解释了上述抑制发生的机理。该实验设计具有创新性和综合性特点,能够使学生在掌握微生物、生物化学相关知识的同时,增强分析问题、解决问题能力,养成大胆假设、严谨求证的科学精神。

变形链球菌来源的右旋糖酐酶的克隆表达及酶学性质研究

右旋糖酐酶是一种广泛应用于食品、医药、化工等领域的糖酐水解酶。变形链球菌来源的右旋糖酐酶具有发酵周期短,水解效率高等特点。本文成功克隆了来源于变形链球菌的右旋糖酐酶(Smdex)基因,并导入E.coli BL21(DE3)诱导表达Smdex。研究表明,Smdex的最适温度为40℃,该温度下t_(1/2)为196 min,最适pH为5.5,pH=4.5~10可保持80%的酶活,具有良好的热稳定性和pH稳定性。以右旋糖酐T70为底物时,该酶的K_(m)=3.6 mmol/L,k_(cat)=140 s^(-1),可将右旋糖酐T70降解为低聚异麦芽糖(DP=3~10),表明该酶可应用于低聚异麦芽糖的高效制备。Smdex可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的生长,并对内皮细胞、T细胞无毒害作用,初步表明该酶有潜力作为安全的生物防腐剂,水解产物也可作为功能性的益生元。

白屈菜提取物抑制变形链球菌的实验研究

目的:研究白屈菜提取物白屈菜碱和白屈菜红碱对变形链球菌的抑制作用,探讨其防龋机制。方法:用二倍稀释法将白屈菜碱和白屈菜红碱等倍稀释为不同的浓度,用纸片扩散法测定其对变形链球菌的抑制作用,并用液体培养基测定其最低抑菌浓度(MIC),0.16%氯已啶溶液作为阳性对照。采用Spearman相关检验进行两组样本之间的相关分析。结果:白屈菜红碱乙醇溶液出现抑菌圈,而白屈菜碱乙醇溶液的各个浓度则无抑菌圈;100mg/ml的白屈菜红碱抑菌圈(25.8mm)大于对照组氯已啶溶液的抑菌圈(19.4mm);白屈菜红碱溶液浓度与变形链球菌抑菌圈大小之间具有高度相关性(r=0.99,P<0.01)。白屈菜红碱的最低抑菌浓度为0.78mg/ml。结论:白屈菜提取物白屈菜红碱有明显的抗菌作用,提示其可能具有较强的防龋作用。

高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究 Ⅱ合成细胞外多糖能力的实验研究

目的 :探讨来自不同龋敏感者的变形链球菌 (血清型c)临床分离株合成细胞外多糖的能力。方法 :采用红外光谱分析对葡聚糖样本作定性分析 ,用蒽酮法分别定量测定水溶性和水不溶性葡聚糖含量。结果 :同一个体所带不同基因型变形链球菌菌株合成细胞外多糖能力具有差异 ;高龋组个体定植的合成水溶性及水不溶性葡聚糖能力强的菌株所占比例显著高于无龋组。结论 :高龋组变形链球菌 (血清型c)临床菌株的高致龋力与其携带有合成细胞外多糖能力强的菌株密切相关。

中药影响变形链球菌对唾液获得性膜粘附的研究

目的 研究不同传统中药提取物对变形链球菌在唾液获得性膜粘附的影响 ,进一步探讨中药防龋的可能机制。方法 采用唾液包被羟磷灰石 (S- HA )形成实验性获得性膜的体外模式 ,以变形链球菌作为试验菌株 ,用不同的药物提取物分别处理 S- HA和菌细胞 ,观察细菌对 S- HA的粘附情况。结果 两组试验中大部分试验药物均能抑制菌细胞对 S- HA的粘附 ,且随药物浓度的升高而逐渐增强。这些药物中 ,以五倍子的抑制作用表现更为显著 ,其在 1、2、4 mg/ ml时的抑制率可达 10 0 %。

高龋及无龋者变形链球菌临床分离株致龋性研究 Ⅰ对唾液包被羟磷灰石的粘附实验

目的 :探讨来自不同龋敏感者的变形链球菌 (血清型c)临床分离株的粘附能力。方法 :采用液体闪烁计测法测量 3H TDR标记的变形链球菌临床分离株对唾液包被羟磷灰石 (SHA)的粘附。结果 :同一个体所带不同基因型菌株对SHA粘附量差异较大 ;高龋组个体定植的粘附能力强的菌株所占比例显著高于无龋组。结论 :高龋组变形链球菌 (血清型c)临床菌株的高致龋力与其携带有粘附能力强的菌株密切相关。

不同浓度的葡萄糖对变形链球菌初始粘附能力的影响

目的研究不同浓度的葡萄糖对变形链球菌初始粘附能力的影响,同时观察高龋组、无龋组变形链球菌初始粘附能力的差别。方法选取高龋组、无龋组变形链球菌(血清c型)临床分离株各10株及1株参考株UA159,用唾液包被的羟基磷灰石(SHA)模拟口腔中牙面情况。各菌株分别在含3H的0.2%、1.0%、5.0%葡萄糖的液体培养基中培养,配成菌悬液。菌液与SHA作用90min,清洗、吸干,液体闪烁计数测量各样本中粘附于SHA的细菌的量。各变形链球菌菌株在不同浓度葡萄糖条件下对SHA的粘附能力以粘附量CPM值表示。结果变形链球菌高龋组分离株初始粘附能力明显高于无龋组分离株(P<0.05);同时变形链球菌在不同浓度的葡萄糖营养条件下其初始粘附能力也有统计学上的差别(P<0.05),5.0%葡萄糖组粘附力最强,0.2%葡萄糖组粘附力最低,1.0%葡萄糖组粘附力界于两者之间。结论①变形链球菌的初始粘附能力可能与龋病的发生有关;②葡萄糖可能与变形链球菌的初始粘附相关,在一定范围内,葡萄糖可能会促进变形链球菌的初始粘附。

变形链球菌对唾液获得性膜粘附机理的研究Ⅰ.变形链球菌表面粘结素粗提方法的比较

用冷乙醇沉淀法从变形链球菌培养上清液或用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液、６ｍｏｌ／Ｌ脲和２％ＳＤＳ溶液从变形链球菌细胞表面分别粗提变形链球菌表面粘结素。用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳和细菌粘附抑制实验比较４种粘结素粗提物的种类及粘附活性。结果表明４种粘结素粗提物蛋白组成相似，且４种粗提物均有较强的粘附抑制活性，而从培养上清液中提取变形链球菌粘结素对蛋白生物活性损伤小，方法简便易行。

木糖醇对变形链球菌生长和产酸影响的体外实验研究

目的 研究木糖醇对变形链球菌生长和产酸的影响。方法 分别用含有3 %蔗糖、2 %木糖醇的培养基厌氧条件培养变形链球菌,测量培养基的D (60 0 )值和pH值。结果 变形链球菌在木糖醇培养基内生长和产酸均受到明显抑制,在加木糖醇的蔗糖培养基内细菌的生长和产酸也下降。结论 木糖醇可以抑制变形链球菌的生长和产酸,可作为一种理想的防龋甜味剂。

酪蛋白磷酸肽钙磷复合体对变形链球菌生长、产酸的影响

目的：研究酪蛋白磷酸肽钙磷复合体（Casein phosphopeptide-Amorphic Calcium Phosphate，CPP-ACP）对变形链球菌生长和产酸的影响，探讨CPP-ACP作为一种生物防龋制剂的可行性。方法：将变形链球菌ATCC 25175（血清型c）在含糖的BHI培养基中厌氧培养，在实验组中加入不同浓度（0．5％～5．0％（W／V）的CPP-ACP溶液，厌氧培养48h，采用MTT法检测细菌浓度的吸光度值A（A=550nm），采用精密pH计检测培养御清液的pH值，计算pH的变化值ApH（初始pH值-终末pH值）。结果：随CPP-ACP浓度的升高，变形链球菌的吸光度值降低，即变形链球菌的活菌数减少（P〈0．01）；培养物上清液的pH值升高，ApH降低，即变形链球菌的产酸量降低（P〈0．01）。结论：CPP—ACP具有抑制变形链球菌生长、产酸作用，随浓度升高抑制作用增强。

白屈菜红碱对变形链球菌表面疏水性及黏附作用的影响

目的:测定白屈菜红碱对变形链球菌表面疏水性及黏附作用的影响,研究其对变形链球菌黏附的作用机制。方法:将白屈菜红碱对倍稀释为不同浓度的溶液,浓度范围为24.4～781.3μg/ml。采用微生物黏着碳氢化合物法(MATH)测定白屈菜红碱对变形链球菌的细胞表面疏水性,并测定不同浓度的白屈菜红碱溶液对变形链球菌在玻璃表面黏附作用的影响。使用SPSS13.0统计软件包对结果进行处理,各浓度组总体均数之间比较采用单因素方差分析。结果:变形链球菌表面疏水性随白屈菜红碱溶液浓度的升高而逐渐下降,各浓度实验组与对照组均数之间均具有高度显著性差异(P<0.01),24.4～195.3μg/ml4个浓度组之间均无显著性差异(P>0.05);变形链球菌对玻璃表面的黏附抑制率随白屈菜红碱浓度的升高逐渐增高,195.3μg/ml和390.6μg/ml2个浓度组与对照组和其余浓度组之间均有高度显著性差异(P<0.01)。结论:白屈菜红碱对变形链球菌细胞表面疏水性和黏附具有抑制作用,提示其具有良好的防龋应用前景。

葡萄籽和苹果原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究苹果原花青素和葡萄籽原花青素对变形链球菌(Streptococcus mutans)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抑制作用,采用试管液体稀释法和琼脂稀释法抑菌实验测定其最低抑菌质量浓度(MIC)和质量最低杀菌质量浓度(MBC),并通过测定培养基pH值的变化,研究葡萄籽原花青素对变形链球菌产酸能力的影响。结果表明:苹果原花青素、葡萄籽原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌生长都有抑制作用;苹果原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.25、4.00mg/mL,葡萄籽原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.75、2.00mg/mL;苹果原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为4.00、9.00mg/mL,葡萄籽原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为2.00、6.50mg/mL。葡萄籽原花青素质量浓度大于1.00mg/mL对变形链球菌的产酸能力有显著抑制效果。

变形链球菌对唾液获得性膜粘附机理的研究Ⅱ.变形链球菌表面粘结素的筛选和分离纯化

通过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５层析和ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ层析纯化变形链球菌（血清型ｃ）地方株ＷＤ９４６３Ａ表面蛋白，用细菌粘附抑制实验筛选变形链球菌粘结素，并经聚丙烯酰胺凝胶电泳、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳、免疫双向扩散实验、葡糖基转移酶（ＧＴＦ）酶活性测定和氨基酸组分分析进行鉴定。结果发现表面蛋白Ｐ１，分子量约１１７ｋＤ和１２７ｋＤ的非ＧＴＦ蛋白及两种ＧＴＦ酶组分可有效竞争抑制变形链球菌粘附，而另一ＧＴＦ组分则可促进细菌对唾液包被的羟磷灰石的粘附。