烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备

将烟草天蛾Manducasexta几丁质酶基因克隆入融合表达载体pET-28a,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达。表达菌株经0.5mmolLIPTG诱导6～8h后,几丁质酶表达并形成包涵体。在Ni2+-NTA亲和柱上经变、复性和纯化,得到可溶的几丁质酶。表达产物经Western印迹鉴定。采用切胶回收的方法切割回收包涵体,并将回收产物免疫新西兰大白兔,ELISA检测抗体效价达1∶20000。Western印迹检测证明抗体特异性良好。