茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响

目的 从生化和形态学的角度观察茯苓水提液对叠氮钠致原代培养的新生大鼠海马神经细胞线粒体损伤的影响。方法 新生大鼠海马神经细胞原代培养至第 11天 ,吸弃培养液 ,加入MTT(0 .4mg·mL-1)温育 4h ,用自动酶标仪在 5 5 0nm处检测被神经细胞线粒体酶还原的MTT的量 ,以此作为评价细胞活力的指标。通过间接免疫荧光 (一抗为鼠抗α tubulin抗体 )的方法 ,利用激光扫描共聚焦显微镜观察来评价神经细胞骨架改变。结果 叠氮钠与培养细胞孵育能剂量依赖性地损伤细胞 ,6 4mmol·L-1孵育 4h时 ,细胞的线粒体酶还原MTT的能力为对照组的 (6 0 .73± 5 .13) % ,微管结构模糊、紊乱。茯苓水提液 (10～2 0mg·mL-1)与细胞预孵育 2 4h ,能明显抵抗叠氮钠引起的神经细胞线粒体还原MTT的能力下降 ,微管结构紊乱。结论 茯苓对维持神经细胞线粒体的功能及微管结构方面有重要作用 ,对防治某些神经退行性疾病如老年性痴呆、血管性痴呆及帕金森氏病等 。

天智颗粒对叠氮钠诱导脑损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱和儿茶酚胺含量的影响

目的 :观察天智颗粒 (TZ)对脑线粒体损伤大鼠纹状体细胞外乙酰胆碱 (ACh)和儿茶酚胺类递质的影响 ,探讨促智中药TZ的神经保护作用机理。方法 :应用微透析技术和高效液相色谱相结合 ,建立清醒自由活动大鼠脑内灌流叠氮钠 (NaN3 )造成局部脑区线粒体能量代谢障碍的急性模型 ,动态监测TZ对叠氮钠灌流大鼠脑细胞外ACh、胆碱 (Ch)和儿茶酚胺类递质水平的影响。结果 :NaN3 灌流后 ,大鼠纹状体细胞外ACh、去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素 (E)、多巴胺 (DA)、3,4 二羟基苯乙酸 (DOPAC)和高香草酸 (HVA)水平均显著下降 (P <0.0 5～ 0. 0 1) ,Ch水平则明显升高 (P <0.0 1) ;停止NaN3 灌流后 ,各递质水平逐渐恢复。TZ可延缓叠氮钠灌流大鼠脑内ACh水平的降低 ;促进Ch水平的恢复 ;与都可喜合用升高叠氮钠灌流大鼠ACh水平的作用显著优于单用TZ或都可喜。TZ还有延缓儿茶酚胺类递质水平降低和促进其恢复的趋势 ,与都可喜合用可促进DOPAC水平的恢复 ,对DA的代谢异常具有积极的调节作用。结论 :TZ对线粒体损伤 ,能量代谢障碍引起的胆碱能神经系统的损伤具有保护作用 ,并与都可喜有协同作用 ;对肾上腺素能、多巴胺能神经系统的损伤 。

红景天苷减轻叠氮钠诱导线粒体损伤的作用

目的观察红景天苷对呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤的保护作用,探讨其在防治神经退行性疾病中可能的作用机制。方法将叠氮钠与人神经母细胞瘤细胞株SHSY5Y共同孵育,MTT法测定细胞存活力,JC1法检测线粒体膜电位变化。刃天青法检测大鼠脑线粒体功能。结果64mmol·L-1叠氮钠与SHSY5Y共同孵育4h后,细胞存活率明显下降,线粒体膜电位下降。预先加入红景天苷能明显提高细胞存活率,维持线粒体膜电位。650μmol·L-1叠氮钠能使大鼠脑线粒体功能下降,预先加入红景天苷能明显改善线粒体功能。结论红景天苷能够减轻叠氮钠(NaN3)诱导的线粒体损伤,能够改善线粒体功能,这可能是其抗老年痴呆的机制之一。

制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的影响

目的:探讨制首乌对叠氮钠脑内灌流大鼠脑保护作用的机制。方法:大鼠分成6组:对照组、模型组、制首乌组、都可喜组和制首乌+都可喜组。应用脑内微透析技术,高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测器动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)水平的变化。结果:在动态观察期间,对照组大鼠纹状体细胞外液ACh和Ch水平较稳定。模型组的ACh水平明显低于对照组;3个给药组的ACh水平则分别在一些时间点显著高于模型组。模型组的Ch水平则明显高于对照组;3个给药组的Ch水平在一些时间点显著低于模型组。制首乌的作用与阳性药都可喜相近。结论:制首乌通过升高ACh水平、改善Ch摄取,提高受损的胆碱能神经功能,来达到脑保护作用。为其作为脑保护剂用于治疗老年人常见的神经退行性疾病所致的痴呆提供了实验依据。

微泵恒速灌注叠氮钠对大鼠学习记忆的影响

目的 利用线粒体细胞色素C氧化酶抑制剂叠氮钠 ,观察其对模型大鼠学习记忆能力的影响。方法 SD大鼠皮下埋植Alzet微泵 ,连续恒速给予叠氮钠共 30天 ,给药 1mg·kg-1·h-1和 2mg·kg-1·h-1两个剂量组。Morris水迷宫、避暗实验检测动物学习记忆能力 ,旷场分析检测空间探索能力及兴奋性 ,攀网实验检测肌力。结果 微泵恒速灌注叠氮钠导致模型大鼠水迷宫游出时间及距离延长、错误次数增加 ,避暗潜伏期缩短、错误次数增加 ,旷场分析中对外界的空间探索能力、适应性及兴奋性均降低 ,但肌力无明显异常。结论 线粒体细胞色素C氧化酶活性下降可以导致动物学习记忆能力下降 ,微泵恒速灌注叠氮钠大鼠可作为一种拟痴呆模型 。

叠氮钠对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞线粒体跨膜电位的影响

目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV（即细胞色素 C氧化酶）抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响，探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育，用微测量法测定线粒体复合体 IV活性，噻唑兰（ MTT）法测定细胞存活率，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测线粒体跨膜电位变化。 结果 16～ 64 mmol/L叠氮钠与培养的 SH-SY5Y细胞共孵育 1 h，细胞线粒体细胞色素 C氧化酶活性下降； 16～ 128 mmol/L叠氮钠作用 1～ 8 h，细胞存活率下降，呈时间及剂量依赖性；叠氮钠使细胞线粒体跨膜电位的荧光强度值下降，尤以细胞突起内降低最为显著，门控内正常细胞数减少。结论 叠氮钠与培养的 SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞共孵育导致细胞损伤，其机制是使细胞线粒体跨膜电位下降，能量合成障碍，最终导致细胞死亡。

叠氮钠损伤的神经元内硫氧还蛋白mRNA水平的变化

氧化应激与许多神经退变病有关,而线粒体损伤是氧化应激加剧的重要原因。本文通过细胞活性检测(MTT法)、形态学观察,分析NaN_3对原代培养神经元的损伤作用,并通过RT-PCR半定量检测NaN_3损伤后神经元内疏氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)mRNA水平的改变,以阐明这一重要的氧还调节蛋白在神经元损伤过程中的作用。实验表明NaN_3以浓度和时间依赖方式损伤神经元,降低Trx表达水平。提示:神经元内呼吸链受损引起Trx表达减少,从而减弱神经元内氧还调节功能,最终引起神经元损伤、死亡。

建立脑内灌流叠氮钠所致的大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱水平下降的模型

目的 建立可用于筛选防治老年退行性病变和其他脑细胞损伤所致智能减退药物的模型。方法应用脑内微透析技术 ,在清醒自由活动大鼠纹状体内灌流含叠氮钠 (NaN3,30mmol·L- 1)和新斯的明(10 μmol·L- 1)的林格液 ,连续收集透析液。用高效液相色谱 柱后固定化酶反应器 电化学检测器检测乙酰胆碱 (ACh)和胆碱水平。结果 脑内灌流NaN390min后该脑区细胞外液ACh水平较正常组持续下降 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。最低值在停止NaN3灌流后6 0min时出现 ,为相同时间点对照组水平的 10 .0 % ;此后有所恢复 ,但在恢复期 180min内未能达到对照组水平。阳性药甲磺酸阿米三嗪 (10mg·kg- 1·d- 1,ig ,灌流前连续给药 14d)可在停止NaN3灌流后 30和 6 0min时明显减缓ACh水平的下降 (均P <0 .0 5 )。结论 大鼠脑内灌流NaN3使局部脑区胆碱能神经功能损伤 ,可造成ACh水平持续下降的急性模型。

叠氮钠对心肌细胞活力影响的研究

目的:观察叠氮钠对原代培养大鼠心肌细胞活力的影响。方法:研究不同浓度叠氮钠在不同时间内对原代培养的大鼠心肌细胞活力的影响。结果:叠氮钠对心肌细胞活力的抑制作用随浓度增加以及作用时间延长明显增加。1 mmol/L叠氮钠孵育细胞3 h,细胞发生可逆的早期凋亡,大于6 h,细胞发生不可逆的死亡。结论:低剂量叠氮钠可诱导原代培养的大鼠心肌细胞发生可逆的早期凋亡。

叠氮钠对模型大鼠学习记忆能力的影响

目的 观察叠氯钠对模型大鼠学习记忆能力及脑内胆碱乙酰基转移酶 (ChAT)活性的影响，探讨线粒体缺陷损伤学习记忆功能的可能机制。方法 SD大鼠皮下埋植 Alzet微泵，连续恒速给予叠氮钠共 28 d，给药 1 mg/kg· h和 2 mg/kg· h两个剂量组。 Morris水迷宫、通道式水迷宫检测动物学习记忆能力。放射化学法分区测定脑皮层和海马 ChAT活性。结果 大鼠水迷宫游出时间及距离延长、错误次数增加。大鼠皮层和海马 ChAT活性降低。结论 Cox活性下降可以导致动物学习记忆能力及脑内 ChAT活性下降，使乙酰胆碱 Ach代谢的障碍，可能是模型大鼠学习记忆能力下降的机制之一。

微泵恒速灌注叠氮钠致痴呆大鼠脑内胆碱及单胺类神经递质含量改变

目的观察线粒体呼吸链复合体IV(线粒体细胞色素C氧化酶 )抑制剂叠氮钠对大鼠脑内胆碱及单胺类神经递质的影响 ,探讨线粒体缺陷导致学习记忆障碍的可能机制。方法SD大鼠皮下埋植Alzet微泵 ,连续恒速给予叠氮钠共 3 0天 ,分为 1mg/kg/h和 2mg/kg/h两个剂量组。取脑 ,分区测定皮层和海马胆碱乙酰基转移酶 (放射化学法 )及乙酰胆碱酯酶 (羟胺比色法 )的活性 ;高效液相色谱法测定纹状体内单胺类神经递质及其代谢产物含量。结果模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性降低 ,海马区乙酰胆碱酯酶活性升高 ,皮层和海马胆碱乙酰基转移酶与乙酰胆碱酯酶活性的比值明显降低。纹状体内单胺类神经递质及其代谢产物含量各组间无明显差异。结论线粒体细胞色素C氧化酶活性的抑制可以导致动物脑内胆碱乙酰基转移酶及乙酰胆碱酯酶活性的异常 ,是模型大鼠学习记忆能力障碍的基础。微泵恒速灌注叠氮钠仅损伤大鼠脑内胆碱能神经系统 ,对脑内单胺类神经递质无影响 ,可作为拟痴呆模型 ,应用于发病机理及药理学等方面的研究。

叠氮钠对培养神经细胞微管结构和细胞存活率的影响

观察线粒体呼吸链复合体 (即细胞色素 C氧化酶 )抑制剂叠氮钠 (Na N3 )对神经细胞微管结构和细胞存活率的影响 ,探讨线粒体缺陷在阿尔茨海默病发病中的作用。将叠氮钠与传代培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH- SY5Y细胞共同孵育 ,用微测量法测定线粒体复合体 活性 ,MTT法测定细胞存活率 ,激光共聚焦显微镜和图像分析系统观察细胞微管结构。叠氮钠 1 6～ 6 4 mmol/L与培养的神经细胞共孵育 1 h,剂量依赖性地导致细胞线粒体细胞色素 C氧化酶活性下降 ;叠氮钠 (1 6～ 1 2 8mmol/L)作用 1～ 8h,细胞存活率下降 ,呈时间及剂量依赖性 ;叠氮钠 1 6 ,6 4 mmol/L作用 4h,使细胞微管结构损伤 ,尤以突起内最为显著。叠氮钠与培养的神经细胞共孵育导致神经细胞损伤 。

L-茶氨酸减轻叠氮钠诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体损伤

目的研究L-茶氨酸对叠氮钠（NaN，）诱导的人神经母细胞瘤（SH-SYSY）细胞线粒体损伤的影响其机制。方法将不同浓度的L-茶氨酸及NaN，与SH-SYSY细胞系共同孵育，用M1Tr法测定细胞存活力，以JC-1测定法和激光共聚焦显微镜来观察线粒体膜电位，Westernblot法检测细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素C蛋白表达水平。结果1）随着NaN，浓度的增高，细胞活性逐步降低，提前2h给予茶氨酸（0．25、0．50和1．00mmol／L）能明显降低NaN，（0．25mmol／L）孵育24h对细胞的毒性并逆转线粒体跨膜电位的下降（P〈0．05）；2）茶氨酸在0．25-1．00mmol／L浓度范围内能显著逆转NaN，诱导的SH-SYSY细胞内caspase-3、caspase-9和细胞色素c蛋白表达水平的升高（P〈0．05）。结论茶氨酸可以通过稳定SH-SYSY细胞线粒体膜电位，减轻细胞线粒体的损伤。

山茱萸羟甲基糠醛对叠氮钠致神经细胞损伤的影响及其作用机制

目的观察从山茱萸中提取的山茱萸羟甲基糠醛(HMF)对线粒体呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠致神经细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法不同剂量的HMF分别与人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞预孵育24h,洗去培养液,加入50mmolL-1叠氮钠作用4h,用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位和细胞骨架(微管、微丝)结构,免疫细胞化学法检测β-淀粉样肽(Aβ)的表达。结果12.5～200mg·mL-1的HMF与SH-SY5Y细胞共孵育能明显拮抗叠氮钠的损伤作用,使细胞存活率增高,线粒体跨膜电位升高,并使损伤的微管、微丝结构基本恢复正常,减少Aβ含量。结论HMF能明显拮抗线粒体呼吸链复合体IV缺陷所致的神经细胞损伤,其机制与保护细胞骨架和降低Aβ含量有关,对于防治阿尔采末病等神经退行性疾病有一定应用前景。

叠氮钠对大鼠学习记忆及海马和额叶皮层内Aβ的影响

目的 :观察大鼠长期皮下注射叠氮钠后的学习记忆、中枢神经系统 β 淀粉样蛋白含量的改变。 方法 :采用Morris水迷宫、放射免疫和透射电镜的方法。结果 :大鼠出现明显的空间记忆功能障碍 ,海马和额叶大脑皮层内Aβ含量升高。 结论 :长期皮下注射叠氮钠可以制备AD模型 。

叠氮钠造成脑线粒体损伤模型的研究现状

现已证明 ,线粒体缺陷与阿尔茨海默病 (AD)的发生密切相关 ,其中AD患者细胞色素C氧化酶 (COX)活性的降低明显且特异。叠氮钠 (NaN3 ) ,一种特异性COX抑制剂 ,可以损伤线粒体活性 ,建立具有部分类似AD病理改变的动物和细胞模型。它可以导致动物学习记忆功能障碍 ,其可能的机制包括细胞骨架结构破坏 ,Aβ沉积 ,氧化损伤 ,离子内稳态破坏 ,细胞膜损伤以及神经递质异常。NaN3 造成的脑线粒体损伤模型为AD机理和治疗药物的研究提供了新的途径。

无机磷和叠氮钠对线粒体F_1-ATPase构象的不同影响

用εＡＤＰ作荧光探针，用荧光猝灭的方法证明无机磷（Ｐｉ）能影响Ｆ１－ＡＴＰａｓｅ的构象从而使酶结合ＡＤＰ的能力降低．用ａｕｒｏｖｅｒｔｉｎＢ作荧光探针研究了Ｐｉ和叠氮钠对Ｆ１－ＡＴＰａｓｅ构象的影响，发现Ｐｉ能影响洗去催化位点核苷酸的Ｆ１的构象，而叠氮钠对其没有影响，但却能影响结合有ＡＤＰ的Ｆ１的构象．因此Ｐｉ和叠氮钠对酶构象的影响是不同的，二者可能有不同的作用位点．

叠氮钠、过氧化氢对SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响

过度氧化应激是诱发许多神经退变病的重要因素。叠氮钠(NaN3)是线粒体有氧呼吸链细胞色素c氧化酶(COX)的特异性抑制剂,过氧化氢(H2O2)释放氧自由基造成氧化损伤,两者都可以用于氧化应激情况下神经元损伤模型的建立。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)特异性的还原氧化型的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRx),调节细胞中氧化还原的平衡。现以不同浓度NaN3或H2O2处理人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),建立损伤模型。通过MTT法、形态学方法检测SH-SY5Y细胞损伤程度。同时,通过Western blot定量法、免疫细胞化学法,检测损伤的SH-SY5Y细胞中TR含量的改变,观察TR在胞内的分布。实验表明,NaN3、H2O2均以浓度依赖方式损伤SH-SY5Y细胞;TR分布于SH-SY5Y细胞的胞浆,表明TR是一种分泌蛋白,损伤后分布无明显变化。但一定浓度的NaN3作用后3h,胞内TR水平显著降低,即神经系统内呼吸链受损可抑制TR的表达,为神经退变病的防治提供了新的思路。

叠氮钠对小麦叶片DNA损伤的彗星实验

以小麦(Triticum aestivum Linn.)为材料,以不同浓度梯度的叠氮钠溶液处理小麦叶片后,采用彗星实验研究叠氮钠对小麦的遗传损伤。结果表明,叠氮钠能引起小麦基因的损伤,并随浓度的增加伤害程度加大,表明叠氮钠有明显的遗传损伤毒性,彗星实验可以利用植物细胞快速检测环境中对遗传物质有毒性的物质,是一种快速、简单、直接检测DNA损伤的手段。

叠氮钠(NaN_3)诱变对雨生红球藻的生理效应

用浓度分别为0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10 mmol/L的叠氮钠(NaN3)处理雨生红球藻(Haematococcus pluvialis),6 d后用细胞计数测定致死率。然后取浓度分别为0、1、2、3、4、5、6mmol/L的NaN3处理过的存活细胞,经数代培养后以相同起始浓度在适宜条件下培养10 d,然后测定生长指标。结果表明:浓度为1 mmol/L的NaN3处理有利于促进藻细胞的生长,而其它浓度处理则对藻生长起抑制作用;但不同浓度处理都有利于促进虾青素的积累,其中又以1 mmol/L的NaN3处理后的虾青素含量最高,之后随处理浓度的增加虾青素量反而下降;结果还发现一定浓度的NaN3处理有利于提高藻耐高温的能力,但对耐低温能力影响不大。