微酸性电解水对口腔成纤维细胞的细胞毒性研究

目的研究微酸性电解水对口腔成纤维细胞的细胞毒性。方法将有效氯浓度为10～40mg/L微酸性电解水原液分别作用于牙龈成纤维细胞,牙髓细胞,牙周膜成纤维细胞,通过CCK-8法分别观察1min、5min、15min、30min和1h计算细胞相对增殖率(RGR),通过台盼蓝排除实验计算活细胞率。进行相同实验,研究加入0. 5～2mg/ml牛血清白蛋白(BSA)后的微酸性电解水(FAC:10～40mg/L)对三种细胞的细胞毒性。结果微酸性电解水原液作用于牙龈成纤维细胞,牙髓细胞,牙周膜成纤维细胞,通过两种实验方法检测均显示不同程度的细胞毒性作用,而在使用了BSA对微酸性电解水进行预处理后,细胞毒性作用消失。结论在模拟唾液内蛋白质浓度水平的BSA的作用下,微酸性电解水对口腔成纤维细胞未显示细胞毒性。

槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

目的探讨槟榔碱(ARE)通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法以人单核细胞系(THP-1)与人口腔黏膜成纤维细胞系(HOMF)为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组(CS)、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组(EXO)、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组(NES)、miR-155-5p过表达组(miR-155-5p mimics)、ARE刺激后EXO处理对照组(NC+EXO-ARE)和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理(miR-155-5p inhibitor EXO-ARE)组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果流式检测显示,相较于对照组,ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和HOMF细胞的刺激结果显示,相较于对照组,CS组与EXO组HOMF细胞迁移能力增强;细胞内氧化应激水平上调;细胞内miR-155-5p水平升高;细胞内α-SMA、I型胶原mRNA转录增多(1.90±0.08 vs 3.17±0.08;3.19±0.05 vs 5.65±0.01,P<0.05),SOCS1的m RNA转录减少(1.08±0.06 vs 0.34±0.02,P<0.05);α-SMA、I型胶原蛋白表达上调,SOCS1蛋白表达下调。miR-155-5p操纵实验显示,与阴性对照组相比,miR-155-5p mimics组HOMF细胞迁移能力增强,细胞内α-SMA和I型胶原蛋白表达上调;而与NC+EXO-ARE组相比,miR-155-5p inhibitor组HOMF细胞迁移能力减弱,细胞内α-SMA和I型胶原mRNA转录减少(5.84±0.08 vs 2.00±0.98;7.32±0.51 vs 2.33±0.43,P<0.05);α-SMA、I型胶原蛋白表达下调。结论ARE可上调THP-1胞内miR-155-5p并经外泌体途径转导和抑制HOMF胞内SOCS1蛋白表达,促进HOMF细胞的纤维化表型转化。

牛黄对小鼠口腔成纤维细胞功能的调节作用

探讨牛黄对原代小鼠口腔成纤维细胞功能的影响,揭示其在溃疡愈合过程中的作用及机制。本试验采用MTT法、氯胺-T法、明胶酶谱分析和酶联免疫反应测定了牛黄对小鼠口腔成纤维细胞增殖、胶原沉积、金属蛋白酶-2、-9活性和基质金属蛋白酶抑制因子-1合成的影响。结果表明牛黄能显著抑制小鼠口腔成纤维细胞的增殖、胶原沉积和金属蛋白酶-2活性,同时也极显著(P<0.01)抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1的产生。结果提示牛黄在溃疡愈合过程中不具生肌作用,可能通过抗炎促进溃疡愈合;其抑制胶原合成的机制可能与极显著抑制基质金属蛋白酶抑制因子-1有关。

脂肪干细胞来源的生长因子与口腔黏膜成纤维细胞增殖

背景:近年来脂肪干细胞被证实对软组织创伤修复具有促进作用,关于其机制的研究中,更多的学者倾向于脂肪干细胞的旁分泌机制,即脂肪干细胞分泌的各种细胞因子对创伤部位细胞的修复功能具有促进作用。但脂肪干细胞分泌的因子种类,每种因子的含量,以及对软组织创伤修复,尤其是口腔黏膜的作用,鲜有报道。目的:观察脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子对口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响。方法:采用蛋白芯片技术,检测脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子的含量。分别于1,2,3,4,5d时,采用CCK-8法检测0,1,10,20,50,100μg/L血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子以及在脂肪干细胞条件培养液中分别加入上述各因子的中和抗体后,对口腔黏膜成纤维细胞增殖的影响。结果与结论:脂肪干细胞条件培养液中血管内皮生长因子、血小板源性生长因子以及碱性成纤维细胞生长因子信号值均大于300。脂肪干细胞条件培养液对成纤维细胞的增殖有明显的促进作用,其中,血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的促进作用非常明显,且随着因子浓度的变化而呈现峰值性改变,血小板源性生长因子的促进作用在50μg/L时达到峰值,碱性成纤维细胞生长因子的促进作用在1μg/L时达到峰值(P≤0.05),两者的中和抗体均能抑制脂肪干细胞条件培养液对口腔黏膜成纤维细胞的促进作用;而血管内皮细胞生长因子对成纤维细胞增殖无明显的促进作用。实验结果提示脂肪干细胞条件培养液可促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖,其中所含有的血小板源性生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的促进作用非常明显,且具有浓度依赖性,因此应注意选择适宜的细胞因子浓度,从而有效地促进成纤维细胞增殖。

rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨rhGM CSF促进口腔溃疡愈合的作用机制。方法 取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞 ,用rhGM CSF刺激成纤维细胞后第 2、4、6天用细胞计数及3 H 胸腺嘧啶掺入法 (3 H TdR)测定其增殖情况。结果 rhGM CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用 ,在 80～ 10 0ng/ml时 ,细胞生长达到最佳状态 ,过高浓度rhGM CSF的刺激作用反而下降。结论 rhGM

槟榔碱对α平滑肌肌动蛋白在口腔黏膜成纤维细胞中表达的影响

目的了解肌成纤维细胞与口腔黏膜下纤维性变(OSF)的关系并探讨肌成纤维细胞分化的来源和机制。方法体外培养正常口腔黏膜成纤维细胞和OSF成纤维细胞,用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测α平滑肌肌动蛋白的表达,并观察槟榔碱对其表达的影响,同时用ELISA方法检测了槟榔碱对成纤维细胞合成TGFβ1的影响。结果OSF来源的成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白表达明显高于正常口腔黏膜成纤维细胞,槟榔碱对体外培养成纤维细胞合成α平滑肌肌动蛋白和TGFβ1水平无明显影响。结论肌成纤维细胞可能在OSF的发病中起作用;OSF中肌成纤维细胞的来源可能与槟榔成分对成纤维细胞的直接作用无关。

VEGF-D在口腔鳞癌相关成纤维细胞的表达研究

目的:研究VEGF-D在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的表达情况以及其表达水平是否与口腔鳞癌淋巴结转移相关。方法:通过免疫组化和RT-PCR检测VEGF-D在NFs、无淋巴结转移CAFs、淋巴结转移CAFs的蛋白和mRNA表达情况。结果:成功培养和纯化CAFs,与NFs相比,CAFs阳性表达α-SMA,生长增殖速度明显增加,细胞排列混乱;VEGF-D在淋巴结转移CAFs的染色强度明显增加,用2-ΔΔCT法计算VEGF-D的mRNA表达水平分别为0.806 7±0.117、1.192 5±0.125、2.085 3±0.131。结论:与NFs相比,CAFs表达VEGF-D明显增加,且与患者淋巴结转移相关。

TNF-α和槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达的影响及姜黄素对其影响的作用

目的:探讨TNF-α和槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达的影响及姜黄素对其影响的作用。方法:体外培养口腔黏膜成纤维细胞,分别用100~10000 U/mL TNF-α和10~40μg/mL槟榔碱作用于细胞24~72 h,CCK-8实验检测细胞增殖,ELISA测定细胞中羟脯氨酸的表达。用5~40μmol/L的姜黄素作用于2种处理的细胞,检测细胞增殖和羟脯氨酸蛋白的表达。结果:TNF-α促进细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达(P<0.05),槟榔碱抑制细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达(P<0.05)。40μmol/L的姜黄素作用于TNF-α和槟榔碱刺激的口腔黏膜成纤维细胞,在24 h和48 h时抑制细胞增殖(P<0.05)。不同浓度的姜黄素作用于TNF-α和槟榔碱刺激的口腔黏膜成纤维细胞,均能抑制羟脯氨酸合成(P<0.05)。结论:TNF-α可促进口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达,槟榔碱能抑制口腔黏膜成纤维细胞增殖和羟脯氨酸蛋白表达,较高浓度姜黄素能减弱TNF-α的刺激作用,增强槟榔碱的抑制作用。

口腔鳞癌相关成纤维细胞能量代谢表型的实验研究

目的运用细胞代谢呼吸动态分析仪研究口腔鳞癌相关成纤维细胞(oral cancer associated fibroblasts,CAFs)能量代谢表型,为靶向CAFs代谢治疗口腔鳞癌提供研究依据。方法原代培养CAFs和癌旁正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),细胞代谢呼吸动态分析仪对CAFs和NFs进行线粒体和糖酵解压力测试,通过比较CAFs和NFs的OCR、ECAR值分析二者氧化磷酸化和糖酵解代谢水平的差异,得出CAFs能量代谢表型。结果 CAFs和NFs氧化磷酸化基础水平基本一致,CAFs氧化磷酸化最大值和储备值明显提高(P<0.01);CAFs糖酵解基础值、最大值和储备值均明显高于NFs(P<0.01)。结论 CAFs氧化磷酸化和糖酵解代谢能力较NFs显著增强,氧化磷酸化水平的增强主要体现在储备能力上,抑制CAFs氧化磷酸化储备能力可能成为新的抑癌靶点。

扶正活血解毒方干预ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的实验研究

目的观察槟榔提取液(areca nut extract,ANE)对口腔黏膜成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌的诱导作用及扶正活血解毒方的干预作用。方法体外培养口腔黏膜成纤维细胞,ANE为诱导剂,扶正活血解毒中药药物血清(低、中、高)为干预物;用免疫细胞化学法检测细胞内Ⅰ型胶原的表达,用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测培养上清Ⅰ型胶原的含量。结果 ANE对口腔黏膜成纤维细胞Ⅰ型胶原的合成有促进作用(P<0.01),扶正活血解毒方含药血清(中、高)对ANE刺激下的FB胶原合成有抑制作用(P<0.05)。结论扶正活血解毒中药可下调ANE诱导的口腔黏膜成纤维细胞Ⅰ型胶原的表达。

血管活性肠肽对人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF-α的影响

目的观察血管活性肠肽(VIP)对脂多糖(LPS)诱导下人口腔颊黏膜成纤维细胞表达TNF-α的影响,进一步探讨VIP在口腔扁平苔藓(OLP)发生发展中的作用机制。方法体外培养正常人口腔颊黏膜成纤维细胞,以LPS和/或不同浓度VIP刺激,收集其上清液,ELISA法测定TNF-α水平。结果 10-8mol/L VIP处理组TNF-α表达量明显低于LPS致炎组(P<0.05)。结论 10-8mol/L VIP对LPS诱导的人口腔颊黏膜成纤维细胞TNF-α的表达有明显抑制作用,VIP可能在OLP发生发展中起保护作用。

鹿茸多肽CNT14对口腔黏膜成纤维细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨鹿茸多肽CNT14促进口腔黏膜成纤维细胞(human oral mucosa fibroblasth,hOMF)增殖和迁移的作用和相关分子机制。方法:采用活/死细胞染色评价鹿茸多肽CNT14对hOMF细胞的生物安全性,CCK-8法检测鹿茸多肽CNT14对hOMF细胞增殖的作用,细胞划痕实验检测鹿茸多肽CNT14对hOMF细胞迁移的影响。采用蛋白质免疫印迹检测鹿茸多肽CNT14刺激后hOMF细胞内α-SMA、TGF-β1、Smad2和p-Smad2蛋白的情况;Smad2抑制剂对鹿茸多肽CNT14诱导成纤维细胞活化的影响。在新西兰大白兔体内构建角化龈缺损模型,取再生的牙龈组织进行H-E染色;免疫组织化学检测新西兰大白兔再生的牙龈组织中α-SMA、TGF-β1、Smad2和p-Smad2蛋白的表达量,补充验证鹿茸多肽CNT14促进口腔牙龈组织再生的能力。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:活/死细胞染色实验中,鹿茸多肽CNT14处理hOMF细胞后,细胞存活率在95%以上。鹿茸多肽CNT14刺激hOMF细胞后,与对照组相比,增殖和迁移率显著增加(P<0.05)。鹿茸多肽CNT14刺激hOMF细胞后,细胞内α-SMA、TGF-β1、Smad2和p-Smad2蛋白表达量显著升高(P<0.05)。经Smad2抑制剂阻断鹿茸多肽CNT14诱导成纤维细胞后,细胞内α-SMA表达下降。动物实验中,H-E染色显示,CNT14处理组新西兰大白兔口腔黏膜创口的炎症反应比对照组轻。免疫组织化学染色结果显示,CNT14处理新西兰大白兔牙龈创口后第9天和第11天,再生的牙龈组织中α-SMA、TGF-β1、Smad2和p-Smad2表达量与对照组相比显著升高(P<0.05)。结论:鹿茸多肽CNT14对hOMF细胞具有良好的生物安全性,能促进口腔黏膜成纤维细胞增殖和迁移,细胞内α-SMA、TGF-β1、Smad2和p-Smad2蛋白表达量升高,有效促进牙龈组织再生。

直流生物电刺激活化PTEN/Akt/mTOR信号通路促进人口腔黏膜成纤维细胞增殖的研究

目的:探讨直流电刺激(direct current stimulation,DCS)对人口腔黏膜成纤维细胞(human oral mucosa fibroblast,hOMF)增殖的影响及相关机制。方法:以不同强度(0、10、25、50、100μA)、时长(0、5、10、30、60 min)、频率(0、1、2、3次/d)的DCS作用于hOMF,应用CCK-8法检测细胞增殖情况。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测DCS组与对照组(接种的细胞贴壁后,随机设置DCS组及对照组)24、48 h细胞培养上清液中表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度。通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测经DCS后的hOMF中蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)及磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian rapamycin target protein,p-mTOR)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达水平。结果:通过检测DCS强度梯度、时间梯度、频率梯度的吸光度值可知,25μA的电流强度(P<0.01)、10 min的刺激时长(P<0.001)及2次/d的刺激频率(P<0.01)为hOMF的显著增殖刺激条件。相较于对照组,DCS组24 h和48 h细胞培养上清液中VEGF的浓度均有所升高,24 h培养上清液中的VEGF浓度升高更为明显(P<0.01)。在不同时长的DCS下,刺激5、10 min后的p-mTOR和p-Akt的蛋白表达升高(P<0.05),PTEN的蛋白表达降低(P<0.001)。结论:DCS可促进hOMF的增殖,诱导细胞因子VEGF的高表达,可能与PTEN/Akt/mTOR信号通路的激活有关。

Tiger17促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移

目的观察在不同浓度Tiger17作用于人口腔黏膜成纤维细胞(hOMF)不同时间后对细胞增殖和迁移的影响。方法培养hOMF细胞,CCK8和划痕实验检测不同浓度Tiger17作用于hOMF细胞不同时间后细胞增殖和迁移的变化;Western Blot检测hOMF细胞表达TGF-β1、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的水平。结果100μg/mL和200μg/mL Tiger17对hOMF的增殖活性在48 h明显高于对照组(P<0.05);100μg/mL Tiger17对hOMF的迁移率在24 h和48 h均明显高于对照组(P<0.01);不同浓度的Tiger17作用于hOMF 24 h和48 h后,细胞表达TGF-β1、p-Erk1/2蛋白升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Tiger17使hOMF细胞表达TGF-β1、pErk1/2升高,促进hOMF细胞的增殖和迁移。

口腔鳞癌相关成纤维细胞糖代谢的初步研究

目的通过对口腔鳞癌相关成纤维细胞(carcinoma-associate fibroblasts,CAFs)糖代谢相关指标的检测,探讨肿瘤微环境CAFs糖代谢的可能方式并分析其作用和意义。方法培养CAFs和癌旁正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),詹纳斯绿B染色观察线粒体的数量及分布,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位的改变。培养1、2、3、4 d,通过定磷法用可见分光光度计检测细胞中ATP的含量,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测细胞摄取葡萄糖的能力,乳酸酶法检测细胞分泌乳酸情况。结果与NFs组相比,CAFs线粒体詹纳斯绿B和JC-1荧光染色强度明显下降,显示CAFs线粒体活性下降。随着培养时间的延长,CAFs较NFs组摄取葡萄糖增多,ATP产能却减少,分泌乳酸增加,差异均有统计学意义(P<0.05);以培养第4天差异更明显,CAFs和NFs组培养基葡萄糖浓度分别为(10.85±1.42)、(16.04±1.09)mmol/L,产生ATP浓度分别为(42.99±4.64)、(57.37±2.75)μmol/g,产生乳酸浓度分别为(12.1±0.81)、(7.06±0.95)mmol/L。结论口腔鳞癌CAFs细胞糖代谢方式发生了改变,以糖酵解为主。

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞病变的影响

目的分析槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞(OMFb)微丝骨架及胶原吞噬的影响。方法取正常人口腔黏膜,行组织块法培养,取第6代细胞行不同浓度槟榔碱(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)干预,检测12h、24h、48h后细胞增殖情况;分析24h后胶原吞噬率变化情况;观察24h后细胞微丝骨架变化情况。结果槟榔碱干预12h后,不同槟榔碱浓度OMFb增殖情况差异无统计学意义(P>0.05);24h后,10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb增殖率上升,且20μg/mL浓度组增殖率>10μg/mL浓度组;30μg/mL、40μg/mL浓度组OMFb无增殖;48h后,各浓度槟榔碱均对OMFb增殖存在抑制效用。10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb胶原吞噬能力存在明显改善,而30μg/mL、40μg/mL浓度组胶原吞噬能力被抑制。此外,10μg/mL、20μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架表现为粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强,且10μg/mL浓度组变化情况高于20μg/mL浓度组;而40μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架明显减少,30μg/mL浓度组次之,细胞皮层出现大量染色聚集物质。结论低浓度槟榔碱在增强OMFb活性、胶原吞噬能力等方面具有显著促进作用,但高浓度则具有抑制作用。此外,低浓度的槟榔碱还可增强OMFb细胞微丝骨架聚合,而高浓度槟榔碱则可以抑制OMFb细胞微丝骨架聚合,这可能是口腔黏膜下纤维性变的主要发病机制之一。

慢病毒载体感染人口腔黏膜成纤维细胞稳定表达绿色荧光蛋白的研究

目的:确立慢病毒载体高效感染人口腔黏膜成纤维细胞的感染条件,为进一步应用基因工程技术研究人口腔黏膜成纤维细胞奠定基础。方法:采用组织块法培养原代人口腔黏膜成纤维细胞,免疫组化SP法鉴定细胞类型,将携带绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染纯化细胞,并设置不同感染条件,感染4 d后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功分离纯化得到人口腔黏膜成纤维细胞,当慢病毒感染复数为30,polybrene浓度为8μg/mL,并加入感染增强液时,可达到较高的感染效率,满足后续实验需要。结论:慢病毒载体可高效感染人口腔黏膜成纤维细胞,携带的绿色荧光蛋白基因可在成纤维细胞内稳定表达。

槟榔碱预处理后的Hacat细胞及人口腔黏膜成纤维细胞中AngⅡ及AT1R蛋白的表达研究

目的:通过检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)在不同浓度槟榔碱预处理后的Hacat细胞及人口腔黏膜成纤维细胞(OMFB)中的表达与分布情况,了解槟榔碱对这两种细胞表达AngⅡ及AT1R的影响,探讨口腔黏膜下纤维性变(OSF)可能的发病机制。方法:采用免疫细胞化学SABC法,分别测定AngⅡ及AT1R兔抗人多克隆抗体在Hacat细胞和OMFB及分别在20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL槟榔碱预处理后的这两种细胞中的表达与分布情况。结果:①0～80μg/mL槟榔碱预处理后Hacat细胞中AngⅡ蛋白均有表达,80μg/mL预处理组阳性细胞数高于其余3组,差别有统计学意义(P<0.01)。②对照组及20μg/mL槟榔碱干预组Hacat细胞中未见明显AT1R蛋白表达,40μg/mL槟榔碱干预组细胞中AT1R蛋白弱阳性表达,80μg/mL槟榔碱干预组细胞AT1R蛋白呈阳性表达,表达有显著性差异(P<0.01)。结论:一定浓度的槟榔碱可以诱导Hacat细胞中AngⅡ及AT1R蛋白的表达升高,且二者的表达多位于发生了形态学变化的细胞上,推测AngⅡ及AT1R可能参与了槟榔碱的致OSF进程。

壳多糖-胶原凝胶构建组织工程口腔黏膜固有层

背景:有研究探讨了以胶原/壳聚糖聚合物为支架材料构建组织工程人工皮肤的可行性。目的:拟探讨以壳多糖-胶原凝胶支架材料与口腔黏膜成纤维细胞在体外构建人工固有层的可行性。方法:口腔黏膜成纤维细胞取自成年鼠颊部、牙龈或腭部。以2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液、壳多糖等或2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液等按一定比例配置成凝胶溶液,将大鼠口腔黏膜成纤维细胞与上述凝胶溶液迅速混合制成口腔黏膜人工固有层,动态观察细胞生长状况和凝胶收缩情况。结果与结论:胶原-口腔黏膜成纤维细胞复合物、壳多糖-胶原-口腔黏膜成纤维细胞复合物体外培养1d,口腔黏膜成纤维细胞在支架材料中生长良好,细胞呈长梭形,排列无一定方向。随时间推移,口腔黏膜成纤维细胞逐渐增多,凝胶颜色变浅,厚度变薄,分别于2,3d后发生收缩。结果证实,口腔黏膜成纤维细胞可在壳多糖-胶原凝胶形成的三维空间结构生长并分泌基质,形成类似黏膜固有层的致密结缔组织。壳多糖-胶原凝胶是构建组织工程化口腔黏膜固有层的合适材料。

壳多糖-胶原凝胶体外构建口腔黏膜固有层的可行性研究

目的探讨以壳多糖-胶原凝胶为支架材料,利用口腔黏膜成纤维细胞(oral mucous fibroblast,OMF)在体外构建口腔黏膜人工固有层的可行性。方法将2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液、壳多糖等按一定比例配置成凝胶溶液,大鼠OMF与上述凝胶溶液迅速混合制成口腔黏膜人工固有层,动态观察细胞生长状况和凝胶收缩情况。结果成功建立大鼠OMF种子细胞库,原代细胞与传代细胞在形态和生长速度差异无统计学意义。壳多糖-胶原-OMF复合物(FPCCL)体外培养10d,OMF在支架材料中生长良好,细胞呈长梭形,排列无一定方向。随时间推移,OMF逐渐增多,凝胶颜色变浅,厚度变薄,3d后发生收缩,7d后则凝胶人工固有层稳定,无明显收缩。结论 OMF可在壳多糖-胶原凝胶形成的三维空间结构生长并分泌基质,形成类似黏膜固有层的致密结缔组织。壳多糖-胶原凝胶是构建组织工程化口腔黏膜固有层的合适材料。