重组纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的初步研究

将已构建好的表达载体pTYB102转化大肠杆菌,经IPTG诱导,表达出以可溶形式存在的有活性的纳豆激酶.首先对表达条件进行优化,最佳诱导温度是15℃,最佳诱导时间是10 h.然后将离心收集到的菌体通过超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100柱层析以及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,得到电泳纯的有溶栓活性的纳豆激酶.冷冻干燥品在SDS-PAGE上呈一条蛋白质带.纯化倍数35倍,纯酶比活1147.54.该酶的最适反应条件是45℃,pH 8.0.酶活性在pH 6.0-11.0,55℃以下稳定.