产黑普氏菌刺激原代人口腔角质细胞的时间序列基因表达谱研究

目的基于时间序列分析,研究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,Pm)刺激原代人口腔角质形成细胞(primary human oral keratinocytes,pHOKs)后基因表达的时间趋势,以探究Pm与pHOKs相互作用的潜在机制。方法利用生物信息学方法分析pHOKs分别与Pm共培养4、24 h后的高通量测序结果,使用Mfuzz聚类算法将具有相似时间表达模式的基因划分聚类,并进行GO、KEGG以及STRING网络分析,进一步利用Cytoscape软件取交集得到枢纽基因(Hub基因)。采用实时荧光定量PCR检测Hub基因的表达。结果Pm刺激pHOKs 4、24 h分别有1456个和1386个差异表达基因。通过Mfuzz将其划分为3个聚类,其中簇1基因随时间延长其表达呈现下降的趋势,主要参与上皮细胞分化和上皮细胞向间充质细胞转化等生物学过程;簇2基因随时间延长其表达呈现上升的趋势,主要参与细菌感染、视黄醇代谢等过程;簇3基因表达在刺激前期上调、后期下调,主要参与细胞因子相关信号通路等过程。在PPI网络中筛选出簇1 Hub基因为VEGFA、GDNF;簇2中的Hub基因为PTGS2、ICAM1等;簇3中的Hub基因为IL-6、CCL2等。RT-qPCR检测结果显示,VEGFA、PTGS2、IFIT1、IRF1与测序数据中随着时间延长基因的表达趋势一致。结论本研究对Pm刺激pHOKs过程中相关生物学分子的动态模式进行了深度挖掘,发现与视黄醇代谢相关的基因以及负调控EMT的基因在OLP中异常表达,Pm入侵上皮细胞后可能通过一些适应性机制逃避免疫监视,该发现有助于进一步探究Pm在口腔扁平苔藓中的致病机理。

D-半乳糖诱导正常人口腔黏膜角质形成细胞衰老的研究

目的:明确D-半乳糖对正常人口腔黏膜细胞(normal human oral keratinocytes,NHOKs)促衰老作用,并探索潜在机制。方法:体外分离培养NHOKs,角形蛋白和波形蛋白免疫细胞化学染色法鉴定NHOKs。分别以10、20、40、80g/L D-半乳糖处理诱导细胞作为实验组,正常培养液组作为对照组。通过CCK-8法检测细胞增殖活力,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associated-β-galactosidase,SA-β-gal)分析细胞衰老情况,Western blot检测衰老相关蛋白p53和p21表达水平。活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞内氧化应激水平,Western blot检测氧化应激相关蛋白sirt1的表达。结果:D-半乳糖抑制NHOK细胞增殖,具有时间和浓度依赖性。D-半乳糖增加SA-β-gal染色阳性率,上调衰老相关基因p53和p21,显著升高细胞内ROS,降低氧化应激相关蛋白sirt1表达。结论:D-半乳糖可诱导NHOKs发生衰老,该过程可能与细胞氧化应激有关。

牙科材料导致的苔藓样黏膜反应机制的研究进展

目的为了解目前牙科材料导致的苔藓样黏膜反应研究状况,作者回顾了近年来的研究文献。方法从粘膜的病理解剖的角度整理他人的研究成果,对口腔角质形成细胞、淋巴细胞浸润带以及二者之间的相互作用进行了归纳。结果牙科材料导致的苔藓样黏膜反应的主要枢纽是口腔角质形成细胞,它既是多种T淋巴细胞趋化因子的生产细胞,也是重要的外源性抗原提呈细胞。结论病损局部的口腔角质形成细胞成为了T淋巴细胞攻击的靶细胞。