口服基因疫苗质粒稳定性测定

在研究口服基因疫苗的过程中 ,为确保口服疫苗剂量 ,对转化细菌中质粒稳定性的动态变化 ,细菌浓度OD60 0 值与有效细菌 (携带质粒的细菌 )的关系等进行了测定 ,结果显示PAR3132在培养 10h前 ,pcDNA3 VP1在培养 6h前质粒在细菌中的稳定性可维持在 95 %以上 ,但当培养时间超过 16h ,2种质粒的稳定性在Amp为 5 0g/L时均不足 2 0 %。高浓度Amp可提高质粒稳定性。在质粒稳定性维持于 95 %的时段内 ,细菌浓度的OD60 0 值与有效细菌的量呈线性关系。因此 ,在确定口服基因疫苗剂量时 ,应根据细菌各自的情况决定振摇的时间和采用的OD值。

口服基因疫苗预防柯萨奇B组病毒性心肌炎的实验研究

为研制防治病毒性心肌炎的口服基因疫苗 ,本文以减毒鼠伤寒杆菌SL72 0 7作载体 ,将表达CVB3VP1基因的pcDNA3 VP1重组质粒转化入该细菌中 ,制备成口服基因疫苗。经口服免疫小鼠后 ,检测其免疫效果 ,并用CVB3攻击小鼠 ,观察其免疫保护作用 ,结果表明小鼠经 1次口服免疫后 ,血液中即产生了高滴度的抗体 ;病毒攻击后 ,免疫小鼠产生了明显的保护作用。

二型谷氨酸羧肽酶口服基因疫苗的制备及其降低大鼠麻醉药用量的初步研究

目的 研制携带二型谷氨酸羧肽酶 (GCPⅡ )的口服疫苗 ,探讨该疫苗对大鼠麻醉药用量的影响。方法 采用聚合酶链反应、酶切连接和蓝白筛选的方法 ,构建GCPⅡ的表达载体 ;用磷酸钙共沉淀的方法转染HEK2 93细胞 ,G4 18筛选阳性细胞克隆 ;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株 ;氯化钙法制备携带GCPⅡ表达载体的减毒鼠伤寒沙门氏菌口服疫苗(SL GCPⅡ ) ;采用原代培养的巨噬细胞吞噬SL GCPⅡ的方法 ,观察疫苗的体外表达情况 ;将 5 0只雄性SD大鼠随机分为A、B 2组 ,每组 2 5只 ,2组鼠的体重分别为 ( 174 g±13g)和 ( 172 g± 11g) ,差异无显著意义 (P =0 0 72 )。A组胃内灌注 6 0 0 μL、OD2 60 0 6SL GCPⅡ ,两周内 4次给药 ;B组为对照组 ,给予SL32 6 1,剂量和方法与A组相同。采用免疫荧光的方法检测大鼠循环中GCPⅡ抗体滴度 ,观察麻醉药戊巴比妥钠的用量。结果 扩增GCPⅡ基因并构建了含有GCPⅡ基因的表达载体———pCDNA3 1 GCPⅡ ;建立了细胞株HEK 2 93 GCPⅡ ;体外实验证明培养的巨噬细胞吞噬SL GCPⅡ后 ,能够有效表达GCPⅡ基因。体内实验发现口服疫苗能够激活 2 2 / 2 5只SD大鼠产生GCPⅡ抗体 ,实验组麻醉药戊巴比妥钠的用量 ( 36 9mg/kg± 1 6mg/kg)显著低于对照组 ( 4 0

转基因植物口服疫苗的前景分析

疫苗接种属于现阶段控制基本的有效方式,但是,传统的注射疫苗成本偏高、接种方式有创,并且可能发生副作用,在一定程度上制约了该种疫苗的推广。转基因植物口服疫苗是近年来研发而来的新型疫苗,成本低廉,有着突出的优势。本文主要针对转基因植物口服疫苗的应用前景进行分析。

狂犬病毒pVax-G/N融合基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

目的构建狂犬病病毒G基因和N基因的融合表达载体,导入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,为口服基因疫苗的制备打下基础。方法以质粒pVax-G为模板扩增狂犬病毒G和N基因,经连接后与酿酒酵母表达载体pYes2连接,测序鉴定后转入酿酒酵母表达菌株INVScI诱导表达pVax-G/N融合蛋白。结果融合基因pVax-G/N测序结果与预期完全符合,经过半乳糖诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,结果表明诱导表达成功。结论成功构建和表达了融合表达载体pYes2-pVax-G/N,为制备以酿酒酵母为运送载体的口服狂犬病病毒疫苗奠定基础。

基于蛋白优势表位的乙型肝炎疫苗研究

乙型肝炎是中国的常见病.本文对基于乙肝病毒抗原表位的多肽疫苗研究和基于乙肝病毒表面抗原的转基因植物技术的研究进展和存在的问题进行了分析.并就可能诱导黏膜B、T细胞免疫的基于乙肝病毒抗原优势表位多肽的转基因植物口服疫苗的研究进行了预测和展望.

融合基因Tat-HPV16L1的克隆及其在酿酒酵母中的表达

目的构建人乳头瘤病毒16型L1基因和蛋白转导肽的Tat基因的融合表达载体,导入酿酒酵母表达系统进行诱导表达,为口服基因疫苗的制备打下基础。方法以pBR322-HPV16质粒为模板扩增L1基因,与酿酒酵母表达载体pYES2连接,重组质粒再与自行设计的蛋白转导功能片段Tat连接,经测序鉴定后转入酿酒酵母表达菌株INVSc1诱导表达Tat-HPV16L1融合蛋白。结果融合基因Tat-HPV16L1测序结果与预期完全符合,经过半乳糖诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,结果表明诱导表达成功。结论成功构建和表达了融合表达载体pYES2-Tat-HPV16L1,为制备以酿酒酵母为运送载体的口服人乳头瘤病毒疫苗打下基础。