富含小鼠骨髓间充质干细胞的生物活性小鼠烧伤变性脱细胞真皮基质的制备

目的探讨富含小鼠骨髓间充质干细胞的生物活性小鼠烧伤变性脱细胞真皮基质(DADM)的制备。方法取12只BALB/c小鼠,背部皮肤造成20%体表总面积深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)。取烧伤皮肤,去除表皮后,按随机数字表法分为聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)组和乙二胺四乙酸(EDTA)组,每组15个样本。Triton X-100组样本置于2.5g/L Triton X-100-2.5g/L胰蛋白酶混合溶液中持续振荡洗脱24h,EDTA组样本置于0.2g/L EDTA-2.5g/L胰蛋白酶混合溶液中持续振荡洗脱24h制备小鼠DADM。对DADM行大体观察,扫描电镜下观察DADM胶原纤维的结构及排列,荧光显微镜下观察DADM的组织结构。将小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)以每孔2×10^5个的浓度接种于2组小鼠DADM中,制备成具有生物活性的小鼠DADM。培养3d,苏木素-伊红染色观察具有生物活性的小鼠DADM的组织结构,免疫荧光法观察具有生物活性的小鼠DADM中BMSC的分布及数目;细胞计数试剂盒8检测培养2h、1d、3d、5d具有生物活性的小鼠DADM中BMSC的增殖情况。对数据行重复测量方差分析及t检验。结果(1)2组小鼠DADM外观均呈白色,具有一定的韧性及弹性。2组小鼠DADM呈良好的三维多孔网状结构,EDTA组小鼠DADM胶原纤维连续性良好,Triton X-100组小鼠DADM胶原纤维发生不同程度断裂。2组小鼠DADM均洗脱完全,胶原纤维疏松、排列紊乱,EDTA组小鼠DADM组织结构连续性较Triton X-100组佳。(2)培养3d,2组具有生物活性的小鼠DADM中BMSC均分布均匀,EDTA组具有生物活性的小鼠DADM中BMSc为(37±7)个,显著高于Triton X-100组的(25±8)个,t=0.128,P<0.05。培养2h、1d,Triton x-100组和EDTA组具有生物活性的小鼠DADM中BMSC增殖能力相近(t=1.292、0.656,P>0.05);培养3、5d,EDTA组具有生物活性的小鼠DADM中BMSC增殖能力显著高于Triton X-100组(t=2.309、14.128,P<0.05或P<0.01)。结论EDTA洗脱制备的小鼠DADM具有更佳的三维多孔网状结构,胶原纤维连续性好;移植BMSC制备的具有生物活性的小鼠烧伤DADM中BMSC分布均匀、数量多、增殖能力强,有望成为较佳的自体真皮替代物。