Survivin基因及其主要剪接变构体mRNA在大肠癌组织中的表达

目的:探讨大肠癌组织中Survivin基因及其主要剪接变构体与癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)CAM5mRNA表达的临床意义。方法:39例大肠癌切除标本,采集肿瘤组织、癌旁2.5cm组织和距离肿瘤10cm以上的正常大肠组织各1块,采用RT-PCR方法检测总survivin、survivin-△Ex3、survivin-2B、survivin-3B、survivin2α和CEACAM5 mRNA的表达。用凝胶图像分析系统或SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测上述基因mRNA的表达水平。结果:总survivin、survivin-△Ex3、survivin-2B、sur-vivin-3B、survivin2α和CEACAM5mRNA在大肠癌组织中的阳性表达率分别为100.0%、92.3%、92.3%、79.5%、87.2%和97.4%,均高于癌旁2.5cm组织中的38.5%、25.6%、28.2%、7.7%、12.8%和12.8%,差异均有统计学意义(P<0.01)。正常肠壁组织中上述mRNA的阳性表达率分别为17.9%、5.1%、7.7%、0.0%、2.6%和10.3%,与癌旁2.5cm组织比较,总survivin、survivin-△Ex3和sur-vivin-2B差异有统计学意义(P<0.05)。总survivin及其剪接变构体和CEACAM5mRNA的表达水平,大肠癌组织高于癌旁2.5cm组织(P<0.01);癌旁2.5cm组织与正常组织的差异均无统计学意义(P>0.05)。survivin剪接变构体mRNA的表达水平与一些临床病理参数有关(P<0.05)。结论:Survivin和其剪接变构体mRNA在大肠癌组织中呈高表达,表达水平与恶性临床病理参数有关。检测Survivin和其剪接变构体mRNA表达对大肠癌前预报与早期诊断比CEAmRNA更有价值。

人重组磷脂酶D_2变构体cDNA和蛋白质序列分析

采用VectorNTI、DNATools等计算机分析软件及信息库 ,研究人重组磷脂酶D2 (rhPLD2 )变构体的生物学特征。rhPLD2具有多种基因结构和功能调控元件 ,其编码的蛋白质具有发挥功能所必需的活性保守基序和一定的空间结构 ,表明rhPLD2应是一种具有一定生物学功能的异质性蛋白质。

小鼠Deaf1基因变构体全长cDNA的克隆

目的克隆小鼠Deaf1基因变构体全长cDNA序列。方法利用RT-PCR技术从非肥胖糖尿病(non-obesediabetic,NOD)小鼠胰淋巴结总RNA中克隆Deaf1变构体全长cDNA,并做多重序列比对。结果从NOD小鼠胰淋巴结中克隆得到了多个Deaf1变构体的全长cDNA序列,序列分析结果表明,部分Deaf1变构体缺失了重要功能结构域。结论 Deaf1在NOD小鼠胰淋巴结中存在不同的变构体,这些变构体的产生可能会影响Deaf1作为转录因子的功能并与1型糖尿病的发生密切相关。

人源表皮生长因子变构体对实验性阿尔采默病的治疗作用

目的：为了赋予hEGF新的特性，对hEGF结构进行改造，构建hEGF变构体，使其能够穿越细胞膜并且能够通过血脑屏障，为脑神经退行性疾病的治疗研究提供可能性。结果：成功地构建了hEGF变构体的分泌型表达载体，并在原核细胞中完成了有生物活性的可溶性表达。对其生物活性进行研究，实验结果表明，本实验表达的hEGF变构体能够穿越细胞膜及通过血脑屏障。动物行为学测定，Morris水迷宫实验表明hEGF变构体能够缩短AD模型小鼠及自然老化小鼠的潜伏期，穿梭箱实验表明hEGF变构体能够减少AD模型小鼠及自然老化小鼠被电击的时间，证明能够改善AD模型小鼠及自然老化小鼠的学习记忆能力；海马神经干细胞检测，hEGF变构体能够增加AD模型小鼠海马齿状回nestin的表达量；GFAP的表达量减少；Brdu的参入量明显增加。证明具有促进AD模型小鼠海马神经干细胞增殖作用；正电子断层扫描（positron emission tomography，PET）实验，治疗AD模型大鼠脑的亮区比未治疗的AD模型鼠分布面积大，证明能显著增加葡萄糖代谢。结论：hEGF变构体对实验性阿尔采默病具有治疗作用。hEGF的改构从而使hEGF有了新的实用性研发前景。

一种分泌和活性改善的新型人凝血因子VIII变构体

甲型血友病基因治疗疗效受凝血因子VIII(FVIII)表达水平低下的制约。FVIII分泌低效,且活化产物的A2区易于自发脱落使其容易失活。犬属FVIII(cFVIII)的胞内Furin水解酶裂解位点变异,使其主要以单链多肽形式分泌,而人源FVIII(hFVIII)受Furin水解,主要以重链(HC)和轻链(LC)非共价二聚体形式分泌,这种差异使cFVIII分泌性和比活性均高于hFVIII。我们前期的工作在人源B结构域缺失型FVIII(hBDD-FVIII)HC的A2与轻链LC的A3区引入链间二硫键表明,HC和LC二聚体的分泌性得到改善,活化产物稳定性和血浆凝血活性提高。本文构建一种新型hBDD-FVIII变构体F8C-RH,包含链间二硫键突变M226C/D1828C和Furin水解位点突变R1645H。培养的CHO和BHK细胞转基因表明,F8C-RH的分泌性和活性有明显改善。小鼠门静脉注射肝靶向转基因,血浆F8C-RH浓度和凝血活性均明显升高。为进一步腺相关病毒(AAV)载体转F8C-RH的甲型血友病基因治疗研究提供了依据。

纳科思TNF-α变构体

广谱抗肿瘤细胞毒作用，与化疗／放疗联合应用。

胆囊癌中基质金属蛋白酶-9、粘附分子CD44变构体6表达及其临床意义

目的 研究胆囊癌中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)、粘附分子CD44变构体 6(CD44v6)的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组织化学Envision二步法测定 46例胆囊癌(GBC)和 1 2例慢性结石性胆囊炎中MMP 9、CD44v6表达。结果 MMP 9、CD44v6在胆囊癌组织中阳性表达率分别为 78.2 6 %、71 .74%。MMP 9、CD44v6表达与胆囊癌分化程度、临床分期、淋巴结转移、术后生存率有关。结论 检测MMP 9、CD44v6的表达有望成为判断胆囊癌淋巴结转移。

纤溶酶原激活剂作用的结构基础及变构体研究进展

溶栓药物在治疗心脑血管血栓性疾病中发挥重要作用 ,但是传统的溶栓剂由于半衰期短、血栓特异性差等缺点使其在临床应用中往往伴随系统性溶栓副作用 .近年来 ,随着人们对溶栓剂分子结构与功能认识的不断深入 ,用分子生物学方法对传统的溶栓剂进行改构 ,构建了一系列新型溶栓剂 .组织纤溶酶原激活剂 (t_PA)和尿激酶 (u_PA)是目前研究较多的两种溶栓剂 ,通过某些氨基酸的突变、替换、缺失以及结构重排 ,得到了一些血栓特异性高、半衰期延长和活性增强的突变体和嵌合体 ,有些变构体溶栓剂在临床试验中显示出高效安全的溶栓特性 .发展新型的溶栓剂分子 ,对于更有效地治疗严重困扰人类的心血管疾病具有十分重要的意义 ,人们在这个领域已经并仍在做不懈的努力 .但是 ,也应该看到 ,溶栓剂分子结构的改变势必会或多或少地引起整个分子空间构象的改变 ,进而打破该类重要生理病理调节分子多种功能的自然平衡与自身调节 ,这类问题需要在实际应用中不断地探索 .现就目前对t PA和u_PA的结构与功能关系的认识 ,以及近年来以这两者为基础的新型溶栓剂的研究情况进行综述 .

一种白细胞介素2基因变构体的高效表达与纯化工艺

利用定点诱变技术构建表达质粒pET15b-MhIL-2并将其在大肠杆菌中进行表达发酵的优化研究,高效表达出可溶性的MhIL-2重组蛋白。蛋白经过亲和层析、Thrombin酶切、离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,MhIL-2纯度达95%,且MhIL-2比hIL-2具有更强的促进T细胞增殖生物活性。

抗重组新型人角质细胞生长因子变构体单克隆抗体的研制

角质细胞生长因子（KGF）是皮肤表层的细胞因子,有KGF-Ⅰ和KGF-Ⅱ两种类型,能促进角质细胞增生、保护黏膜细胞和肝细胞。范开等证明经基因工程改造的K102能有效地预防和治疗实验性肝纤维化,并对已形成的肝纤维化有一定的逆转作用。在被动免疫中,重组K102已成功的用于防治纤维化疾病。但重组K102蛋白与抗天然KGF的单克隆抗体研究的报道。为进行重组K102的免疫学研究，包括建立ELISA法测定其体内外药物浓度，进行Western blot以及免疫组织化学实验等。本实验室根据杂交瘤细胞建株的原理，用PEG融合技术，建立分泌抗重组K102蛋白抗体的杂交瘤细胞株。

血清大分子量肌糖蛋白C剪接变构体水平对卵巢癌的临床意义研究

目的:探讨血清大分子量肌糖蛋白C剪接变构体(L-Tn-CSV)水平对卵巢癌的临床意义,为卵巢癌的临床诊断、治疗和预后判断提供参考依据。方法:选择143例首次发病卵巢癌患者、18例复发卵巢癌患者、40例良性卵巢肿瘤患者及30例健康人为研究对象,采用定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清中的L-Tn-CSV、HE4和CA125的表达水平并进行比较分析。结果:对一般卵巢癌标志物CA125和HE4与血清L-Tn-CSV诊断卵巢癌的敏感性和特异性比较发现其无统计学差异;首次发病的卵巢癌患者与复发的卵巢癌患者血清中的L-Tn-CSV水平分别为4924.1±3145.6pg/ml和4217.5±2349.3pg/ml,显著高于健康女性(2259.3±723.2pg/ml)及良性卵巢肿瘤组(2435.6±863.6 pg/ml)(P<0.01);卵巢良性肿瘤组血清L-Tn-CSV含量与正常对照组比较无统计学差异(P=0.42),卵巢癌Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者血清L-Tn-CSV水平较Ⅰ期显著增高(P<0.01);复发组的血清L-Tn-CSV水平明显高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组(P<0.01),而Ⅲ期、Ⅳ期血清L-Tn-CSV水平无统计学差异(P>0.01);Spearman等级相关分析显示血清L-Tn-CSV水平与卵巢癌临床分期(r=0.573,P<0.01)及复发(r=0.627,P<0.01)呈正相关;术后血清L-Tn-CSV水平呈阴性与切除手术后治愈可能性显著相关(P<0.01)。结论:血清L-Tn-CSV水平对卵巢癌肿瘤诊断、分期及预后评估有一定的参考价值。

Survivin结构与肿瘤靶向治疗的研究进展

Survivin作为IAP家族新成员,高表达于各种肿瘤组织,在正常成人组织中几乎不表达,这一特殊关系使得Survivin成为肿瘤靶向治疗的研究热点。目前对Survivin的结构及其与肿瘤靶治疗的研究有了很大进展。

CD44与肿瘤关系研究进展

分化抗原CD44与肿瘤发生、发展，尤其是肿瘤转移有密切关系。CD44分为标准型、上皮型及基因拼接变构体三种。本文介绍了与肿瘤关系密切的CD44v6、CD44v5等基因拼接变构体，阐明它们在肿瘤诊断、预后判断等方面的应用，并对可溶性CD44在临床诊断中的应用作了概述。

瘤内注射纳科思联合放疗的疗效观察

目的:观察浅表肿块内注射纳科思(TNF-α变构体)联合放疗的疗效及患者生活质量的改善情况。方法:将收集的46例恶性肿瘤的浅表肿块分为甲、乙两组,进行回顾性分析。甲组为浅表肿块内注射纳科思联合放疗,乙组为单纯放疗组。两组放疗方法、剂量相同。结果:46例有2例因纳科思严重过敏而退出治疗,可供临床疗效分析者44例,其中甲组27例,乙组17例。放疗至40G y及放疗结束时,甲组有效率分别为81.48%、96.30%,高于乙组52.94%及88.24%(40G y时比较P<0.05,放疗结束时比较P>0.05);放疗后患者行为状态KPS评分甲组明显高于乙组(P<0.05)。结论:在治疗恶性肿瘤的浅表肿块时,瘤内注射纳科思联合放疗,能提高放疗的敏感性和近期疗效,并能提高患者生活质量。

肿瘤坏死因子在肿瘤研究和治疗领域中的新进展

TNF-α引发受体诱导的信号传导中的细胞凋亡是其抗肿瘤的分子机理。 NF-kB活化与TNF-α毒副作用有关。TNF-α在临床前的研究中发现有抗新生血管形成作用。另外,本文还介绍了临床研究中用隔离性肢体器官灌流法导入TNF-α治疗实体瘤的进展;以及近期国内外TNF-α变构体研究的进展。

CRISPR/cas系统及其在家禽上的应用研究进展

CRISPR/cas是一种获得性免疫防御系统,广泛存在于细菌和古细菌中。Strep tococcus pyogenes cas9(Spcas9)作为目前研究最多、最清楚的效应蛋白,因其酶活性高和靶点广而被应用于生命科学各个领域,但Spcas9分子量大、脱靶率高等缺点在一定程度上限制了其应用。随着CRISPR系统技术被深入开发,一些新效应蛋白被发现,本文就CRISPR/cas系统分类、原理、新效应蛋白发现及cas9(S.Pyogenes)多种变构体技术开发在及家禽上的应用进行综述,为相关领域的研究提供参考。

新型邻甲酰氨基苯甲酰胺类杀虫剂四氯虫酰胺

四氯虫酰胺是以氯虫苯甲酰胺为先导开发而来的新型鱼尼汀受体变构调节剂,因而具有相似的化学结构、作用机理、杀虫谱和药效。四氯虫酰胺具有一定的生产成本优势,其市场潜力巨大,其开发情况值得关注。