癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析非变性蛋白质分子量的适用性鉴定

目的:鉴定癸基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDecS-PAGE)是否适于分析非变性蛋白质的分子量。方法:以不同SDecS-PAGE凝胶、电泳缓冲液分析5种非变性标准分子量蛋白质,观察蛋白质亚基解离情况,测定分子量对数值(log Mr)与迁移率x之间的相关性。结果:5种标准分子量蛋白质的四级结构完整,log Mr与x线性相关性较低;但其中的α-牛乳白蛋白、鸡蛋清白蛋白、牛血清白蛋白的log Mr与x线性相关性较好,相关系数平方值(R2)>0.94。结论:SDecS-PAGE可用于测定有限种类的非变性蛋白质的分子量。

一种适用于胡杨叶片非变性蛋白质提取的方法

为探索适用于胡杨叶片非变性蛋白质的提取方法,以采自内蒙古额济纳旗天然胡杨林中胡杨成熟叶片为材料,采用咪唑法、Bis-Tris法、Tris-HCl法和新构建的Tris-SSAD法4种非变性蛋白质提取策略,分别用于提取胡杨叶片蛋白质样品;随后进行第一维非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(1^(st)-DE:Native-PAGE)。相比之下,只有Tris-SSAD法获得了清晰、条带数目较多的Native-PAGE图谱,且结合第二维变性凝胶电泳(2^(nd)-DE:SDS-PAGE)可成功分离出较多蛋白质复合体亚基或相互作用蛋白质分子,证明了Tris-SSAD法非变性温和提取特性。研究建立并优化了适用于胡杨叶片的非变性蛋白质提取方法,为后续进一步分析蛋白质与蛋白质相互作用及蛋白质复合体功能提供了实验基础。

蛋白质变性和第一个蛋白质变性理论

六十七年前我国学者、著名生物化学家吴宪教授提出世界上第一个蛋白质变性理论、开创这一领域的先河。时过境迁,六十多年来科学、技术突飞猛进,人类对蛋白质的认识取得了重要进展,但是这一理论仍然光辉照人,不仅具有重要的科学意义,而且激励后来人顽强努力、攀登新的高峰。

鱼排酶解物对鳙鱼鱼糜冻藏过程中蛋白质变性的影响

利用木瓜蛋白酶、低温碱性酶、风味蛋白酶酶解红鱼(Sciaenops ocellatus)鱼排,分别获得木瓜蛋白酶酶解物(PPH)、低温碱性酶酶解物(LPH)和风味蛋白酶酶解物(FPH).对3种酶解物化学成分及氨基酸组成进行分析,结果显示,3种酶解物中总氨基酸含量都在70%以上,总氮含量为82.12%～84.61%.酶解物分别以5%(质量比)量加入鳙鱼(Aristichthys nobilis)鱼糜中,冻藏于-20℃.测定冻藏过程中肌原纤维蛋白质盐溶性和Ca2+-ATPase活性的变化,同时测量鱼糜凝胶弹性的变化,并对冻藏样品进行扫描电镜观察,抗冻效果同商业抗冻剂(4%蔗糖、4%山梨醇、0.3%多聚磷酸盐混合剂)进行比较.结果表明,各酶解物能够在一定程度上抑制鱼糜蛋白质的冷冻变性,延缓肌原纤维蛋白质盐溶性和Ca2+-ATPase活性的下降,鱼糜凝胶质量下降减少,其中木瓜蛋白酶酶解物具有最好的效果.

冻结速率和冻藏温度对文蛤蛋白质冷冻变性的影响

利用IMP热电偶测温系统，对文蛤分别在-18℃和-30℃冻结温度下的冻结过程进行了测量，对-18℃和-30℃下3种贮藏形态的贝肉冻结样品和冻藏样品肌原纤维蛋白的Ca^(2+)-ATPase活性、Mg^(2+)-ATPase活性、盐溶性蛋白溶解度及添加抗冻剂后防止其冷冻变性的影响进行了研究。结果发现，冻结对贝肉蛋白质变性影响不大，冻藏使蛋白质发生显著的变性，温度低的变性小；在贮藏贝肉的3种形态中，无完整细胞形态的贝糜的变性幅度最大，碎贝肉次之，贝肌肉形态的保持得较好；添加抗冻剂能有效防止贝肉蛋白质冷冻变性，尤其能使贝糜形态贝肉蛋白质的稳定性大大提高。

高压和热结合处理对牛肉蛋白质变性和脂肪氧化的影响

以不同压力(从200～800MPa)和温度(20、40和60℃)结合处理20min对牛肉蛋白质的变性和脂肪氧化的影响进行了研究。差示扫描量热仪(DSC)温度扫描图谱显示胶原蛋白对压力十分稳定,只有在60℃下压力处理才部分变性;而肌球蛋白对热和压力都不稳定,并且在压力变性的同时形成新的结构,这个新的结构对热表现出较低的稳定性。在较高温度(60℃)下,压力对温度引起的蛋白质变性起到部分抑制作用。压力和热以及两者结合处理都能加速脂肪的氧化过程,尤其是在400MPa及其以上压力。处理后的冷藏过程中,除20℃和40℃0.1MPa两个处理外,其它处理的TBA值均呈现快速增加。压力和热处理后蛋白质结构的破坏和变性,导致铁的释放在脂肪氧化过程中起着重要的作用,因铁离子是脂肪氧化的主要催化剂之一。差示扫描量热法(DSC)的扫描结果也显示,在400MPa及其以上压力时大部分蛋白质发生变性。

影响鸡骨髓蛋白质变性的因素研究

主要研究了不同的加热温度、加热时间、盐含量、pH以及脂肪含量对鸡骨髓中蛋白质变性率的影响。结果发现,随着加热温度、加热时间的延长和盐含量的增加,鸡骨髓中蛋白质变性率不断增加,然后趋于平缓。当pH为7时,蛋白质的变性率最高达77.10%;pH为7.86时,蛋白质的变性率最低为26.91%。脂肪的存在对蛋白质的变性具有保护作用。

鲻在冷冻过程中蛋白质的变性

通过研究鲻在冷冻过程中Ca2 + ATPase的活性、挥发性盐基氮和凝胶强度的变化 ,为鲻鱼的冷冻加工提供理论依据。结果表明 ,抗冻剂能有效地抑制鲻鱼在冷冻过程中Ca2 + ATPase活性的下降 ,同时能提高鲻鱼糜的凝胶强度且防止鲻鱼糜在冷冻过程中凝胶强度的下降。抗冻剂在鲻鱼冷冻加工中的应用是行之有效的。

淡水鱼蛋白质冷冻变性的研究现状及前景

主要介绍了淡水鱼蛋白质冷冻变性的国内外研究现状,探讨了防止淡水鱼蛋白质冷冻变性的常用技术,并综述了淡水鱼蛋白质抗冷冻变性的研究方法和发展前景。

尿素诱导的蛋白质变性现象的研究

通过对典型蛋白质变性实验结果的分析,发现在蛋白质变性研究领域中普遍使用的二态模型所描述的过程,与真实蛋白质变性过程并不相符.在分析已有的实验结果的基础上,给出了反映蛋白质变性过程特征的新表示形式.这一形式表明蛋白质分子变性是一个构象渐变的过程,同时强调在一定浓度的尿素溶液中蛋白质分子均处于相同的构象态.从尿素分子与蛋白质肽链上的相邻二肽形成双氢键的假设出发,利用吸附反应动力学方法,得到了描述蛋白质变性特征的物理量与尿素浓度关系的表示式.结果表明理论值与实验值符合较好,说明建立的模型可较好地描述尿素导致的蛋白质变性现象.

冻藏温度对牡蛎蛋白质变性速率的影响

研究在三个不同冻藏温度((-10±1)℃、(-15±1)℃、(-20±1℃))下,牡蛎Ca2+-ATPase活性和盐溶性蛋白质含量的变化,并在此基础上研究蛋白质变性动力学模型,将蛋白质品质变化速率与贮藏温度和贮藏时间相关联,建立牡蛎在冻藏期间蛋白质品质变化规律的方程。结果表明:在冻藏期间牡蛎Ca2+-ATPase活性和盐溶性蛋白质含量的变化符合一级反应动力学模型,蛋白质变性与冻藏的温度和时间有关,Ca2+-ATPase活性和盐溶性蛋白质含量变化趋势一致,都随冻藏温度和冻藏时间的增加而下降,温度越低蛋白质变性越缓慢;蛋白质品质变化方程在试验范围内可有效描述冻藏牡蛎蛋白质品质的变化。

冻藏条件对蛤的蛋白质冷冻变性的影响及其改善的实验研究

以文蛤和波纹巴非蛤为对象研究了不同冻藏条件对肌原纤维Ca2+-ATPase活性、盐溶性蛋白溶解度的影响及在相同条件下添加抗冻剂的改善效果。结果表明,冻藏温度对贝肌肉、碎贝肉和贝糜变性有显著影响,且温度越低,变性越小;无完整细胞形态的贝糜的变性幅度最大,碎贝肉次之;添加抗冻剂能有效防止贝肉蛋白质冷冻变性,尤其能使贝糜肌原纤维蛋白质的稳定性大大提高。

蛋白质变性的渐变模型

通过对典型蛋白质变性实验的分析 ,证明了在目前蛋白质变性研究领域中普遍使用的二态模型与实际变性过程不符 .在分析已有实验结果的基础上 ,给出了反映蛋白质变性过程特征的新模型———渐变模型 ,该模型显示出蛋白质分子变性是一个构象渐变的连续稳态过程 .

添加剂对南美白对虾冻藏期间蛋白质变性的影响

以南美白对虾为研究对象,在虾肉中分别加入10%海藻糖、10%菊糖和5%麦芽糊精,将虾肉置于-18℃下冻藏2个月,每隔15 d测定虾肉肌原纤维蛋白的Ca2+-ATPase活性、盐溶性蛋白含量、活性巯基含量和肌原纤维蛋白表面疏水性,探讨糖类添加剂对虾肉冻藏期间蛋白质变性的影响。结果表明:海藻糖、菊糖和麦芽糊精均抑制了冻藏过程中虾肉肌原纤维蛋白Ca2+-ATPase活性、盐溶性蛋白含量、活性巯基含量的降低和表面疏水性升高的程度,延缓了南美白对虾肉冻藏期间蛋白质的冷冻变性。3种添加剂中,抗冻效果高低顺序依次为:海藻糖、菊糖、麦芽糊精,其中添加海藻糖与菊糖处理间无显著差异(P>0.05),但两者的抗冷冻变性效果均显著高于添加麦芽糊精处理组(P<0.05)。基于玻璃化转变理论,阐明了3种添加剂对虾肉抗冻效果的机制,为水产品抗冷冻变性剂的筛选提供理论依据。

蒸煮对金枪鱼肉及其蛋白质热变性的影响

试验测定了金枪鱼肉在蒸气加热过程中的传热曲线以及重量、水分含量和蛋白质组分随中心温度的变化情况。结果显示:中心温度随着加热时间的延长而不断上升,加热初期的升温速度较后期快;蒸煮损失随着中心温度的升高而不断增大,80℃时的失重率和失水率分别为19.86%和14.43%;蛋白质组分在加热过程中发生了明显变化,随着中心温度的上升,水溶性蛋白和盐溶性蛋白的含量急剧减少,碱溶性蛋白的含量不断增加,此外,碱不溶性蛋白在60℃时开始迅速减少,非蛋白氮的含量随着中心温度的上升也有少量增加。

关于鱼糜在冷藏过程中蛋白质变性的研究——冷藏过程中Ca^(++)-ATPase活性变化的探讨

本文就草鱼鱼糜在冷藏过程中肌原纤维蛋白 Ca^(++)-ATPase 活性的变化及几种因素对其活性的影响作了初步探讨。并与 VBN 值的变化作了比较。冷藏过程中,鱼糜的肌原纤维蛋白 Ca^(++)-ATPase 活性变化明显,而 VBN 值变化不大,因此可用肌原纤维蛋白 Ca^(++)-ATPase活性的大小来鉴别冷藏前期鱼糜蛋白质的变性程度。几种因素对蛋白质变性具有不同程度的影响。对于已腐败的鱼糜,不宜用鱼糜肌原纤维蛋白 Ca^(++)-ATPase 活性来鉴定其品质的优劣。

漂洗条件对鲢鱼糜蛋白质冷冻变性的影响

本文研究了漂洗次数，漂洗液pH值，不同漂洗溶液和漂洗工艺等漂洗条件对鲢蛋白质冷冻变性的影响。从经济效益和产品质量等因素考虑，冷冻鱼糜生产中一般采用3～5次中性溶液漂洗为宜，可先采用含0．1％柠檬酸钠溶液，再采用0．15％CaC12溶液进行漂洗，漂洗后加入蔗糖和山梨醇等抗冻剂冻藏，这样可有效地降低鲢鱼糜在冻藏中蛋白质变性的程度。

蒸汽加热对伊拉兔肉及其蛋白质热变性的影响

测定了伊拉兔大腿肌肉在蒸汽加热过程中的传热曲线，以及蛋白质组分、失重率和水分含量随中心温度的变化情况。结果表明，伊拉兔肌肉在加热过程中，随着时间的延长中心温度不断升高，加热后期的升温速度比前期快；蛋白质各组分在加热过程中变化显著（P〈0．05），随着中心温度的升高，非蛋白氮的含量先增加后减小，碱溶性蛋白增加，水溶性蛋白、盐溶性蛋白和碱不溶蛋白减少。与加热前相比，中心温度达80℃时碱溶性蛋白的含量增加了200．91％，水溶性蛋白、盐溶性蛋白和碱不溶蛋白的含量分别减少了92．6％、68．4％和67．3％；蒸煮损失在加热过程中不断增加，特别是在中心温度达到60～80℃的阶段，蒸煮损失达损失总量的52．97％。

利用尺寸排阻色谱法研究蛋白质的变性

通过比较蛋白质变性时的色谱行为和生物物理特性，提出利用尺寸排阻色谱法研究蛋白质变性时的构象变化．根据色谱参数中的保留时间，比较蛋白质变性时体积的相对变化；利用色谱峰数，确定形成变体的数目；根据峰形和峰数的变化，描述蛋白质的伸展程度；利用不同波长下峰高的变化，推断蛋白质变性时芳香族氨基酸残基的暴露情况．利用建立的尺寸排阻色谱法观察了液体和固体α－淀粉酶在低温下放置时的变性情况，讨论了变性时间和变性温度对强白质展开行为的影响．

蛋白质热变性现象的研究

从构象渐变的观点,对蛋白质热变性现象进行了系统的分析,发现以前用二态模型无法解释的实验数据,可以用渐变的观点做出合理的解释.给出在实验中可以进一步验证热变性过程具有构象渐变特征的预测结果.