高速逆流色谱分离制备椭圆叶花锚中的2种口山酮苷元

椭圆叶花锚的主要活性成分为口山酮类化合物,这类化合物具有利胆、抗炎、抗菌及抗病毒活性。应用高速逆流色谱法建立了2种高纯度口山酮苷元的分离制备方法。对椭圆叶花锚氯仿萃取部位运用高速逆流色谱分离纯化,以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶7∶5,v/v/v/v)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相。在主机转速800r/min,流动相流速1.5 mL/min,检测波长254 nm条件下进行分离制备。所得产物经高效液相色谱分析检测,其化学结构由核磁共振氢谱(1H NMR)和核磁共振碳谱(13C NMR)鉴定。在此条件下,从100 mg粗样品中一步分离得到18 mg 1-羟基-2,3,5-三甲氧基口山酮,14 mg 1-羟基-2,3,4,5-四甲氧基口山酮。经高效液相色谱分析,其纯度均达98%以上。该方法简便、快速,所得产物纯度高,适合于椭圆叶花锚口山酮苷元的制备分离。

紫红獐牙菜口山酮及环烯醚萜类化合物的研究

采用各种柱色谱法对紫红獐牙菜的石油醚和正丁醇部位进行分离纯化,从石油醚部位分离鉴定得到6个化合物,利用理化性质和波谱学方法分别鉴定为oleanolic acid(1),swerchirin(2),sweriaperenine(3),bellidifo-lin(4),gentiacaulein(5)和1,7,8-trihydroxy-3-methoxyxanthone(6);从正丁醇部位分离鉴定得到9个化合物,分别鉴定为8-[(β-D-glucopyranosyl)oxy]-1,5-dihydroxy-3-methoxyxanthone(7),5-[(β-D-glucopyranosyl)oxy]-1,8-di-hydroxy-3-methoxyxanthone(8),7-[(β-D-xylopyranosyl)oxy]-1,8-dihydroxy-3-methoxyxanthone(9),8-[(β-D-gluco-pyranosyl)oxy]-1,3,5-trimethoxyxanthone(10),swertiamarin(11),tetrahydrosertianolin(12),8-hydroxy-10-hydro-sweroside(13),campestroside(14)以及uridine(15)。其中,化合物15首次从该属植物中得到,化合物9、10、12和13首次从该植物中分离得到。

黄灰链霉菌SIIA-A02191产生的多环口山酮类新抗生素Bromoxantholipin(英文)

目的研究海洋链霉菌SIIA-A02191产生的抗菌成分。方法用有机溶剂萃取发酵液，采用减压快速层析和制备HPLC分离纯化活性化合物，根据化合物的理化性质、紫外光谱、红外光谱、质谱、一维和二维核磁共振谱的测定数据，解析并确证化合物的结构。结果化合物1为xanfllolipin的溴代类似物，命名为bromoxantholipin，具有抗MRSA等革兰阳性细菌的强活性，MIC值范围为0．06～0．25μg／mL。结论化合物1为一新的多环口山酮类抗生素。

3,4,5,6-四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用

目的:观察3,4 ,5 ,6 - 四羟基口山酮对高糖所致血管内皮依赖性舒张功能减退的保护作用。方法:在大鼠离体胸主动脉环,用高浓度葡萄糖(2 5mmol·L-1)孵育2 4h ,检测乙酰胆碱诱导的血管内皮依赖性舒张反应;人脐静脉内皮细胞株(ECV30 4 )用高浓度葡萄糖(30mmol·L-1)培养4 8h ,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、一氧化氮(NO)及细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量。结果:3,4 ,5 ,6 - 四羟基口山酮(1、3和10 μmol·L-1)能显著抑制高糖所致的舒血管效应减退,并且呈剂量依赖性。3,4 ,5 ,6 - 四羟基口山酮(1、3和10 μmol·L-1)能显著抑制高糖所致的内皮细胞LDH泄漏、NO释放和MDA生成的增加。结论:3,4 ,5 ,6 - 四羟基口山酮对高糖所致的血管内皮依赖性舒张功能减退有保护作用,其保护作用与抑制脂质过氧化减少血管内皮细胞损伤有关。

口山酮类化合物在獐牙菜属植物中的研究进展

在查阅近十几年的关于獐牙菜属植物口山酮类化合物研究文献的基础之上,对獐牙菜属口山酮类化合物的结构、药理活性及其该类化合物在自然界中分布的科属做了系统的综述;提出对有特殊药效且处于灭绝状态的药材要可持续研究开发和保护的建议。

湿生扁蕾中1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮对照品的制备

目的研究湿生扁蕾中对照品1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮的制备方法。方法湿生扁蕾药材用乙醇提取,从乙醇提取物中分离、制备对照品,采用紫外光谱、红外光谱、质谱和核磁共振谱对其进行结构鉴定。结果所得对照品用归一化法定量,质量分数大于98%。结论该对照品可作为控制湿生扁蕾质量的指标成分。

1,3,8-三羟基-5-甲氧基口山酮对细胞色素P450酶的抑制作用

目的:在人肝微粒体中研究1,3,8-三羟基-5-甲氧基山口山酮(1,3,8-trihydroxy-5-methoxyx-anthone,TMX)对细胞色素P450酶(CYP450s)的抑制作用。方法:研究加入TMX后,微粒体内主要药物代谢酶活性的变化情况。微粒体孵化体系中各探针药物及其代谢产物的含量用高效液相色谱法测定,酶活性用探针药物的代谢产物浓度与母药浓度的比值表示。结果:加入TMX前后CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2E1,CYP3A4活性改变[均值(95%可信区间)]分别为2.95×10-3(2.03×10-3,3.88×10-3),3.14×10-2(1.87×10-2,4.42×10-2),2.27×10-3(-1.4×10-2,1.81×10-2),7.72×10-2(-0.83×10-2,0.2374),-0.2548(-2.9802,2.4707)。CYP1A2,CYP2C9的活性变化差异有统计学意义。结论:10μmol/L的TMX在体外对CYP1A2和CYP2C9有显著性抑制作用,对CYP2C19,CYP2E1和CYP3A4的抑制作用并不明显。

RP-HPLC法测定柘树根中四种异戊烯基口山酮的含量

目的建立高效液相色谱法（HPLC）测定柘树根中4种异戊烯基咄酮的含量。方法采用Hyper—Clone BDS C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以甲醇-乙腈-0．2％磷酸为流动相，梯度洗脱，流速0．8mL／min，检测波长259nm，柱温50℃。结果4种异戊烯基[口山]酮在一定范围内均呈良好线性关系，平均加样回收率在97.03％～103．25％范围内，RSD〈3．86％（n=6）。结论本方法结果准确、重复性好。

3,4,5,6-四羟基口山酮抑制ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化形成及机制

目的:研究3,4,5,6-四羟基口山酮抑制ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的机制及其与内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂非对称性二甲基精氨酸(ADMA)的关系。方法:32只小鼠分为4组(n=8):正常对照组(C57BL/6 J小鼠,等体积溶媒灌胃);模型组(ApoE基因缺陷小鼠,等体积溶媒灌胃);低剂量口山酮组[ApoE基因缺陷小鼠,口山酮10 mg/(kg.d)灌胃];高剂量口山酮组[ApoE基因缺陷小鼠,口山酮20 mg/(kg.d)灌胃];检测主动脉脂质斑块面积、血脂、红细胞变形性和血浆ADMA的水平。结果:与模型组比较,口山酮可以显著降低血浆ADMA水平和斑块面积,降低血浆总胆固醇(TC)、血浆总甘油三酯(TG)、血浆低密度胆固醇(LDL-C),显著升高血浆高密度胆固醇(HDL-C)和改善红细胞变形性。结论:3,4,5,6-四羟基口山酮具有抗AS作用,其作用机制与改善脂质代谢和降低血浆ADMA的水平有关。

湿生扁蕾总口山酮对NCM460细胞间质转化的影响

该研究探究了湿生扁蕾总口山酮对人结肠上皮细胞(normal colon mucosa cell,NCM460)间质转化的影响。采用2.5 μg/mL脂多糖(LPS)诱导NCM460细胞14天建立间质转化模型,分别以湿生扁蕾总口山酮(GPX)及吡菲尼酮(PFD)进行干预,以免疫荧光(IF)和蛋白免疫印迹技术(WB)以及实时荧光定量转录聚合酶链反应(RT-qPCR)分别检测E-cadherin和Vimentin蛋白和mRNA的表达。结果显示,与正常对照组相比,模型对照组细胞中上皮细胞标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.01),间质细胞标志物Vimentin蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.01),与模型组相比,E-cadherin的荧光强度与GPX剂量呈正相关,Vimentin荧光强度呈剂量依赖性降低。GPX中、高剂量组E-cadherin蛋白和mRNA表达上调,Vimentin蛋白和mRNA表达下调(P<0.01),以高剂量最为明显。研究表明,湿生扁蕾总口山酮能够有效抑制结肠上皮–间质转化,这为其进一步研究开发提供理论依据。

花锚及其(口山)酮甙抗肝损伤和毒性的研究

花锚及其(口山)酮甙对由四氯化碳引起的肝损伤,有促进恢复的作用,能促进肝细胞再生,增加肝细胞内的糖元和核糖核酸。花锚无明显毒副作用。

紫红獐牙菜7种[口山]酮类成分分离及体外抗氧化研究

本文研究紫红獐牙菜7个酮类的分离及抗氧化活性。采用大孔吸附树脂、硅胶、聚酰胺等柱色谱法、重结晶进行分离,NMR、紫外、质谱等波谱学方法进行结构鉴定;以常用抗氧化剂Vc和BHT为阳性对照,通过DPPH·法测定紫红獐牙菜口山酮成分清除自由基的能力,并计算各单体IC50。得出在一定浓度范围内,7个单体化合物的清除能力与浓度呈量效关系;由IC50得出1,3,7,8-四羟基酮、1,5,8-三羟基-3-甲氧基酮、2-D-吡喃葡萄糖基-1,3,6,7-四羟基酮对DPPH自由基清除能力强于Vc;其他单体的抗氧化能力都低于Vc和BHT。说明1,3,7,8-四羟基酮、1,5,8-三羟基-3-甲氧基酮、2-D-吡喃葡萄糖基-1,3,6,7-四羟基酮具有很强抗氧化活性,均可作为有效的天然自由基清除剂,具有很大的开发利用前景。

HPLC法测定萸苁强肾胶囊中远志[口山]酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷

目的采用高效液相色谱法定量测定萸苁强肾胶囊中远志酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖和马钱苷。方法萸苁强肾胶囊用75%甲醇作为溶剂超声提取。Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);体积流量1.0 mL/min;远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖的测定以乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)为流动相,检测波长330 nm;马钱苷的测定以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液(1∶8∶4∶87)为流动相,检测波长234 nm。结果远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖分别在0.027 7～0.554 0μg(r=0.999 7)、0.065 1～1.302 0μg(r=0.999 9)进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.81%、99.20%,RSD(n=6)分别为0.46%、0.94%;马钱苷在0.060 8～1.216μg进样量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均加样回收率为99.08%,RSD为1.19%(n=6)。结论该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。

HPLC法测定尖叶假龙胆中3个[口山]酮苷的含量

目的：建立HPLC法同时测定尖叶假龙胆中的1，5-dihydroxy-3-methoxyxanthone 8-O-β-D-glucopyranoside （F1）、1-hydroxy-3,4-dimethoxyxanthon 7-O-β-D-glucopyranoside （F2）、1,8-dihydroxy-3,4-dimethoxyxanthone 5-O-β-D-glucopyranoside（F3）3个[口山]酮苷的含量。方法：Thermo syncronis C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，乙腈-水（24.5：75.5，V/V）等度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长为254 nm，柱温为35℃。结果：F1、F2、F3分别在14.06-281.28μg·mL^-1（R^2=0.9997）、0.56-11.16μg·mL^-1（R^2=0.9998）、0.46-9.20μg·mL^-1（R^2=0.9999）范围内线性关系良好；平均回收率（n=9）分别为99.70%（RSD=1.06%）、99.78%（RSD=1.21%）、100.28%（RSD=1.15%）。结论：该方法能快速、简便地测定尖叶假龙胆中3个主要的[口山]酮苷的含量，为该药材的质量控制研究提供了参考。

人面果[口山]酮抗糖尿病活性的筛选

为研究人面果中酮的抗糖尿病活性,筛选具有较强活性的化合物,采用MTT法检测了化合物对HepG2细胞增殖率的影响.用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞,建立了胰岛素抵抗模型(HepG2/IR),并采用葡萄糖氧化酶法,检测了不同浓度化合物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗的影响.结果表明:人面果中酮中化合物1、3、4(除化合物2、5)能够明显促进HepG2/IR细胞的葡萄糖消耗,具有潜在的抗糖尿病活性.

高速逆流色谱法分离尖叶假龙胆中[口山]酮类活性成分

目的:建立利用高速逆流色谱法分离尖叶假龙胆中两个主要的[口山]酮类活性成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的方法。方法:先后采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(9:10:9:10,v/v/v/v)和正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(6:5:6:5,v/v/v/v)两个溶剂系统,进行梯度洗脱,对尖叶假龙胆乙酸乙酯提取物进行分离,对所得馏分用Sephadex LH-20进行纯化,所得单体利用UV、MS和NMR数据确定其结构。结果:分离得到两个具有显著生理活性的[口山]酮类成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮。结论:高速逆流色谱法是一种有效的分离制备尖叶假龙胆中[口山]酮类活性成分雏菊叶龙胆酮和去甲基雏菊叶龙胆酮的方法。

印度獐牙菜中[口山]酮类成分的UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析

目的建立印度獐牙菜中[口山]酮类成分的超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)定性分析方法。方法选用Acquity HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温40℃。在正/负离子模式下采集印度獐牙菜醇提物的质谱数据,采用Masslynx4.1软件并结合SciFinder数据库、质谱数据、对照品信息和獐牙菜属植物相关文献进行数据分析。结果在印度獐牙菜中共鉴定出[口山]酮类化合物25个,其中3个成分为首次从印度獐牙菜中发现,分别是7-O-β-D-吡喃木糖-1,8-二羟基-3-甲氧基[口山]酮、Swerpunilactone B和8-O-[β-D-吡喃木糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]-1,7-二羟基-3-甲氧基[口山]酮。结论研究为印度獐牙菜中[口山]酮类化学成分的定性分析及药材质量的控制提供实验依据。

HPLC-DAD-MS法同时测定藏药花锚中6个[口山]酮类成分

目的:建立高效液相色谱-二极管阵列检测-质谱法(HPLC-DAD—MS)同时测定藏药花锚中6个(口山)酮类成分,即5个(口山)酮苷元,1-羟基-2,3,5-三甲氧基-(口山)酮(HM-1),1-羟基-2,3,4,7-四甲氧基-(口山)酮(HM-2),1-羟基-2,3,4,5-四甲氧基-(口山)酮(HM-3),1,7-二羟基-2,3,4,5-四甲氧基-(口山)酮(HM-4),1,5-二羟基-2,3-二甲氧基-(口山)酮(HM-5)及1个(口山)酮苷,1-O-β[β-D-木糖-(1—6)-β-D-葡糖]-2,3,5-三甲氧基-(口山)酮(HM-2—10)的含量。方法:采用 Alltima C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.5%醋酸(v/v)进行梯度洗脱(0 mim,20:80;20 min,70:30;30 min,80:20;30.1min,20:80;35 min,20:80),流速0.8 mL·min^(-1),检测波长252 nm,离子源 APCI,扫描模式正离子。结果:HM-1、HM-2、HM-3、HM-4、HM-5和 HM-2—10分别在0.05～5.0,0.05～5.0,0.05～5.0,0.05～10.0,0.05～5.0,0.05～2.0,0.05～2.0μg的范围内线性关系良好(r 分别为0.9999,0.9999,0.9997,0.9999,0.9999,0.9992);HM-1、HM-2和 HM-3平均回收率(n=9)分别为95.20%,99.80%,97.37%。结论:本法简便、准确,重现性好,可作为藏药花锚药材质量检测的方法。

[口山]酮的心血管药理作用研究进展

酮是广泛存在于植物和真菌的一类多酚类化合物,现已分离出数十种衍生物。该类化合物具有广泛的药理作用。在心血管系统,酮及其衍生物能减轻心脏缺血性损伤、抗动脉粥样硬化、舒张血管、抗血小板聚集和血栓形成,其机制与抑制炎症反应和氧化应激有关。

湿生扁蕾总[口山]酮通过调控TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化的影响

目的探讨湿生扁蕾总[口山]酮介导TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用2.5μg/mL脂多糖(LPS)持续干预细胞14 d建立EMT模型,CCK-8法筛选最佳湿生扁蕾总[口山]酮给药剂量。设计空白组、模型组、吡菲尼酮组(200μg/mL)和湿生扁蕾总[口山]酮低、中、高剂量组(50、100、200μg/mL),采用Western blot法检测细胞ZO-1、α-SMA、Beclin-1、P62、Bcl-2、LC3B蛋白表达,RT-qPCR法检测细胞ZO-1、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1 mRNA表达,免疫荧光观察细胞中α-SMA表达,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,MDC染色和透射电镜分别观察细胞中自噬囊泡和自噬小体数目。结果湿生扁蕾总[口山]酮质量浓度小于200μg/mL时对细胞活率无明显影响(P>0.05),故选择50、100、200μg/mL为低、中、高剂量组。与空白组比较,模型组细胞ZO-1、Beclin-1、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白和ZO-1 mRNA表达降低(P<0.01),α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail 1 mRNA和α-SMA、P62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,湿生扁蕾总[口山]酮组均能改善以上指标(P<0.05,P<0.01)。结论湿生扁蕾总[口山]酮能抑制NCM460细胞EMT发生进程,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路和增强细胞自噬有关。