口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液中CYFRA21-1水平与口腔上皮癌变进程的相关性研究

目的 探讨口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液中细胞角蛋白19片段(Cytokeratin-19-fragment, CYFRA21-1)水平与口腔上皮癌变进程的相关性。方法 对口腔疾病患者102例进行回归性分析,包括舌白斑57例(白斑组),口腔鳞状细胞癌45例(鳞癌组),另选同期检查口腔黏膜正常人员44例(正常组),对比各组人员的口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液中CYFRA21-1水平,分析各指标与口腔上皮癌变进程之间的关系。结果 三组的口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液CYFRA21-1表达水平:鳞癌组>白斑组>正常组,三组对比差异具有统计学意义(P<0.05);组间两两对比差异具有统计学意义(P<0.05)。鳞癌患者中晚期组的口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液CYFRA21-1表达水平均高于早期组,两组对比差异具有统计学意义(P<0.05)。根据单因素及多因素统计分析得,分化程度、淋巴结转移情况、口腔黏膜微核细胞计数、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1均为口腔鳞状细胞癌的癌症进程独立危险因素(P<0.05)。口腔黏膜微核细胞计数、血清CYFRA21-1、唾液CYFRA21-1单项检测的敏感度分别为84.0%、72.0%、64.0%,特异度为78.9%、68.4%、73.7%;联合检测的敏感度和特异度分别为88.0%、84.2%,其中联合检测的敏感度和特异度最高,对早期鳞癌和癌前病变的诊断效能最好。结论 口腔黏膜微核细胞计数及血清、唾液CYFRA21-1与口腔鳞癌的疾病进程存在密切联系,可以帮助预测诊断早期口腔鳞癌及癌前病变。

口腔粘膜下纤维性变患者角朊细胞分泌细胞因子水平变化

目的 :探讨口腔粘膜上皮角朊细胞 (KC)和细胞因子在口腔粘膜下纤维性变 (OSF)发生中的作用。方法 :分别从正常及OSF组织培养出KC(NM KC和OSF KC) ,用放射免疫法和酶联免疫吸附法测定培养细胞上清液中内皮素(ET)和β1转化生长因子 (TGFβ1)的水平。结果 :OSF KC分泌ET和TGFβ1水平均高于NM KC(P <0 .0 5 ) ,且两者呈正相关关系。结论 :外源性刺激导致的KC活化及其分泌的ET和TGFβ1的改变可能在OSF发生中起重要作用。

口腔粘膜癌变过程中细胞角蛋白CK10和CK13的变化

目的：探讨细胞角蛋白ＣＫ１０和ＣＫ１３在口腔粘膜癌变过程的各阶段组织中的分布和表达强度。方法：用ＬＳＡＢ免疫组化染色方法对口腔正常粘膜、上皮单纯增生、上皮异常增生和口腔磷癌切片进行染色，光镜观察。结果：正常颊粘膜和口底舌腹粘膜基底上层ＣＫ１０表达阴性，ＣＫ１３表达强阳性；上皮过度不全角化时，ＣＫ１０表达可为阳性，ＣＫ１３表达减少；上皮过度正角化时，ＣＫ１０在基底上层呈强阳性表达，ＣＫ１３表达进一步减少甚至缺失。随上皮异常增生程度加重，基底上层细胞ＣＫ１０和ＣＫ１３表达减少甚至缺失。在口腔浸润癌中，不管分化程度如何，ＣＫ１３均表达阴性，而ＣＫ１０在分化较好的癌细胞及癌巢中呈阳性表达。结论：ＣＫ１３表达减少或缺失可作为口腔癌前病变诊断的辅助指标，ＣＫ１０可为口腔癌的分化程度及其预后判定提供帮助。

人口腔黏膜角化上皮细胞的体外培养及生物学特性研究

目的:探讨人口腔黏膜角化上皮细胞的体外培养扩增方法及其生物学特性。方法:取牙周手术中切取的正常角化牙龈组织,经0.25％Dispase分离上皮层后,0.05％的胰酶分离为单个细胞,接种在无血清培养基中,进行原代培养及传代培养,并进行形态学观察、角蛋白免疫组化染色及其生长曲线、传代特点、各代生长特点的观察。结果:口腔黏膜角化上皮细胞能够在Epilife无血清培养基中稳定增殖传代,可连续传4-6代,成活45-60d,细胞生长呈铺路石状,角蛋白免疫组化染色阳性。结论:应用Epilife无血清培养基,可在短期内获得大量具有增殖能力的口腔黏膜角化上皮细胞。

口腔粘膜下纤维化、白斑及鳞癌上皮细胞内皮素1表达的定量分析

目的 :探讨内皮素 (ET 1)在口腔癌变发病机制中的作用和意义。方法 :采用免疫组化染色SABC法和图象分析技术 ,对人口腔粘膜下纤维化 (OSF) 10例、白斑 (OLK) 9例、鳞状细胞癌 (SCC) 14例及正常口腔粘膜(NOR) 10例的上皮细胞ET 1表达进行定量分析。结果 :①ET 1在OSF、OLK、SCC组织中的表达增强 ,阳性颗粒主要位于上皮棘细胞、基底细胞的胞浆胞膜上。ET 1表达阳性率和含量显著高于正常对照 (P <0 .0 1)。②OLK、SCC上皮细胞ET 1含量呈显著增加趋势 (P <0 .0 5 )。③OSF上皮细胞ET 1含量显著高于OLK(P <0 .0 5 ) ,与SCC相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :ET 1含量在口腔癌前病变至癌变过程中可能存在一种量变关系 ,OSF中ET 1过量表达可能提示其上皮细胞的癌变潜能 ,ET 1与OSF、OLK。

正常口腔粘膜上皮的细胞角蛋白的表达

目的 :探讨CK10、CK13、CK18、CK19在正常口腔粘膜中的表达。方法 :正常颊粘膜、舌腹口底粘膜、附着龈粘膜、舌背粘膜标本各 8例 ,10 %中性福尔马林液固定 ,石蜡包埋 ,5 μm连续切片 ,用LSAB法进行CK10、CK13、CK18、CK19的免疫组化染色。结果 :正常颊粘膜和舌腹口底粘膜基底细胞层散在表达CK19,基底上层表达CK13;正常附着龈粘膜基底上层表达CK10 ;正常舌背粘膜基底细胞层可散在表达CK19,基底上层表达CK10和 或CK13。结论

单层上皮细胞角蛋白在口腔粘膜癌变过程中的表达

目的 :探讨单层上皮细胞角蛋白 CK18和 CK19作为口腔癌前病变标志的可能性。方法 :用 L SAB免疫组化染色方法检测 CK18和 CK19在福尔马林固定、石蜡包埋的口腔正常粘膜、上皮单纯增生、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生和口腔鳞癌组织中的分布和表达强度 ,光镜观察染色切片 ,结果用秩和检验分析。结果 :正常和异常的口腔粘膜均未检测到 CK 18;CK 19可表达于正常非角化上皮的基底层细胞、异常增生上皮的基底上层细胞及口腔鳞状细胞癌中 ,阳性细胞数与上皮的异常增生程度及鳞癌的分化程度相关。结论 :CK19表达于口腔上皮基底上层细胞可作为诊断口腔癌前病变和判断口腔鳞癌分化程度的候选辅助指标之一。

转化生长因子β对口腔粘膜角化细胞增殖的影响

目的:探讨转化生长因子(TGF－β)对口腔粘膜角化细胞增殖分化的调控作用及其机制。方法:对人口腔粘膜上皮角化细胞(KC)进行分离,传代培养和鉴定,加入含有不同质量浓度的 TGF－β培养液培养3 d,然后用四唑盐(MTT)比色试验检测TGF－β对 KC增殖状况的影响。结果:体外培养 KC呈多角形,胞浆内有丰富的张力细丝,表面有大量微绒毛,角蛋白抗体免疫组化呈阳性。TGF－β在一定的浓度范围内对KC的增殖起抑制作用。结论:TGF－β对体外培养的KC增殖有抑制作用。

细胞角蛋白与口腔上皮细胞分化

细胞角蛋白是上皮细胞的骨架蛋白,在人体上皮细胞中共有19种。在一既定上皮细胞中,其分布有一定的规律性。本文重点讨论了口腔上皮在正常和病理情况下的角蛋白分布特征,表明应用抗细胞角蛋白单克隆抗体辅助口腔病理诊断是很有潜力的。

人口腔粘膜上皮细胞的培养及生物学特性的研究

目的：探讨口腔粘膜上皮细胞的培养扩增方法及生物学特性。方法：取手术中切除的多余粘膜，分别用胰酶和Ｄｉｓｐａｓｅ分离后经胰酶消化，接种无血清培养基。将二者细胞数量、活力及融合时间加以比较，同时对细胞各代增值特点、生长曲线、克隆形成率及血清对细胞分化的影响进行观察。结果：Ｄｉｓｐａｓｅ分离法的细胞总数，活细胞数均高于胰酶分离法。粘膜上皮细胞能够在无血清培养基稳定增殖传代，血清对上皮细胞有诱导分化作用。结论：Ｄｉｓｐａｓｅ分离的无血清培养技术可短期内获得大量具增殖能力的粘膜上皮细胞。

毛发上皮瘤与角化型基底细胞癌细胞形态及DNA含量定量分析

目的利用体视学技术对毛发上皮瘤及角化型基底细胞癌组织病理相似部分基底样细胞瘤块进行细胞形态及细胞核ＤＮＡ含量分析。方法每组各选５例进行细胞及细胞核形态及大小的测定，各选３０例进行细胞核ＤＮＡ含量定量分析。结果细胞形态及大小两组无差异（Ｐ＞０．０５），细胞核形态及大小的各参量值两组有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。毛发上皮瘤组３０例均为二倍体，角化型基底细胞癌组有异倍体１６例。结论两组肿瘤细胞的形态及大小相似，但角化型基底细胞癌的细胞核相对较大，且不规整，显示了恶性肿瘤的形态学特征。角化型基底细胞癌呈恶性生物学行为，而毛发上皮瘤则呈良性。

口腔粘膜上皮细胞原代培养影响因素分析

目的 :分析影响口腔粘膜上皮细胞原代培养影响因素 ,探讨理想的培养条件。方法 :观察不同的标本处理方法 ,上皮分离方法以及上皮消化酶对原代培养成功率、细胞融合和活细胞率的影响。结果 :标本处理方法、上皮分离方法以及上皮消化酶分别对原代培养污染机率 ,细胞融合时间和活细胞率有影响。结论 :口腔粘膜上皮细胞原代培养按优化方法可获得较高的成功率。

角化细胞生长因子对骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肺泡上皮细胞的实验研究

目的观察角化细胞生长因子(KGF)对体外小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肺泡上皮细胞诱导分化的影响。方法建立体外非接触共培养诱导小鼠MSCs向肺泡上皮细胞分化的实验模型,并在培养液中加入KGF(10μl/ml),小鼠分4组(6只/组),实验组A:MSCs(1×105)单独培养组+KGF;实验组B:MSCs+正常肺组织悬液(1×105)+KGF;实验组C:MSCs+损伤肺组织悬液+KGF;实验组D:MSCs+损伤肺组织悬液(1×105)。共同培养8 d,应用激光共聚焦显微镜和RT-PCR检测共培养体系下室MSCs中的SP-C和AQP5的表达情况。结果实验组C于共培养的d 8,较其它实验组的AQP5 mRNA的表达量明显增多(5550.00±244.39vs1650.17±184.02,1600.83±193.00,2890.00±179.09,P均<0.05);于共培养的d 5,与实验组A相比差异也有统计学意义(1743.17±228.41vs1482.00±156.11,P<0.05)。只有实验组C和D表达SP-C,且实验组C各培养时间点的SP-C的mRNA的表达量均较实验组D明显增多(2632.50±231.11vs1599.00±158.95;3976.67±221.81vs2066.83±101.31;5388.33±347.96vs3893.17±178.61,P均<0.01)。结论KGF可以进一步促进体外小鼠MSCs诱导分化为肺泡上皮细胞。

白色念珠菌粘附口腔粘膜上皮细胞配体的初步研究

目的 :研究白色念珠菌对口腔粘膜上皮细胞的粘附配体。方法 :采用体外法测定白色念珠菌对口腔上皮细胞的粘附数量。结果 :D-甘露糖预作用于上皮细胞之后 ,可以使白色念珠菌粘附下降 ,刀豆素 A及绿慕安预作用于白色念珠菌 ,可以减少白色念珠菌对上皮细胞的粘附。结论 :白色念珠菌粘附感染与其表面甘露糖结构有关。

口腔粘膜癌前病变及口腔鳞状上皮细胞癌p53、p16蛋白和PCNA的表达

目的:探讨口腔粘膜癌前病变及口腔鳞状细胞癌发生与发展过程中 ,p5 3蛋白、p16蛋白和 PCNA的表达及意义。方法:应用免疫组织化学方法对 2 0例口腔扁平苔藓、2 0例口腔白斑、2 0例口腔鳞状细胞癌分别进行检测。结果:(1)口腔鳞状细胞癌组织中突变型 p5 3蛋白阳性率为 90 .0 %,明显高于口腔白斑 (10 .0 %)和口腔扁平苔藓 (0 .0 %) (P <0 .0 0 5 )。(2 )口腔鳞状上皮细胞癌组织中 p16蛋白阳性率为 35 .0 %,明显低于口腔白斑 (70 .0 %)和口腔扁平苔藓 (90 .0 %) (P <0 .0 0 5 )。 (3) PCNA的阳性率在口腔鳞状细胞癌组织中为 90 .0 %,明显高于口腔白斑(10 .0 %)和口腔扁平苔藓 (0 .0 %) (P <0 .0 0 5 )。 结论:p5 3基因突变使 p5 3蛋白过度表达、p16蛋白表达缺失和PCNA的过度表达在口腔鳞状上皮细胞癌的发生与发展过程中起着十分重要的作用。

单细胞凝胶电泳技术检测吸烟者口腔粘膜上皮细胞DNA的损伤

目的检测吸烟者口腔粘膜脱落上皮细胞DNA的损伤状况,探讨单细胞凝胶电泳技术在研究烟草化学物所造成DNA损伤的应用价值。方法采用单细胞凝胶电泳技术检测24例吸烟者和17例非吸烟者的口腔粘膜脱落上皮细胞DNA损伤,并按吸烟年限、日均吸烟量、不同年龄和性别进行分析,观察指标为彗星尾长和彗星率。结果吸烟组的彗星尾长为(2.35±0.08)μm,慧星率为15.38%,非吸烟组的彗星尾长为(0.92±0.06)μm,彗星率为4.21%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且随吸烟年限和吸烟量的增加,彗星尾长和彗星率有增加趋势。两组>50岁和男性对象,吸烟组DNA损伤高于非吸烟组。结论吸烟可导致口腔粘膜上皮细胞DNA损伤,并且存在一定的剂量—反应关系。单细胞凝胶电泳技术可灵敏地反映口腔粘膜上皮细胞因烟草化学物造成的DNA损伤,在分子流行病学研究中具有一定的实用价值。

脂质体介导端粒酶基因转染人口腔黏膜角化细胞的实验研究

目的:将端粒酶基因转染入人正常口腔黏膜角化细胞,观察人端粒酶反转录酶(hTRT)的表达情况。方法:采用脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将含有hTRT基因的pEGFP-hTRT质粒转染人正常口腔黏膜角化细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光,并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达,并经G418筛选观察其稳定表达情况。结果:LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将pEGFP-hTRT转染入人正常口腔黏膜角化细胞,转染率为15.34%,转染细胞表达外源性hTRT。结论:脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白成功介导含有端粒酶基因的pEGFP-hTRT质粒转染人口腔黏膜角化细胞。

高压氧对体外培养的内皮细胞和口腔粘膜角朊细胞分泌VEGF的影响

目的 探讨高压氧治疗OSF的机理。方法 通过体外培养内皮细胞和口腔粘膜角朊细胞,经高压氧处理后收集培养上清,用ELISA方法测定培养上清中的VEGF水平。结果 经高压氧处理后,口腔粘膜角朊细胞分泌VEGF的量增加,内皮细胞分泌VEGF的水平无明显变化。结论 高压氧对OSF起治疗作用的主要因素之一可能是通过促进口腔粘膜角朊细胞分泌VEGF导致病人口腔粘膜下组织血管新生,似乎与内皮细胞分泌的VEGF无关。

正常口腔粘膜上皮细胞端粒酶活性的观察

目的 检测正常口腔粘膜上皮细胞端粒酶活性。方法 采用非放射性同位素端粒酶重复扩增酶标法 ,对 18例正常口腔粘膜上皮细胞端粒酶活性进行检测 ,同时用免疫组化方法检测正常口腔粘膜Ki 6 7的表达。结果 正常口腔粘膜端粒酶 2 7.78% (5 / 18)呈弱阳性 ,Ki 6 7的表达主要位于基底层和基底上层。结论 正常口腔粘膜上皮细胞存在弱阳性端粒酶活性 。