未变性胶原生物表面活性剂的表面张力及其表面吸附

研究了一种未变性胶原生物表面活性剂(CBS)水溶液的表面张力和表面吸附性质。结果表明,CBS水溶液的表面张力随CBS浓度的增大而降低,最终趋于平缓,达到55.92 mN/m。在等电点附近,CBS表面静电荷降低,使其表面张力显著降低。在低温下,CBS溶液的表面活性较好,当温度继续升高(>35℃),由于变性作用,CBS溶液的表面张力急剧增大。CBS水溶液的吸附属于Langmiur型吸附,根据γ-lgC、Γ-C以及C/Γ-C拟合曲线计算得到饱和吸附量相似,分别为1.86×10-10,1.97×10-10和2.03×10-10 mol/cm2。吸附自由能为-3.53kJ/mol,表明其在标准状态下可以自发进行。

产物变性胶纯化实现连续PCR的多轮扩增

产物弥散成片是PCR操作中一种比较常见的异常现象,在连续PCR实验中会导致扩增的最终失败。这种异常产生的内在机制是扩增过程中非全长部分链的合成、积累及其对后续扩增的干扰。缓解这种PCR扩增异常现象的途径包括抑制非全长链的合成,以及在重复扩增之前去除模板中的非全长链成分。本文显示通过碱变性琼脂糖电泳然后割胶纯化获得下一轮扩增模板的方式能够有效地避免连续扩增中产物弥散成片的异常扩增。为有效地进行重复PCR扩增提供了一个新的途径。结果进一步证实了正常PCR扩增中非全长链产生的不可避免及其对新生链合成的干扰效应。

基于未变性胶原生物表面活性剂的性能研究

研究了一种基于未变性胶原生物表面活性剂(简称LSCS)在水溶液中的表面吸附性质。LSCS生物表面活性剂经表面张力法测得其临界胶束浓度(CMC)为2.0×10-3mg/mL,在CMC时表面张力为54.5mN/m;LSCS水溶液的表面饱和吸附量为6.61×10-11mol/cm2,其吸附等温线属于Langmuir型等温线。经Gibbs吸附公式分析表明:LSCS水溶液的表面吸附在标准状态下能自发进行。

基于胃蛋白酶耐受性的变性胶原蛋白定量分析方法

基于胶原蛋白的蛋白酶耐受性,建立变性胶原蛋白的定量分析方法。制备6组已知含量比的变性/非变性胶原蛋白混合样品,在液态胶原pH值约2.0的条件下,添加胃蛋白酶对样品中的变性胶原蛋白进行酶切,使其成为短肽,胃蛋白酶与胶原蛋白的质量比为1∶5,温度为30℃,消化24 h;然后采用NaCl沉淀法(NaCl终浓度为2 mol/L)对样品中的非变性胶原蛋白进行沉淀回收,并通过羟脯氨酸测定法检测其含量比。结果显示,6组样品中非变性胶原蛋白的回收率为89.96%~99.24%,表明本方法可以充分酶解变性胶原蛋白,而非变性胶原蛋白得以沉淀回收,可用于定量分析液态或海绵状、粉末状等酸溶性胶原蛋白原料和产品中变性胶原蛋白的含量比。

高效液相色谱法测定非变性Ⅱ型胶原蛋白含量的研究

研究非变性Ⅱ型胶原蛋白含量的测定方法,对样品中的目标成分进行测定和方法学验证分析。通过高效液相色谱法(HPLC)测定非变性Ⅱ型胶原蛋白的含量,考察线性、精密度、准确度、耐用性。实验结果表明,非变性Ⅱ型胶原蛋白(以L-羟脯氨酸计),在0~398.48μg/mL范围内线性关系较好;精密度较好;平均回收率为99.2%,RSD为0.87%;耐用性较好。经过全面的方法学验证,该实验方法稳定可靠,适用于高效液相色谱法测定非变性Ⅱ型胶原蛋白的含量,并可应用于相关产品的质量控制工作。

非变性牦牛骨胶原蛋白的提取与表征

三股螺旋结构是胶原蛋白的关键结构特征,胶原蛋白变性会破坏三股螺旋结构进而严重影响其生物功能。牦牛是高寒地区特有的半野生牛种,主要生活在我国的青藏高原。我们开发了一种温和的生物工艺,从牦牛骨中提取制备了高品质的牦牛胶原蛋白(Yak ossein,YO)。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和圆二色谱(CD)结果表明,我们提取得到的为I型牦牛胶原蛋白,未发生降解,并且整体保持完整的三股螺旋结构。酶切实验进一步表明,提取的YO未发生变性,它可以有效抵抗胃蛋白酶的降解。同时,我们建立变性胶原蛋白的靶向结合实验,利用高特异性的荧光多肽探针来检测牦牛胶原蛋白的变性程度。该靶向探针对提取的YO完全没有结合能力,表明该YO为非变性胶原蛋白。细胞实验表明,YO对成纤维细胞有良好的粘附能力,并且可以显著促进其细胞增殖。

一种快速有效检测SSR标记的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法

聚丙烯酰胺凝胶银染法是一种具有高分辨率检测SSR标记的有效方法，然而传统的银染方法存在操作步骤较多、所需时间较长及试剂种类与用量较多等不足．本研究利用菜心和烟草SSR标记为研究对象，建立一种能快速有效检测其PCR扩增产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法．该方法包括染色和显影2个主要操作步骤，整个银染流程耗时6～7min，只需要AgNO3、NaOH和甲醛3种试剂，所检测SSR标记的DNA条带清晰、易辨．与其他银染法相比，本研究建立的银染法具有易于操作、耗时少、所需试剂种类和用量少及检测效果好的优势．

触变性硅凝胶电解液的制备及性能

以超细SiO2 粉末为硫酸溶液胶凝剂、聚丙烯酰胺为凝胶稳定添加剂制备胶体蓄电池用触变性硅凝胶电解液。研究了SiO2 粉末和H2 SO4 用量及聚丙烯酰胺添加量对凝胶电解液性能的影响 ,并分析讨论了SiO2 粉末胶溶形成触变性硅凝胶电解液的机理和特点。将制得的凝胶电解液用于 7Ah固定型胶体蓄电池中 ,电池 10h率容量可达 7 14Ah ,为相同条件下普通液体蓄电池容量的 94 3 %。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的两种方法比较

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段是分子生物学中的常用技术,尤其针对于DNA小片段的回收。本试验对比了两种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA小片段的方法(煮沸法和水浴法),并用无水乙醇和3mol/L醋酸钠共沉淀纯化DNA小片段。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测回收结果,通过紫外检测进行定量分析,结果显示:水浴法比煮沸法的回收率高。水浴法结合乙醇沉淀法还具有经济和操作简单的优点,可以广泛应用。

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。

冷却牦牛肉贮藏过程中优势菌的PCR-变性梯度凝胶电泳分析

应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究托盘保鲜膜包装的冷却牦牛肉在4℃贮藏过程中的微生物多样性及其动态变化。直接从样品中提取细菌总的DNA,采用降落PCR扩增16S rDNA的V3可变区序列,再通过DGGE得到动态变化的指纹图谱,并对主要条带进行测序分析。结果表明:检测到的优势腐败菌为Pseudomonas sp.(假单胞菌)、Lactococcus sp.(乳球菌)、Acinetobacter sp.(不动杆菌)、Brochothrix thermosphacta(热死环丝菌)、Enterobacteriaceae bacterium(肠杆菌科细菌),此外还检测到Uncultured Citrobacter sp.(非培养的柠檬酸杆菌)和Staphylococcus sp.(葡萄球菌)。

一种从非变性聚丙烯凝胶中回收小片段DNA的方法

利用高分辨率的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、纯化特异性小片段DNA的首选方法,也是开展后续多种分子生物学试验的前提。本试验比较了改良煮沸法(液氮研磨+煮沸+低温浓缩)、煮沸法及直取法回收小片段DNA,以回收样品模板进行第二次PCR扩增,结果表明:改良方法回收的DNA的纯度高,特异性好,回收率与经典煮沸法相当。在保证回收产物的特异性时,用低温浓缩法替代乙醇/醋酸钠共沉淀也具有可行性及一定的创新性。

SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶快速银染方法的建立

针对传统聚丙烯酰胺凝胶电泳银染方法存在染色时间长、步骤繁琐,难以大批量试验等诸多不利因素,对改良的银染检测方法与文献报道的4种银染检测方法的染色效果、时间及试剂成本等进行对比分析。结果表明,改良方法省略前期的漂洗与固定步骤,只进行银染、漂洗、显影和终止4个步骤,整个银染过程耗时12 min,较其他方法耗时少,目标片段较清晰,试剂用量少,过程较为简单,可批量操作。

变性Ⅰ型胶原对内皮细胞增殖、迁移及血管形成相关蛋白合成的影响

目的·探讨变性Ⅰ型胶原对内皮细胞增殖、迁移及血管生成相关蛋白合成的影响。方法·人脐静脉内皮细胞传代培养后分别接种于正常胶原(正常胶原组)、半量正常胶原(半量胶原组)和变性胶原(变性胶原组)包被的培养板上,2 d后用CCK-8法检测细胞增殖活性,划痕实验观察细胞迁移能力,Western blotting检测膜型基质金属蛋白酶-1(membrane-type 1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达水平,ELISA法检测血管生成素1(angiopoietin 1,Ang-1)和Ang-2的蛋白分泌情况。结果·CCK-8法检测结果显示,变性胶原组细胞的增殖活性显著高于正常胶原组和半量胶原组(均P<0.05);划痕实验结果显示,变性胶原组细胞的迁移能力最强,16 h即可将划痕基本完全覆盖。变性胶原组MT1-MMP和VEGF表达水平均明显高于其他2组(均P<0.05),Ang-2蛋白分泌量显著高于正常胶原组(P<0.05);但Ang-1分泌与其他2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论·变性Ⅰ型胶原能促进内皮细胞增殖、迁移,增加MT1-MMP、VEGF、Ang-2的表达,提示变性胶原在创面修复的血管化过程中可能有积极作用。

皮肤胶样变性

患者男,47岁。主诉:下颌部丘疹、斑块2年余。现病史:患者2年前下颌部出现似黄豆大的丘疹,用手挤压后,皮损未见明显好转反而逐渐增至蚕豆大,日光照射后加重。6个月前皮损突然增多、增大,并融合成斑块,于2004年3月10日来镇江市疾控中心门诊就诊。

腈纶胶与变性腈纶胶印花原糊的研究

腈纶纺丝下脚及废丝经烧碱水解,腈基水解成酰胺基及羧基,便形成高分子电解质,制品为腈纶胶;再经部分交联,使含固量降低制成变性腈纶胶,两者均可用作活性染料的印花原糊.本文就腈纶胶、变性腈纶胶与活性染料的反应性、印花给色量、可洗性、流变性、含固量的降低等方面进行研究,证明变性腈纶胶完全可以取代海藻酸钠糊作为活性染料的理想印花原糊.

结节性胶样变性

报告1例结节性胶样变性。患者女,53岁。因面部起半透明的丘疹、结节和斑块伴轻微瘙痒8年就诊。组织病理检查显示真皮全层可见团块状淡红色无定形的物质,内有许多裂隙和散在分布的成纤维细胞。PAS染色阳性,刚果红染色阴性。弹性纤维染色示胶样物质团块内和周围有团块状变性的弹性纤维。符合结节性胶样变性的诊断。组织病理上该病需与成人胶样粟丘疹、结节性皮肤淀粉样变性及进行性获得性淋巴管瘤等鉴别。

变性梯度胶电泳对结膜炎细菌多态性分析

目的应用聚合酶链反应-变性梯度胶电泳(PCR-DGGE)研究泪液细菌多态性和致病病原体。方法直接从泪液标本中抽取总DNA,扩增16S rDNA V3区,DGGE分离后测序与传统培养方法进行比较,并作出相应的评价。结果检测131份标本,其中59份化脓性结膜炎标本54份呈阳性结果,39份非化脓性结膜炎标本15份为阳性,而34份正常泪液标本6例扩增出目的片段。检测细菌种类依次为:葡萄球菌、棒状杆菌、链球菌、不动杆菌、枯草杆菌、假单胞菌、丙酸菌属及泛菌属。有3个序列在属的水平上不能被确定,其序列分别与肠细菌、不经培养的真细菌及不经培养的β蛋白细菌有高度的序列相似性。培养方法只对葡萄状球菌、棒状杆菌、链球菌、假单胞菌,以及克雷伯氏杆菌属呈阳性。结论 PCR-DGGE印迹技术和16S rDNA序列分析能快速识别细菌性结膜炎患者中的病原菌,而且是检测和鉴定那些不能用传统培养法检测的单种细菌或多种细菌眼部感染的较为适宜的方法。

马铃薯SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶银染干胶的简易制备

通过对马铃薯SSR标记变性聚丙烯酰胺银染凝胶及简易制备干胶结果的比较分析,提出了简易的干胶制备方法。