非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测新疆特种乳中掺加的牛乳

新疆特种乳资源丰富,具有重要的商业价值。近年来乳制品掺假问题时有发生,准确鉴别特种乳中乳源动物成分,防止牛乳掺假具有重要的意义。本研究采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)对驼乳、马乳、驴乳、山羊乳与牛乳等特种乳的乳清蛋白及酪蛋白进行乳间差异性分析,建立基于牛乳特征蛋白质多态性的检测方法,并研究不同热处理工艺对检测方法稳定性、灵敏度的影响。结果表明,牛β-乳球蛋白可作为特种乳中掺加牛乳的检测靶标,热处理会使样品中蛋白质发生变性,导致掺加牛乳检出限的升高。基于牛β-乳球蛋白的条带强度与牛乳掺加百分比建立回归方程,相关系数为0.9779~0.9998,定量范围在5%~100%之间。本研究为新疆特种乳中掺加牛乳的检测,提供了一种准确、灵敏和经济的方法。

反应型表面活性剂RCS-10改性聚丙烯酰胺的流变性能研究

以十八醇聚氧乙烯醚(AEO)和甲基丙烯酸异氰基乙酯(IEM)为原料合成了一种氨基甲酸酯表面活性剂(RCS-10),采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和核磁共振(1H-NMR)对其进行了表征,并在室温下通过表面张力法测得RCS-10的临界胶束浓度(CMC)为5.19×10^(-4)mol/L.此外,还将RCS-10与丙烯酰胺、2-丙烯酰胺-2-甲基丙烷磺酸和丙烯酸共聚合成了一种新型疏水缔合聚合物(RHPAM),并对其水溶液的流变性能进行了分析.结果表明,在120℃、剪切速率为170 s^(-1)的条件下,改性和未改性聚丙烯酰胺溶液的黏度保持率分别为97.73%和87.07%.由此可见,RCS-10的加入提高了聚丙烯酰胺的耐热性和抗剪切性,并提高了聚丙烯酰胺的储存和损耗模量,表明其结构稳定性得到了增强.因此,RHPAM在改善压裂液耐热性、抗剪切性和提高采收率方面具有很大的潜力.

高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以高粱抗、感丝黑穗病3号生理小种部分品种(S95062B、7050B、2381R、LR625;622A、622B、矮4)为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行抗病基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个高粱微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:电泳时间为92～105min;银染温度为27.8～29.0℃;显色温度为32℃左右。

采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化PCR产物的观察

目的 :观察采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化目的 PCR产物的效果。方法 :使用不同的 31对引物 ,4 5例标本行 PCR扩增出不同的目的 DNA片段 ,将每一份 PCR产物分为 2份 ,其中 1份直接测序 ,为对照组 ;另 1份则做非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,以分离出的目的 DNA片段单链为模板行 2次 PCR,对 2次 PCR产物测序 ,此为实验组。结果 :实验组只有 4例不能被测序仪判读 (4 / 4 5 ) ,而对照组有 2 4例不能被测序仪判读 (2 4 / 4 5 ) ,两组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1 )结论 :根据单链DNA片段形成构象的不同来纯化

香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微卫星分子标记的方法,广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中。该方法由于操作繁琐,目前在食用菌领域的应用尚不广泛。以香菇为研究对象,建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程,并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化。结果表明,加样缓冲液与PCR反应液体积比为1∶2,95℃变性2~5min,置于冰上冷却15~20min,银染7min,银染后胶板用去离子水洗5~10s是正交试验的较优处理组合。试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程,该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点,对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值。

聚丙烯酰胺凝胶电泳前活性染料与蛋白质共价染色的条件探索

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳前染色法,考察了多种类型活性染料与牛血清白蛋白共价染色的条件。实验发现,活性蓝KN-R型标记效果最佳,其优化标记条件为:pH10.0,60℃,50min,蛋白检出限达200ng,重复性和测试范围内的定量性较好,可在电泳时直接实时观测,作为蛋白标示剂有一定的应用前景。

木薯SSR标记非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以木薯品种为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行木薯重要农艺性状基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个木薯微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系:TEMED用量为80μL,10%AP用量为1 200μL,电泳时间为60～90 min。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳在大鼠海马组织蛋白分离中的应用

目的 :探索应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白的最佳条件。方法 :选用不同 p H的正极缓冲液和样品蛋白上样量 ,应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离大鼠海马组织蛋白质。结果 :在其它条件不变的情况下 ,p H9.0的正极电泳缓冲液以及 40～ 6 0 μg/孔样品蛋白上样量时 ,可得到分辨率高、条带多而清晰的电泳图谱。结论 :应用 p H9.0的正极电泳缓冲液和样品上样量为 40～ 6 0 μg/孔时 ,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,可成功地分离大鼠海马组织蛋白。

基于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的菜心SCoT分析

以菜心(Brassica rapa var.parachinensis)抗小菜蛾品种Caixin65和感小菜蛾品种Caixin69及6份F2株系为材料,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测菜心抗虫株系的SCoT多态性,同时进行SCoT多态性的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测效率、遗传多样性分析和差异条带克隆分析。结果表明,非变性聚丙烯酰胺凝胶能检测出亲本与子代间的SCoT多态性和遗传多样性变化,条带数量较多且清晰,提高了SCoT标记检测效率。选取亲本的10条非变性聚丙烯酰胺凝胶差异片段克隆测序,获得感虫序列4条、抗虫序列6条,GENSCAN预测其中8条具有启动子、终止子、阅读框等基因结构序列。同源性检索分析表明,感虫序列分别与泛素羧基末端水解酶mRNA序列、大白菜克隆序列、白菜线粒体丙酮酸载体蛋白序列、甘蓝基因组编码未知蛋白的HDEM序列同源,抗虫序列分别与白菜RNA假尿苷合酶4线粒体mRNA序列、京水菜线粒体DNA序列、白菜未知蛋白mRNA序列、白菜4-香豆酸:辅酶A连接酶mRNA序列、大白菜克隆序列、哈茨木霉mRNA序列同源。本研究提高了SCoT标记清晰度、遗传多样性检测水平和差异片段克隆的精准性,使得SCoT成为批量克隆差异片段的高效工具,有助于挖掘SCoT功能性标记信息,开展初步的功能基因组学研究,提高优异株系筛选鉴定效率,加快育种进程,为菜心抗虫性机制的进一步研究提供理论基础。

脲酶聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带染色方法的建立与应用

目的 :建立脲酶聚丙烯酰胺凝胶电泳活性区带染色方法用于测定脲酶分子量和纯度鉴定。方法 :建立十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PACE)梯度凝胶体系和电泳条件等 ,根据不同来源脲酶活性染色区带位置 ,鉴定出PAGE蛋白区带中脲酶区带位置 ,进一步测出脲酶的相对分子量。结果 :用新建立的SDS -PAGE脲酶活性区带染色方法 ,应用于不同来源的脲酶相对分子量测定和纯度鉴定 ,结果准确 ,重复性好 ,与凝胶过滤法测定分子量的结果相关性好。结论 :我们建立的SDS -PACE脲酶活性区带染色方法 ,应用效果良好 ,有推广价值。

癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析非变性蛋白质分子量的适用性鉴定

目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相关性。结果:5种标准分子量蛋白质的四级结构完整,log Mr与x线性相关性较低;但其中的α-牛乳白蛋白、鸡蛋清白蛋白、牛血清白蛋白的log Mr与x线性相关性较好,相关系数平方值(R2)>0.94。结论:SDecS-PAGE可用于测定有限种类的非变性蛋白质的分子量。

几种鲑鳟鱼血清蛋白非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的研究

采用非变性聚丙烯凝胶电泳的方法分析了硬头鳟、金鳟、虹鳟、北极红点鲑和溪红点鲑血清蛋白的组成成分及其含量。结果显示,硬头鳟、金鳟和虹鳟三者之间的遗传距离最小,硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与溪红点鲑的遗传距离最大;硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与北极红点鲑处于同一亚组,而溪红点鲑独处于另一亚组。研究结果表明硬头鳟、金鳟和虹鳟三者与溪红点鲑的亲缘关系远于与北极红点鲑的关系;同时还表明,以聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鲑鳟鱼血清蛋白的方法简单易行、重复性好。本研究结果对鲑鳟鱼的种属鉴定、良种选育、品种改良和遗传结构分析提供了试验依据;虹鳟的繁养殖需进一步规范化和标准化,减少蛋白遗传基因的流失,从根本上预防大规模疾病的暴发。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物肌肉蛋白热变性的研究

分别对鸡、牛、猪、羊、鱼等五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理,对处理前后的样品进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示五种动物肌肉组织经不同温度处理,所得电泳图谱具有显著差异,反映蛋白质变性与温度存在密切相关性。因此,可采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物组织蛋白的热变性程度,从而应用于肉制品加工过程中热熟程度的判定。该方法特异性和敏感性较强,操作简单,结果判定直观可靠。

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白

目的 :应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统研究切割海马伞后大鼠海马组织蛋白的生化改变 ,为分离、纯化海马中诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质奠定基础。方法 :取SD大鼠 ,行单侧切割海马伞术 ,于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马组织。进行 10 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。观察切割海马伞海马和正常海马的蛋白表达差异。结果 :两者在低分子量区存在一条差异性蛋白条带。其中正常海马组织的条带染色最浅 ,切割海马伞海马组织中 10天组和 2 0天组染色较深 ,14天组染色最深。结论 :结合我们过去实验 ,本研究中切割海马伞海马及正常海马组织蛋白出现的差异性条带中 。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物肌肉蛋白热变性的研究

分别对鸡、牛、猪、羊、鱼等五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理,对处理前后的样品进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示五种动物肌肉组织经不同温度处理,所得电泳图谱具有显著差异,反映蛋白质变性与温度存在密切相关性。因此,可采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定动物组织蛋白的热变性程度,从而应用于肉制品加工过程中热熟程度的判定。该方法特异性和敏感性较强,操作简单,结果判定直观可靠。

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴别哈蟆油药材及其伪品

目的建立哈蟆油与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油水溶性蛋白的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis,Native-PAGE)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴别方法,并对2种电泳方法进行比较。方法采用Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳系统,分别对不同产地哈蟆油与其伪品的水溶性蛋白的组成及其分子量分布范围进行比较研究。结果 Native-PAGE实验结果显示:哈蟆油与桓仁林蛙油均具有6条特征谱带,黑龙江林蛙油具有5条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为2条、1条和1条。SDS-PAGE实验结果显示:哈蟆油、黑龙江林蛙油和桓仁林蛙油均具有11条特征谱带,而蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油的特征谱带数目分别为5条、6条和6条。2种电泳图谱中,哈蟆油等正品药材与伪品蟾蜍油、牛蛙油和青蛙油在特征谱带位置等特征上有明显区别。结论 Native-PAGE和SDS-PAGE两种电泳方法均可用于哈蟆油与类似品和伪品的鉴别,为哈蟆油质量评价和控制方法提供了一种简易的鉴别方法。

疏水缔合聚丙烯酰胺在表面活性单体胶束溶液中的制备及其流变特性

配制了表面活性单体2-丙烯酰胺基十二烷磺酸钠(NaAMC12S)与十二烷基硫酸钠(SDS)的胶束溶液,分别测定了强疏水单体N-正十二烷基丙烯酰胺(C12AM)在两种胶束溶液中的增溶性能;在此基础上,于两种胶束溶液中分别进行了丙烯酰胺(AM)与C12AM的胶束共聚合,制备了疏水缔合聚丙烯酰胺(HAPAM),它们分别为二元共聚物C12AM/AM与三元共聚物C12AM/NaAMC12S/AM;测定了两种共聚物的红外光谱;采用荧光探针法与表观粘度法重点研究了它们的疏水缔合性与流变性能.结果表明,在表面活性单体NaAMC12S的胶束溶液中,可顺利地实现AM与疏水单体的胶束共聚合,由于表面活性单体也参与了共聚合,故制得的产物为三元共聚物C12AM/NaAMC12S/AM;与在SDS胶束溶液中制备的二元共聚物C12AM/AM相比,前者的疏水缔合性更强,其强疏水缔合性以强疏水单体C12AM的贡献为主,以表面活性单体NaAMC12S的贡献为辅.

SSR标记小麦抗白粉病基因变性凝胶电泳体系的优化

为寻找适合SSR标记定位小麦抗白粉病基因的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的理想体系。主要研究Arc+Bis占凝胶的质量浓度、Arc/Bis质量比、上样量、电泳电压及染色等因素对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳效果的影响。结果表明电泳效果较好的体系为:凝胶中Arc+Bis 60g/L、m(Arc)∶m(Bis)=29∶1、上样量5μL(含φ=20%的6×loading dye)、1 500V恒压、强碱法染色。此变性凝胶电泳体系下得到的图谱较为清晰。

一种具有表面活性的双尾疏水缔合丙烯酰胺共聚物

文章以自制双尾疏水丙烯酰胺单体丙烯酰胺(N-苄基-N-辛基丙烯酰胺,N-benzyl-N-octylacrylamide,BOAM)和表面活性单体(辛基酚聚氧乙烯醚丙烯酸酯,OP-10-AC)与丙烯酰胺(acrylamide,AM)水溶液共聚合成新型疏水缔合共聚物(AM-Na A-OP10AC-BOAM)。实验结果表明,当聚合物浓度大600mg/L时,表观黏度迅速增加,表现出明显的缔合行为;共聚合物溶液具有良好的黏弹性和表面活性,SEM扫描电镜照片显示共聚物溶液中存在网状的缔合微观形貌特征。

鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的SDS-PAGE凝胶电泳比较研究

目的:探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法:运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC-T6增殖的影响。结果:炮制后的醋鳖甲所含成分增多,一级谱带相对分子质量降低,导致小分子肽类物质产生;生鳖甲和醋鳖甲均具有抗肝纤维化的作用,但醋鳖甲的药效优于生鳖甲。结论:鳖甲炮制前后活性部位明显差异,为临床选择用药及进一步活性成分研究提供依据。