变形链球菌Ⅰ型Mutans表面蛋白P_1的粘附作用

对变形链球自Ｉ型Ｓ．ｍｕｔａｎｓＭＴ，Ｒ（血清型Ｃ）菌株表面蛋白Ｐ１分离、纯化、鉴定，经１３１Ⅰ标记后，研究其对无龋成人腮腺唾液膜的粘附性，共观察２２例。结果显示，蛋白Ｐ１能直接粘附于唾液膜，在唾液膜上的粘附量显著大于牛血清白蛋白膜和缓冲液处理的羟磷灰石组（Ｐ＜０．０１），提示蛋白Ｐ１可能是变形使球菌遗传Ⅰ型、血清Ｃ型的重要粘附素之一。

不同浓度壳聚糖对S型变形链球菌抑菌性能影响对比研究

目的:研究壳聚糖(CTS)对S型变形链球菌(S.Mutans)的抑制作用。方法:对比不同浓度CTS与氟化钠(NaF)及生理盐作用于S.Mutans后的OD值,计算ΔpH。结果:在不同浓度条件下,两种药物作用于S.Mutans测得的OD值不同。随着药物浓度增加,OD值表现为下降趋势。OD值比较,NaF组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);CTS组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);NaF组与CTS组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。实验组ΔpH通常小于对照组,表明对照组培养管内S.Mutans的数量较大而且产酸代谢活跃。在含有抑菌制剂的实验组中,培养管内S.Mutans的产酸能力受到显著抑制。结论:CTS与NaF均能抑制S.Mutans生长,本实验浓度条件下浓度越高,抑菌效果越强。在本实验条件下,CTS的抗菌作用与NaF的抗菌作用比较,差异无统计学意义。

柠檬精油、柠檬烯、茶多酚对变形链球菌表面疏水性及黏附的影响

目的:研究天然植物成分柠檬精油(LEO)、柠檬烯(LIM)及茶多酚(TP)对变形链球菌(S.mutans)细菌表面疏水性及黏附能力的影响。方法:取最小抑菌浓度(MIC)以下浓度作为实验浓度;采用微生物黏着碳氢化合物法(MATH),测定S.mutans表面疏水性;采用96孔板结晶紫染色法,评价S.mutans的黏附。结果:LEO、LIM、TP在低于最小抑菌浓度(MIC)时,对S.mutans表面疏水性及粘附具有抑制作用;在一定范围内其抑制作用随浓度增大而逐渐增加(P<0.05);1/2 MIC和1/20MIC时LEO抑制表面疏水性的作用强于LIM和TP(P<0.05)。结论:LEO具有防龋应用前景。

学龄前儿童乳牙釉质发育缺陷对口腔中变形链球菌水平的影响

自从Clarke首先从人类龋齿中分离出变形链球菌到目前,已公认变形链球菌是引起龋齿发生的最主要的细菌。变形链球菌具有粘附和聚集的能力,尽管它粘附、聚集的机制尚不完全清楚,但口腔中的某些因素可以影响变形链球菌的殖居。本研究采用病例对照的方法,比较有无釉质发育缺陷的儿童口腔中变形链球菌的水平,探讨釉质发育缺陷对口腔中变形链球菌殖居的影响。

新型MGB探针特异性检测变形链球菌

目的:设计一种新型TaqManMGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性。方法:提取6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqManMGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性。巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物。TaqManMGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配。将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16μg/L按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线。结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果。TaqManMGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好。TaqManMGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20μg/L。结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqManMGB探针,建立利用TaqManMGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法。

变形链球菌UA159合成自诱导分子2及其影响因素的实验研究

目的：原核表达纯化变形链球菌（S．mutans）UA159 LuxS 蛋白，体外合成有活性的自诱导分子2（AI-2）并观察其合成的影响因素。方法：用基因重组的方法构建表达载体 pET21 a（＋）-luxS，在大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3）中诱导表达 S-核糖基高半胱氨酸酶（LuxS）融合蛋白，镍柱亲和层析纯化、蛋白质印迹法分析鉴定 LuxS 蛋白，透析复性。纯化的 LuxS 蛋白和 S-腺苷高半胱氨酸核苷酶（Pfs）蛋白催化 S-腺苷 L 高半胱氨酸[SAH]合成 AI-2，哈氏弧菌 BB170检测 AI-2活性，并观察 LuxS 蛋白浓度、pH、氟化钠对 AI-2合成的影响。结果：与对照组相比，随着 LuxS 蛋白浓度的升高，体外合成的 AI-2活性增大（P ＜0．001）；当 pH 介于6～10之间时，AI-2活性最强，超出此 pH 范围，AI-2活性明显降低（P ＜0．001）；当氟化钠浓度≥0．3％时，AI-2活性显著降低（P ＜0．05）。结论：利用基因工程技术可以合成具有生物活性的 S．mutans UA159 AI-2；AI-2合成的最适 pH 在6～10之间；氟化钠浓度≥0．3％对 AI-2的合成有抑制作用。

变异链球菌ldh-luc基因荧光报告株对氯己定的敏感性实验研究

目的:探讨变异链球菌ldh-luc基因荧光报告株(荧光报告株)对氯己定的敏感性。方法:将变异链球菌荧光报告株S.mutans ldh-luc和野生菌株分别以浮离态和生物膜态培养于BHI,菌落计数法(CFU)检测氯己定对2种菌株的最小抑制浓度(MIC)、RLU、A_(600),以观测其生长状态及荧光活性的变化及相互关系。结果:氯己定对S. mutans ldh-luc基因荧光报告株和野生株的MICs均为(0. 25±0. 39)μg/ml。氯己定作用30 min后,浮游态和24 h生物膜S. mutans ldh-luc基因荧光报告株的RLU、A_(600)、CFU呈下降趋势;作用60 min后,RLU、CFU下降至检测水平以下,去除氯己定,加入BHI培养基培养90 min,仍未检出RLU,氯己定作用前后的差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论:S. mutans ldh-luc基因荧光报告株能准确反映氯己定对生物膜中细菌的作用。

茶树精油对变异链球菌抑菌浓度及效力的探究

目的:探讨茶树精油(TTO)对变异链球菌(S.mutans)体外抑菌的作用。方法:利用牛津杯法检测TTO对S.mutans的抑菌效果;标准微量肉汤稀释法测定TTO对S.mutans的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),MTT染色法计算不同时间下TTO的抑菌率和杀菌时间,评估TTO对S.mutans抑菌效力。对照组分别为0.2%氯己定(CHX)和0.5%Tween-80。结果:实验结果显示抑菌环(SBR)大小为(11.36±1.68)mm^(20.26±3.64)mm;MIC为0.125%,MBC为0.25%。0.25%TTO在24 h内可以完全杀灭细菌,0.125%TTO在12、24内抑菌率分别为(90.97±0.77)%、(69.94±4.46)%,与对照组相比,差异无统计学意义(t 12=7.390,P 12=0.947;t 24=4,627,P 24=0.219)。0.25%TTO在48 h时抑菌率下降为68.63%±0.47%,与对照组相比差异无统计学意义(t=1.715,P=0.068)。结论:TTO对S.mutans抑菌作用显著,0.125%TTO可抑制S.mutans活性,0.25%TTO可起到灭菌作用,抑菌效果稳定。

替代失活法构建变形链球菌LuxS基因缺陷株

目的 LuxS基因是变形链球菌生物膜早期形成过程中的关键基因,构建该基因的缺陷菌。方法采用长臂同源多聚酶链反应(LFH-PCR)方法构建含红霉素耐药基因片段的LuxS基因上、下游同源序列的连接片段,转化到变形链球菌中,在红霉素的平板上筛选缺陷菌株,并采用PCR鉴定。结果对变形链球菌LuxS基因缺陷菌株进行PCR和DNA序列测定分析证实构建成功。结论成功构建出变形链球菌LuxS基因的缺陷菌株,为后期针对变形链球菌LuxS基因的相关研究奠定基础。