从人口腔细胞获取基因组DNA作基因多态性分析的可行性

背景与目的口腔洗液上皮细胞应用于检测基因多态性已有多篇文献报道,但口腔洗液中含有少量食物残渣是否给基因多态性检测带来干扰已备受关注。本研究比较口腔上皮细胞和血样品DNA中某些基因的多态性,同时以同样的方法检测食物中动植物组织的DNA,以排除食物残渣干扰实验结果的可能性,并探讨改良口腔洗液上皮细胞收集方法。方法收集62例人口腔洗液,每例收集40ml,加10ml异丙醇固定。其中30例进行细胞涂片检查上皮细胞含量,同时采集外周血5ml。另采集人们常食用的米饭、青菜、毛豆、苹果、猪肉、牛肉、鸡肉、鸭肉。所有样品分别经蛋白酶K消化,酚氯仿抽提,乙醇沉淀提取基因组DNA。结合PCR-RFLP技术进行口腔细胞和血细胞基因多态性分析比较。并用Alu片段测定人口腔洗液、外周血及上述食物DNA。结果62例口腔洗液DNA含量为(135.15±64.30)μg(22.36～330.70μg);其中30例经镜检含有人上皮细胞者有75%～95%,DNA含量为(143.44±61.64)μg(51.01～283.58μg);30例外周血中DNA含量为(91.19±38.01)μg(30.83～178.63μg)。琼脂糖凝胶电泳结果显示62例口腔上皮细胞和30例血样品均具有高分子量DNA,其中61例口腔细胞和30例血样品均能扩增茁-globin、Alu以及NAT2、GSTM1、GSTT1、CYP1A1和CYP2E1基因片段,但所有的食物DNA全部未能扩增。30例口腔洗液与相应血液的基因多态性结果一致。结论口腔洗液DNA大部分来源于人,即使含有少量食物残渣也不会给基因多态性分析带来干扰,其基因多态性检测结果与血样品DNA分析结果完全一致。

人口腔细胞P450、GST基因多态性研究

目的 探讨人口腔细胞CYP 1A1与 2E1,GSTM1和GSTT1等等位基因的多态性 ,为分子流行病学研究提供一个收集基因样品的简易、可靠的方法。方法 收集人口腔洗液 4 0ml,加 10ml异丙醇固定 ,经蛋白酶K消化 ,酚、氯仿抽提 ,酒精沉淀提取口腔细胞DNA ,结合PCR -RFLP技术分析 32例正常人CYP 1A1与 2E1、GSTM 1和GSTT1基因多态性。结果 32例口腔上皮细胞DNA含量为 2 2 .36～ 330 .70 μg ,均数12 7.38μg ,中位数 113.84 μg。琼脂糖凝胶电泳显示 :所有 32例样品均具有高分子量DNA。其中 31例口腔细胞DNA能扩增 β- globin基因片段。CYP 1A1(Msp1) 3′端侧翼T→C突变型纯合子 (mm)占 2 2 .6 % ,突变型等位基因占 4 8.4 % ,CYP 2E1(Rsa1) 5′端调控区C→T突变型纯合子占 (mm) 6 .4 % ,突变型等位基因占 2 9.0 % ,GSTM1缺失占 4 5 .2 % ,GSTT1缺失 4 8.4 %。结论 从人口腔洗液上皮细胞中可提取到足够量的高分子DNA用以进行多种基因多态性分析 ,是一种可应用于大规模人群进行分子流行病学研究的可靠方法。

不同抽吸模式下烟气冷凝物对人口腔细胞体外生长增殖的影响

为考察卷烟烟气暴露对人口腔细胞体外生长增殖的影响,以肯塔基参比卷烟3R4F为试验卷烟,人口腔表皮样癌细胞为实验模型,分别在ISO和加拿大深度抽吸(HCI)模式下制备烟气冷凝物并对细胞进行染毒暴露,评估了两种抽吸模式下烟气暴露对人口腔细胞代谢活性及核酸复制活性的影响,并结合主流烟气总粒相物(TPM)中主要有害成分的释放水平进行了分析。结果表明:①烟气冷凝物暴露对人口腔细胞体外增殖有抑制作用,对人口腔细胞代谢活性以及核酸的复制活性有一定的毒性作用。②HCI抽吸模式下3R4F卷烟单位TPM和单位烟碱中有害成分的释放量低于ISO模式,HCI抽吸模式下制备的烟气冷凝物含水率高于ISO模式,这两种因素是导致3R4F卷烟HCI模式下烟气冷凝物细胞毒性弱于ISO模式的主要原因。

口腔细胞采集卡DNA分型快速检验模式的建立

目的:研究并建立口腔细胞采集卡DNA分型快速检验模式,提高该类样本的DNA检验效率。方法:应用生物样本自动打孔仪小孔径多点取样,并使用DNATyperTM19试剂盒直接扩增检测口腔细胞采集卡样本。结果:获得了口腔细胞采集卡样本的完整DNA分型,并且初检成功率高达98%。结论:建立的生物样本自动打孔仪小孔径多点取样结合使用DNATyperTM19试剂盒的方法能够用于口腔细胞采集卡样本的批量化检验。

老年人口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓关系的临床研究

目的探讨老年患者口腔CK与OLP的相关性,为临床的疾病诊断和制定治疗方案提供依据。方法 32例病例样本来源于我院口腔科经病理学检验确诊的OLP患者颊部病变组织,为研究组;另取同期口腔拔牙患者健康口腔黏膜组织30例,为对照组;进行样本制备和垂直电泳处理,观察两组样本的CK阳性情况。结果研究组患者CK2、CK4和CK5阳性率明显低于对照组,而研究组CK10、CK13和CK14的阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。结论口腔细胞角蛋白与口腔扁平苔藓的发病有一定相关性,CK2、CK4、CK5的浅表达和CK10、CK13、CK14的过表达,影响上皮细胞组织的增殖、分裂、角化等,进而影响OLP的发病。

《口腔细胞实验操作技术》出版发行

书籍名称:《口腔细胞实验操作技术》作者:郭维华,李中瀚出版社:四川大学出版社出版时间:2021年3月内容简介:本书为口腔医学研究学者和口腔医学专业研究生量身打造的口腔细胞实验操作指南。本书涵盖了口腔细胞实验操作的整个流程,包括实验室细胞间建设和细胞培养涉及到的基本材料,以及细胞培养中的各种操作规范。引入细胞常规培养方法,阐述了细胞的复苏、细胞的传代、细胞接板、细胞冻存、细胞计数和细胞鉴定。介绍了细胞的基本组分及其鉴定方法,阐述了口腔细胞形态学现有的检测方法,进一步详述了现有的细胞生物学行为检测方法和分子生物学检测技术方法,特别是用于口腔细胞鉴定的方法。详细介绍了口腔各类细胞的培养方法以及与口腔组织密切相关的非牙源多种细胞。最后分别从口腔细胞共培养技术、口腔细胞注射技术和口腔细胞3D打印技术三方面,阐述了口腔细胞研究的前沿新技术。

《口腔细胞实验操作技术》出版发行

书籍名称:《口腔细胞实验操作技术》作者:郭维华,李中瀚出版社:四川大学出版社出版时间:2021年3月内容简介:本书是为口腔医学研究者量身打造的口腔细胞实验操作指南,涵盖了口腔细胞实验操作的整个流程,包括实验室细胞间建设和细胞培养涉及到的基本材料,以及细胞培养中的各种操作规范。

沉默膜联蛋白A2对口腔细胞癌KB细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨沉默膜联蛋白A2(AA2)对口腔细胞癌KB细胞迁移侵袭能力的影响。方法转染siRNA-AA2至KB细胞沉默AA2的表达,PCR实验验证沉默效果,Transwell实验检测细胞侵袭的能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果与对照组比较,si-AA2组细胞中AA2表达量显著降低(P<0.05);与对照组相比,si-AA2组中KB细胞穿膜细胞数量显著低于对照组(P<0.05);划痕细胞24 h和48 h后,si-AA2组的愈合面积相对于对照组显著减少(P<0.05)。结论干扰AA2基因表达可抑制口腔细胞癌KB细胞迁移侵袭能力。

氧化亚氮-氧气混合吸入口腔镇静效果及对老年口腔细胞DNA损伤和糖酵解的影响

目的探讨氧化亚氮-氧气混合吸入对老年口腔镇静效果及其对口腔黏膜上皮细胞DNA损伤和糖酵解影响。方法拟行口腔颌面诊治的老年患者792例,随机分为氧化亚氮组392例和单纯局麻组400例。术前和术中记录患者心率和血氧饱和度;使用视觉模拟疼痛评分(VAS)和Ramsay法评估患者的疼痛和镇静情况。术中取牙龈黏膜,体外常规培养口腔黏膜上皮细胞,Western印迹法和细胞免疫荧光检测氧化亚氮-氧气处理不同时间细胞中γH2AX蛋白表达情况;RT-PCR检测细胞糖酵解酶基因(GLUT1、GLUT3、HK2、PK-M2)表达情况。结果单纯局麻组心率动幅较大,112例心率波动超出正常范围;氧化亚氮组术前和术中心率均在正常范围内;术中氧化亚氮组血氧饱和度高于术前和单纯局麻组(P<0.05)。氧化亚氮组术中VAS低于单纯局麻组,镇静评分高于单纯局麻组(P<0.05)。氧化亚氮-氧气处理口腔黏膜上皮细胞0.5 h后γH2AX蛋白表达明显上调,1 h达到高峰,之后逐渐降低;细胞免疫荧光检测γH2AX蛋白表达情况显示,处理2 h时荧光强度高于处理前,说明氧化亚氮-氧气诱导γH2AX表达上调,诱导细胞DNA损伤。口腔黏膜上皮细胞糖酵解基因经氧化亚氮-氧气处理后表达均上调,其中GLUT1和GLUT3基因明显上调,2 h后达到高峰,之后下降。结论氧化亚氮-氧气混合吸入配合局麻对老年口腔颌面手术患者具有较好的镇静镇痛效果;但氧化亚氮会诱导口腔黏膜上皮细胞DNA损伤,促进糖酵解,易引发术后口腔疾病,应加以预防。

STOML2基因对口腔鳞状细胞癌细胞致瘤能力的影响及相关机制

目的:探索人口型蛋白样蛋白2(STOML2)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCCs)体外和体内致瘤能力的影响和相关机制。方法:Western blot检测STOML2蛋白在56例OSCC患者组织及癌旁组织中的表达。将OSCCCs SCC-15分为2组,实验组转染STOML2-siRNA质粒,对照组转染MOCK-siRNA质粒,荧光定量PCR检测各组细胞STOML2 mRNA含量,Western blot检测2组细胞的STOML2、CDK4、P16的表达,流式细胞仪检测细胞周期,CCK8检测细胞的增殖能力;利用裸鼠皮下种植瘤模型检测实验组和对照组细胞的体内致瘤能力。结果:OSCC患者癌和癌旁组织STOML2阳性率分别为92.86%(52/56)和8.93%(5/56)(P<0.001)。在siRNA处理后的实验组和对照组SCC-15细胞中STOML2 mRNA表达量分别为(0.43±0.09)和(1.23±0.19),STOML2蛋白表达量分别为(0.52±0.11)和(0.94±0.17)(P<0.05),CDK4表达量分别为(0.33±0.13)和(1.18±0.17)(P<0.05),P16表达量分别为(0.93±0.12)和(0.29±0.03);CCK8实验120 h实验组和对照组SCC-15细胞的吸光度分别为(1.11±0.24)和(2.19±0.28)(P<0.05),G2/M期细胞分别为35.72%±5.33%和18.65%±3.71%(P<0.05),裸鼠皮下移植瘤瘤块的体积分别为(1192.07±250.9)μm3和(2280.5±600.1)μm3,质量分别为(0.65±0.30)g和(1.62±0.40)g,但小鼠体重整体变化没有明显差异。结论:STOML2在OSCC中表达升高,STOML2通过调控P16相关通路的影响OSCCCs的致瘤能力。

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

DNMT1在口腔鳞状细胞癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨DNMT1在口腔鳞癌中的表达情况及其对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:通过GEPIA2数据库分析泛癌中DNMT1表达情况;采用RT-qPCR、Western blot检测人口腔上皮角化细胞HOK及口腔鳞状细胞癌细胞系HSC3、SAS中DNMT1的表达水平;采用shRNA慢病毒敲低HSC3、SAS细胞中DNMT1并用RT-qPCR、Western blot检测sh DNMT1转染效率;采用CCK-8、平板克隆实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞增殖的影响;采用细胞划痕、Transwell实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞迁移、侵袭的影响。结果:与HOK相比,HSC3、SAS细胞中DNMT1的mRNA及蛋白表达量均较高(P<0.05);敲低DNMT1后,HSC3、SAS细胞的增殖、迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。结论:DNMT1在口腔鳞状细胞癌细胞中高表达,且可促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

肿瘤间质比在口腔鳞状细胞癌患者预后评估中的价值分析

目的:分析肿瘤间质比(tumor-stroma ratio,TSR)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者预后中的价值。方法:收集2015年1月~2017年12月在蚌埠医学院第一附属医院接受根治性切除术的OSCC患者为研究对象,并收集临床及病理资料。TSR以50%为界限,将其分为高间质比组(≥50%)及低间质比组(<50%)。分析TSR和OSCC患者的无病生存期及总生存期之间的关系。结果:术后随访及临床资料完整的98例患者中,高间质比患者42例,低间质比患者56例。高间质比组OSCC患者的5年总生存率以及5年无病生存率分别为31.0%(13/42)、26.2%(11/42);低间质比组OSCC患者的5年总生存率以及5年无病生存率分别为73.2%(41/56)、67.9%(38/56)。肿瘤发病部位与患者的5年总生存率(χ^(2)=1.327,P=0.932)及5年无病生存率(χ^(2)=3.113,P=0.683)无关;肿瘤临床分期、TSR与患者的5年总生存率5年无病生存率显著相关(P<0.001)。单因素COX分析结果显示,年龄、肿瘤T分期、淋巴结转移、TSR与OSCC患者总体生存率以及无病生存率有关。而通过多因素COX研究显示,肿瘤T分期、淋巴结转移以及TSR是影响OSCC患者总生存率与无病生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论:TSR可作为OSCC患者术后预后的影响因素,可为OSCC患者术后辅助治疗方法的选择提供参考依据。

EP300对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨EP300在口腔鳞癌中的表达水平以及对口腔鳞癌细胞增殖、迁移的影响。方法 通过在线数据库收集并分析EP300基因在泛癌组织及正常组织中的表达差异。采用qRT-PCR和Western blot分别检测EP300在正常口腔黏膜上皮细胞株NOK和两种不同OSCC细胞株HSC3、UM1中的基因和蛋白表达水平;通过质粒转染沉默HSC3和UM1细胞株中EP300基因,平板克隆和CCK-8检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果 生信分析发现EP300在头颈部鳞癌HNSCC中的表达较癌旁组织显著上调;与NOK组比较,HSC3和UM1中EP300基因和蛋白表达水平显著增高(P<0.05),且HSC3和UM1两种细胞系的EP300内源性表达相对更高。CCK-8增殖实验和克隆形成实验检测发现,沉默EP300后HSC3和UM1的增殖能力明显降低(P<0.05);细胞划痕实验检测发现沉默EP300后HSC3和UM1的迁移能力明显降低(P<0.05)。结论 EP300在口腔鳞癌细胞株HSC3和UM1中高表达,EP300低表达能够抑制口腔鳞癌细胞的增殖和迁移。

口腔鳞状细胞癌治疗研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是最常见的一种头颈部肿瘤,其发病隐匿,易发生转移,5 a生存期短,病死率高。目前,OSCC治疗的方法多种多样,但均不可避免地导致与非特异性细胞死亡相关的问题;因此,迫切需要为OSCC寻找其他新的治疗方案。本文就OSCC治疗的研究进展进行综述,以期为临床OSCC的治疗提供新的选择。

miR-362-3p调控垂体肿瘤转化基因1抑制口腔鳞状细胞癌侵袭及增殖的研究

目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PTTG1在Cal-27、HN-30以及HOK细胞系中的表达。划痕愈合实验、Transwell侵袭实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测PTTG1对Cal-27、HN-30细胞迁移、侵袭、增殖的影响。生物信息学在线数据库预测PTTG1的上游miRNA,双荧光素酶实验检测结合情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该miRNA在组织中的表达。结果ENCORI数据库结果显示PTTG1在OSCC组织中表达上调;Western blot实验显示Cal-27、HN-30细胞中PTTG1表达量较HOK细胞中高。转染Si-PTTG1质粒的Cal-27、HN-30细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞增殖能力均较对照组降低(P<0.05)。通过网站预测出PTTG1的上游miRNA为miR-362-3p,双荧光素酶实验检测出PTTG1与miR-362-3p存在结合位点;qRT-PCR检测结果显示miR-362-3p在OSCC肿瘤组织中相对于正常组织表达下调(P<0.05);并且敲低miR-362-3p的表达后能够促进敲低PTTG1后的Cal-27、HN-30侵袭和增殖。结论miR-362-3p可通过靶向PTTG1抑制Cal-27、HN-30细胞侵袭、增殖。

牙龈素提取物对口腔鳞癌细胞HN6生物学特性的影响

目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)牙龈素提取物进行培养。根据牙龈素提取物的蛋白浓度不同分为对照组(control组),及牙龈素提取物蛋白浓度3.125μg/mL组、6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组和100μg/mL组,培养24、48 h后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测牙龈素提取物对HN6细胞增殖活性的影响。后续其他实验,分为control组、25μg/mL组和50μg/mL组进行。通过流式细胞术检测牙龈素提取物对细胞周期的影响,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和Western blotting检测细胞E-cadherin和N-cadherin蛋白和基因的表达。结果·在牙龈素提取物刺激HN6细胞24 h时,相比较control组,牙龈素提取物蛋白浓度25μg/mL组(P=0.025),50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.049)的HN6细胞增殖活性显著增加;当刺激48 h时,6.25μg/mL组(P=0.024)、12.5μg/mL组(P=0.006)、25μg/mL组(P=0.000)、50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.000)均较control组HN6细胞增殖活性有显著增加。细胞周期检测结果显示,与control组相比,经牙龈素提取物刺激24 h,HN6细胞G1期比例下降,S+G2期比例显著性上升(25μg/mL组:P=0.024;50μg/mL组:P=0.001)。细胞迁移实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,划痕愈合的百分比显著增加(P=0.001)。细胞Transwell侵袭实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,细胞穿过小室底部的数量显著性增加。RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度增加,HN6细胞中N-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性增加,E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性减少。结论·牙龈素提取物对OSCC细胞HN6的增殖、迁移和侵袭有促进作用。