SD-PMA-qPCR快速检测冷冻肉制品中活性沙门氏菌的研究

为实现冷冻肉制品中活性沙门氏菌的快速检测与控制,本文利用PMA(叠氮溴化丙锭)和SD(脱氧胆酸钠)消除死菌和损伤菌的影响,建立了运用SD-PMA-qPCR法检测活性沙门氏菌的反应体系和反应条件,并进行人工染菌样品检测试验。SD的最佳浓度确定为0.1%,最佳孵育时间为20 min。对-20℃低温冷冻处理3~4 d的沙门氏菌处理液,使用平板计数法、qPCR、PMA-qPCR和SD-PMA-qPCR进行计数,结果发现qPCR与PMA-qPCR二者检测值接近且明显高于平板计数值,而SD-PMA-qPCR检测值与平板计数值相近,这表明SD和PMA的联合使用能有效的消除死菌和损伤菌的影响。人工染菌样品试验表明,沙门氏菌检出限在10~2CFU/g,同时10~6 CFU/g大肠杆菌O157:H7的存在不会影响检测结果。本研究所建立的SD-PMA-qPCR检测方法特异性好、灵敏度高,有望成为快速检测冷冻肉制品中活性沙门氏菌的新方法,具有很好的研究价值和应用前景。

副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立

副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,在海鲜等食物中检出率很高,食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品,极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌,容易出现假阳性结果。本研究基于DNA结合染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA),利用荧光染料钙黄绿素(Calcein)的特性,建立了一种实时的可视化环介导等温扩增方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),并与q PCR方法进行比较。实时可视化LAMP方法的反应结果,既可以肉眼直接观测,也可以借助荧光分析设备实时监测,并对半定量分析进行初探,为之后向定量分析深入研究打下基础。实验结果表明,实时可视化PMA-LAMP方法的灵敏度可达5.0×102 CFU/m L,模拟食样灵敏度为1.9×102 CFU/m L,与PMA-q PCR方法结果一致。除去前增菌时间,整个检测过程只需2 h,且准确率高,为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。