尖吻蝮蛇毒组分Ⅰ对人口腔鳞状细胞癌HN4细胞凋亡及自噬的影响

目的探索尖吻蝮蛇毒组分I(AAVC-I)在人口腔鳞状细胞癌中促进细胞凋亡的作用及对自噬的影响。方法将所培养的人口腔鳞癌HN4细胞随机分为4组:对照组,AAVC-I低浓度组(2.5μg/mL),AAVC-I中浓度组(5μg/mL),AAVC-I高浓度组(10μg/mL)。将尖吻蝮蛇毒组分I冻干粉溶于培养基中,在肿瘤细胞的对数生长期加入不同浓度AAVC-I,对照组给予相应剂量的溶剂,24 h后取标本,MTT检测肿瘤细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot及免疫组织化学染色法检测Caspase-3蛋白的表达情况,采用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,免疫荧光法检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达。结果与对照组相比,给予AAVC-I低、中、高不同浓度干预后,肿瘤细胞的增殖受抑制(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.01),肿瘤细胞Caspase-3表达量增加(P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.05),免疫荧光显示LC3的表达量增加(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论AAVC-I可以抑制口腔鳞状细胞癌HN4细胞的增殖,可能机制为线粒体膜电位改变及Caspase-3蛋白的表达增加有关,同时AAVC-I增加自噬活性。

circ_0086414通过miR498-/PCK1轴对口腔鳞状细胞癌生物学行为的影响

目的研究circ_0086414通过miR-498/PCK1轴对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinomas,OSCC)生物学行为的影响。方法收集手术切除的OSCC组织及配对的癌旁组织27对,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测组织中circ_0086414和PCK1的表达。将SJG-1细胞分为pcDNA组、pcDNA circ_0086414组、miR-498 NC组、miR-498 mimic组、OE-NC组、OE-PCK1组、miR-498 NC+pcDNA组、miR-498 NC+pcDNA circ_0086414组、miR-498 mimic+pcDNA组、miR-498 mimic+pcDNA circ_0086414组,细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK8)法检测SJG-1细胞增殖,流式细胞术检测SJG-1细胞凋亡,Transwell实验检测SJG-1细胞侵袭;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测上皮间质转化情况,双荧光素酶报告基因检测circ_0086414和miR-498及miR-498和PCK1的关系。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中circ_0086414相对表达明显降低(P<0.001);与人正常口腔角质细胞HOK比较,人OSCC细胞系HEK293T、SJG-1、SCC-15、HSC-2中circ_0086414相对表达显著降低(P<0.001);与pcDNA组比较,pcDNAcirc_0086414组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显减少,N-cadherin表达水平显著减少,E-cadherin表达水平明显升高(均P<0.001);与miR-498 NC组比较,miR-498mimic组SJG-1细胞增殖能力明显升高,凋亡率显著降低,侵袭能力明显增加,N-cadherin表达水平显著增加,E-cadherin表达水平明显减少(均P<0.001);与miR-498 NC+pcDNA组比较,miR-498 NC+pcDNAcirc_0086414组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显降低,N-cadherin表达水平明显降低,E-cadherin表达水平明显升高,miR-498 mimic+pcDNA组SJG-1细胞增殖能力明显升高,凋亡率明显降低,细胞侵袭能力明显升高,N-cadherin表达水平明显升高,E-cadherin表达水平明显降低(均P<0.001),与miR-498 mimic+pcDNA组比较,miR-498 mimic+pcDNAcirc_0086414组的SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,侵袭能力明显降低,N-cadherin表达水平明显降低,E-cadherin的表达水平明显升高(均P<0.001);与OE-NC组比较,OE-PCK1组SJG-1细胞增殖能力明显降低,凋亡率明显升高,细胞侵袭能力明显减少,N-cadherin表达水平显著减少,E-cadherin表达水平明显升高,PCK1的相对表达量明显升高(均P<0.001)。结论circ_0086414在OSCC细胞和组织中的表达下调,过表达circ_0086414抑制OSCC细胞的恶性行为。通过调控miR-498/PCK1轴刺激细胞凋亡,为探索OSCC诊断和治疗的生物标志物提供有意义的实验依据,为OSCC的治疗提供新的诊疗思路。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

MiR-28-5p靶向DOK4对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA(miR)-28-5p通过靶向酪氨酸激酶下游蛋白4(DOK4)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的调控作用。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)口腔癌数据库,分析miR-28-5p、DOK4与口腔鳞状细胞癌临床表型的关系;转染miR-28-5p模拟物(mimics)、miR-28-5p抑制剂(inhibitor)及对照物(NC)、pcDNA3.1-DOK4及空载体(Vector)、DOK4干扰序列(siDOK4)。CCK-8法和克隆集落形成实验检测口腔鳞状细胞癌的细胞增殖能力;检测各组细胞的抗氧化能力和细胞活性氧(ROS)含量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-28-5p与DOK4的靶向关系;观察DOK4过表达对细胞增殖和口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响。结果生物信息学分析显示,相较于癌旁口腔组织,miR-28-5p在口腔鳞状细胞癌组织中表达上调,DOK4 mRNA下调(P<0.05);临床分期Ⅳ期、M 1期、G 3~G 4分级患者miR-28-5p水平高于临床分期Ⅰ~Ⅲ期、M 0期、G 1~G 2分级者(P<0.05);临床分期Ⅳ期、N 1期、G_(3)~G_(4)分级患者DOK4 mRNA水平低于临床分期Ⅰ~Ⅲ期、N 0期、G_(1)~G_(2)分级者(P<0.05);DOK4高表达组无进展生存期和总生存期均高于DOK4低表达组(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-28-5p inhibitor组miR-28-5p水平、细胞活性和集落形成数降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-28-5p mimics组DOK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与Vector组比较,DOK4过表达组细胞和移植瘤组织中DOK4 mRNA和蛋白表达升高,细胞活性、集落形成数、肿瘤体积及重量降低(P<0.05);与miR-28-5p inhibitor组比较,miR-28-5p inhibitor+siDOK4组的DOK4 mRNA和蛋白表达水平降低,细胞增殖活性、集落形成数、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH/NADP+)、谷胱甘肽/氧化性谷胱甘肽(GSH/GSSG)升高,ROS含量降低(P<0.05)。结论miR-28-5p在口腔鳞状细胞癌中表达上调,通过靶向抑制DOK4表达,降低ROS水平,促进细胞增殖。

RAD54L 在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨DNA修复重组RAD54样蛋白(RAD54-like protein,RAD54L)在口腔鳞状细胞癌(oral squa-mous cell carcinoma,OSCC)中的表达及功能作用。方法利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TC-GA)数据库中OSCC相关数据,通过Mann-Whitney U检验分析RAD54L在OSCC与对照样本中的表达差异,并采用受试者工作特征曲线评估RAD54L在OSCC诊断中的潜在价值。通过卡方检验分析RAD54L mRNA表达水平与OSCC患者临床病理数据之间的关系。将OSCC样本根据RAD54L mRNA表达中位值分为高低表达两组后,采用Cox回归分析比较两组的预后差异;采用DESeq2软件包筛选组间的差异表达基因,并利用cluster-Profiler包进行KEGG通路富集分析。采用Spearman相关性分析展示RAD54L与同源重组修复途径中基因表达的相关性。在明确RAD54L的生物信息学意义后,在人OSCC细胞株HSC-3中进行RAD54L基因敲低实验,并通过qRT-PCR验证敲低效率。转染后,通过CCK-8、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)染色、细胞划痕、细胞凋亡及细胞周期实验,评估HSC-3细胞增殖、迁移、凋亡及周期的变化。结果生物信息学分析结果显示,RAD54L mRNA在OSCC中的表达高于正常对照组(P<0.001),且对预后不良的预测具有较高价值(AUC=0.927)。RAD54L高表达组男性患者比例增加(P=0.032),具有更高的T分期(P=0.040)、临床分期(P=0.027)及病理学分级(P=0.013)。以RAD54L mRNA表达中位值将OSCC样本分为高低表达两组后,RAD54L高表达组的预后较低表达组差(P=0.049);RAD54L高低表达两组间的差异表达基因主要富集于神经活性配体与受体的相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、钙信号通路、细胞周期、胃癌、细胞外基质受体相互作用、化学致癌-DNA加合物、DNA复制、同源重组和错配修复途径(P<0.05),在同源重组修复途径中RAD54L的表达与BRCA1、BLM、EME1、XRCC2、POLD1、TOPBP1、RAD51、BRIP1、RAD54B、BRCA2和SYCP3的表达呈正相关(P<0.05),其中与BRCA1、BLM和EME1的表达呈强正相关(R>0.8,P<0.05)。体外实验结果表明,RAD54L在HSC-3细胞中的表达被敲低至约25%(P<0.001),与对照组相比,RAD54L敲低组的增殖率降低(P<0.05),EdU阳性细胞比例下降(P<0.001),划痕闭合比例降低(P<0.001),G1期细胞比例增加(P<0.001),S期细胞比例降低(P<0.001),细胞凋亡比例增加(P<0.001)。结论RAD54L在OSCC中高表达且与不良预后相关。下调RAD54L表达可抑制HSC-3细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,并阻碍细胞周期进程。

口腔鳞状细胞癌组织TRIM14和HOXB7蛋白表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的 探讨三结构域蛋白14(TRIM14)、同源异型盒基因B7(HOXB7)蛋白在口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者癌组织中的表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。方法 收集2016年1月至2018年1月行手术治疗的OSCC患者148例的癌组织与癌旁正常组织,免疫组化法分析组织中TRIM14、HOXB7表达情况;Kaplan-Meier生存曲线分析OSCC患者癌组织TRIM14、HOXB7表达水平与生存率之间的关系;COX回归分析OSCC患者预后不良的影响因素。结果 OSCC癌组织TRIM14、HOXB7高表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。OSCC癌组织TRIM14、HOXB7表达与肿瘤T分期、M分期、淋巴结转移、周围组织浸润、分化程度相关(P<0.05)。OSCC患者5年生存率为49.32%(73/148),Kaplan-Meier生存曲线表明TRIM14、HOXB7高表达患者生存率低于TRIM14、HOXB7低表达患者(χ^(2)=14.480、24.841,P<0.001)。多因素COX分析结果显示,T3-T4分期、M1分期、淋巴结转移、周围组织浸润、癌组织TRIM14、HOXB7高表达均是OSCC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论 OSCC患者癌组织TRIM14与HOXB7蛋白表达水平均上调,其表达与患者临床病理特征和5年生存预后明显相关。

鞘氨醇-1-磷酸受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学功能

目的 :探讨鞘氨醇-1-磷酸受体4(sphingosine-1-phosphate receptor 4,S1PR4)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及生物学功能。方法 :通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫印迹实验(Western blot)和免疫组织化学染色,分析OSCC组织样本及细胞系(WSU-HN4、WSU-HN6、CAL27、WSU-HN30)中S1PR4的表达。通过S1PR4拮抗剂(CYM50358)抑制S1PR4活性,利用CCK-8以及克隆形成实验检测CYM50358对OSCC细胞增殖的影响。通过流式细胞术分析CYM500358对OSCC细胞凋亡的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果:OSCC中的S1PR4转录及表达显著上调,CYM50358处理组OSCC细胞增殖活性显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞克隆形成能力显著低于空白对照组(P<0.05),CYM50358处理组OSCC细胞凋亡比例显著高于空白对照组(P<0.05)。结论:S1PR4在OSCC中表达上调,S1PR4拮抗剂可抑制OSCC细胞生长并促进细胞凋亡,或为OSCC的治疗提供新的潜在靶点。

hsa_circ_0030042对口腔鳞状细胞癌作用的研究

目的:探究hsa_circ_0030042在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR检测OSCC细胞中hsa_circ_0030042的表达,在OSCC细胞中转染小干扰RNA(siRNA)以敲低hsa_circ_0030042,采用CCK-8、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测hsa_circ_0030042对OSCC细胞的增殖、侵袭、迁移作用影响。结果:hsa_circ_0030042在CAL27和HSC3细胞中的表达显著升高(P<0.001);与对照组相比,敲低hsa_circ_0030042后,CAL27、HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。结论:hsa_circ_0030042在OSCC细胞中的表达显著增高,可促进OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移。

异鼠李素介导miR-454-3p/PIK3R1轴对口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性的影响

目的:探讨异鼠李素(ISO)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞生物学特性的影响,以及在该过程中对miR-454-3p/PIK3R1轴的调控机制。方法:MTT法检测ISO对TSCC1细胞的毒性,随后将TSCC1细胞分为OSCC组、ISO组、ISO+miR-NC组、ISO+miR-454-3p mimic组。MTT法检测各组细胞的存活率;克隆形成实验检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;RT-qPCR法检测各组细胞中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平;Western blotting法检测各组细胞中PIK3R1蛋白的表达;双荧光素酶实验验证miR-454-3p与PIK3R1的靶向关系;建立裸鼠移植瘤模型,将小鼠分为模型组、ISO组、ISO组+agomir-NC组,ISO组+miR-454-3p agomir组,每组5只,干预15 d后检测各组小鼠的肿瘤质量和体积;RT-qPCR法检测肿瘤组织中miR-454-3p和PIK3R1的mRNA水平。结果:体外实验发现,与OSCC组比较,ISO组和ISO+miR-NC组细胞存活率、迁移和侵袭细胞数量、miR-454-3p表达水平均降低(P<0.05),细胞凋亡率、PIK3R1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);miR-454-3p mimic回补实验逆转了ISO对OSCC的抑癌作用及PIK3R1的表达水平(P<0.05),同时双荧光素酶报告基因实验验证了miR-454-3p与PIK3R1之间存在靶向关系;体内实验发现,与模型组比较,ISO组小鼠移植瘤的质量和体积均减小(P<0.05),miR-454-3p表达水平、PIK3R1 mRNA表达水平以及miR-454-3p agomir的回补实验结果均与体外实验保持一致。结论:ISO能够通过调节miR-454-3p/PIK3R1轴抑制OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-485-5p靶向RAPTOR影响口腔鳞状细胞癌迁移、侵袭和增殖

目的:探讨mTOR调节相关蛋白(regulatory-associated protein of mTOR,RAPTOR)对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法:利用TCGA生物信息数据库查询在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)组织与癌旁组织中差异表达的mRNA。Western blot检测RAPTOR在人口腔上皮细胞HOEC和OSCC细胞系中的表达。利用伤口愈合实验、Transwell实验、EdU实验检测各组细胞迁移、侵袭及增殖能力。生物信息学网站预测与RAPTOR靶向结合的微小RNA(microRNA,miR)。功能学实验验证miR-485-5p是否可以靶向RAPTOR影响OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖。结果:RAPTOR在HNSCC组织中较癌旁组织表达增高。伤口愈合、Transwell和EdU实验结果示,RAPTOR有促进OSCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力。miR-485-5p能与RAPTOR靶向结合,且miR-485-5p上调能逆转RAPTOR促进CAL27细胞迁移、侵袭和增殖能力。结论:miR-485-5p通过靶向RAPTOR抑制OSCC细胞迁移、侵袭和增殖能力。

柚皮素对口腔鳞状细胞癌细胞的干预作用研究

目的:探究柚皮素(NRG)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响。方法:采用浓度(μmol/L)为0、5、10、15、20、25、30的NRG处理OSCC CAL-27细胞,CCK-8法检测细胞活力;将CAL-27细胞分为低、中、高剂量NRG组(NRG-L、NRG-M组、NRG-H组)、Compound C(AMPK抑制剂)组、NRG-H+Compound C组、对照组(NC组,正常培养),CCK-8与EdU染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、沉默信息调节蛋白1(SIRT1)、乙酰化核因子κB p65(Ac-NF-κB p65)蛋白表达。结果:选取5、10、20μmol/L NRG分别作为后续处理CAL-27细胞的低、中、高剂量;与NC组比较,NRG-L组、NRG-M组、NRG-H组EdU阳性率、划痕愈合率、A 450值、侵袭细胞数及MMP-2、PCNA、MMP-9、Ac-NF-κB p65蛋白下调,细胞凋亡率及p-AMPK、Caspase-3、SIRT1蛋白上调(P<0.05);与NC组相比,Compound C组EdU阳性率、划痕愈合率、A 450值、侵袭细胞数及MMP-2、PCNA、MMP-9、Ac-NF-κB p65蛋白升高,细胞凋亡率及p-AMPK、Caspase-3、SIRT1蛋白表达下调(P<0.05);Compound C逆转了高剂量NRG对CAL-27细胞增殖、迁移、凋亡及侵袭的影响。结论:NRG抑制CAL-27细胞增殖、迁移与侵袭,并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活AMPK进而抑制NF-κB通路有关。

牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

沉默circ-NDRG1对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的作用机制研究

目的:探究circ-NDRG1在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其通过靶向miR-1271对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞恶性生物学行为的影响。方法:利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1的表达水平,分析circ-NDRG1表达与患者预后生存期的相关性。实时荧光定量PCR(qPCR)检测circ-NDRG1在永生化口腔角质细胞(HOK)和口腔鳞状细胞癌HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113细胞中的表达水平。利用Lipofectamine 2000将NC inhibitor、circ-NDRG1 inhibitor分别转染HSC-3细胞,分别为Anti-NC组和Anti-circ-NDRG1组。MTT法和Transwell小室实验分别检测各组HSC-3细胞增殖和侵袭能力。Western blot检测各组HSC-3细胞增殖蛋白(CDK3、Cyclin C)和上皮间质转化(EMT)蛋白(ZLF8、Notch、SIX1)表达。利用TCGA数据库分析口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1与miR-1271表达的关系。双荧光素酶报告实验验证circ-NDRG1和miR-1271的靶向关系。qPCR检测各组HSC-3细胞中miR-1271的表达。结果:TCGA数据库显示口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1的表达高于癌旁组织(P<0.01)。口腔鳞状细胞癌患者预后生存期与circ-NDRG1表达水平呈负相关(P<0.01)。与HOK细胞相比,HSC-3、SCC-25、CAL-27、Tca-8113细胞中circ-NDRG1呈高表达(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够抑制HSC-3细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够下调HSC-3细胞中CDK3、Cyclin C、ZLF8、Notch、SIX1蛋白的表达(P<0.01)。口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1表达水平与miR-1271表达水平呈负相关(P<0.01)。circ-NDRG1能够靶向结合miR-1271(P<0.01)。与Anti-NC组相比,低表达circ-NDRG1能够上调HSC-3细胞中miR-1271的表达(P<0.01)。结论:口腔鳞状细胞癌组织中circ-NDRG1呈高表达,沉默circ-NDRG1通过靶向调控miR-1271表达抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭和EMT进程。

甲基化转移酶SETDB1对口腔鳞状癌细胞迁移侵袭能力的影响及其机制

目的观察甲基化转移酶SETDB1对口腔鳞状癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其相关机制。方法以不同浓度(0、0.2、0.4、0.6、0.8μmol/L)甲基化转移酶抑制剂GSK3685032作用于口腔鳞状癌细胞CAL-27,MTT法测算细胞增殖活力,筛选得到GSK3685032最佳作用浓度为0.6μmol/L。将CAL-27细胞分为对照组与实验组,对照组加入有机溶剂DMSO进行处理,实验组加入0.6μmol/L的GSK3685032处理。采用RT-qPCR法检测细胞SETDB1 mRNA,Western blotting法检测细胞SETDB1蛋白,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭能力,焦磷酸测序检测细胞内SOX7甲基化水平。结果实验组细胞SETDB1 mRNA及蛋白表达均低于对照组(P均<0.05);实验组细胞迁移距离小于对照组,穿膜细胞数少于对照组(P均<0.05);实验组细胞内SOX7甲基化率小于对照组(P<0.05)。结论甲基化转移酶SETDB1可抑制口腔鳞状癌细胞的迁移、侵袭能力,其机制可能与下调细胞内SOX7甲基化水平有关。

STOML2基因对口腔鳞状细胞癌细胞致瘤能力的影响及相关机制

目的:探索人口型蛋白样蛋白2(STOML2)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其对口腔鳞状细胞癌细胞(OSCCCs)体外和体内致瘤能力的影响和相关机制。方法:Western blot检测STOML2蛋白在56例OSCC患者组织及癌旁组织中的表达。将OSCCCs SCC-15分为2组,实验组转染STOML2-siRNA质粒,对照组转染MOCK-siRNA质粒,荧光定量PCR检测各组细胞STOML2 mRNA含量,Western blot检测2组细胞的STOML2、CDK4、P16的表达,流式细胞仪检测细胞周期,CCK8检测细胞的增殖能力;利用裸鼠皮下种植瘤模型检测实验组和对照组细胞的体内致瘤能力。结果:OSCC患者癌和癌旁组织STOML2阳性率分别为92.86%(52/56)和8.93%(5/56)(P<0.001)。在siRNA处理后的实验组和对照组SCC-15细胞中STOML2 mRNA表达量分别为(0.43±0.09)和(1.23±0.19),STOML2蛋白表达量分别为(0.52±0.11)和(0.94±0.17)(P<0.05),CDK4表达量分别为(0.33±0.13)和(1.18±0.17)(P<0.05),P16表达量分别为(0.93±0.12)和(0.29±0.03);CCK8实验120 h实验组和对照组SCC-15细胞的吸光度分别为(1.11±0.24)和(2.19±0.28)(P<0.05),G2/M期细胞分别为35.72%±5.33%和18.65%±3.71%(P<0.05),裸鼠皮下移植瘤瘤块的体积分别为(1192.07±250.9)μm3和(2280.5±600.1)μm3,质量分别为(0.65±0.30)g和(1.62±0.40)g,但小鼠体重整体变化没有明显差异。结论:STOML2在OSCC中表达升高,STOML2通过调控P16相关通路的影响OSCCCs的致瘤能力。

口腔鳞状细胞癌患者血清NGAL、YKL-40水平及其诊断、预后价值

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)、甲壳质酶蛋白40(chitinase protein 40,YKL-40)的水平在诊断和预后中的价值。方法:选取本院2017年3月—2020年9月间收治的114例OSCC患者作为研究对象(OSCC组),另选取同期118例本院良性肿瘤病变者作为对照组,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测2组受试者血清NGAL、YKL-40的水平;通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清NGAL、YKL-40水平在OSCC中的诊断价值;并收集OSCC患者出院后3年内的预后情况,使用Kaplan-Meier法分析OSCC患者血清NGAL、YKL-40水平与其3年预后的关系;采用Cox比例风险回归模型分析影响OSCC患者出院3年预后的危险因素。结果:OSCC组血清NGAL、YKL-40水平显著高于对照组(P<0.001);血清NGAL、YKL-40及二者联合诊断OSCC的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.716、0.744、0.791,其中联合诊断的AUC优于单独检测(P=0.008、0.047);不同年龄、性别、吸烟史、发病部位的OSCC患者血清NGAL、YKL-40表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥3 cm、有淋巴结转移患者血清NGAL、YKL-40表达水平显著高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无淋巴结转移患者(P<0.001);NGAL低表达患者的3年生存率高于NGAL高表达患者,YKL-40低表达患者3年生存率高于YKL-40高表达患者(P<0.05);NGAL、YKL-40是影响OSCC患者预后的危险因素(P<0.001)。结论:OSCC患者血清NGAL、YKL-40水平均升高,二者对OSCC有一定的诊断价值,并且与患者预后有关。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

LncRNA CASC9靶向调节miR-195-5p/VEGFA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因(LncRNA CASC)9对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人OSCC组织与细胞中LncRNA CASC9表达,筛选最佳细胞系。体外培养OSCC细胞SCC15,将细胞分为空白对照(Control)组、si-CASC9组、si-NC组、miR-195-5p mimic组、miR-NC组、si-CASC9+NC inhibitor组、si-CASC9+miR-195-5p inhibitor组、miR-195-5p mimics+pcDNA组、miR-195-5p mimics+VEGFA组,qRT-PCR检测LncRNA CASC9、miR-195-5p表达,CCK-8法检测SCC15细胞增殖,流式细胞仪检测SCC15细胞凋亡,Transwell实验检测SCC15细胞迁移;Western印迹法检测SCC15细胞中血管内皮生长因子(VEGF)A、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195-5p与LncRNA CASC9、VEGFA的靶向关系。结果LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中表达较癌旁组织显著上调(P<0.05);抑制LncRNA CASC9表达或过表达miR-195-5p可显著抑制SCC15细胞增殖及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,LncRNA CASC9、VEGFA与miR-195-5p存在靶向关系(P<0.05);抑制miR-195-5p表达可显著逆转抑制LncRNA CASC9表达对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05);上调VEGFA表达可显著逆转过表达miR-195-5p对SCC15细胞增殖、凋亡及迁移的作用(P<0.05)。结论LncRNA CASC9在OSCC组织与细胞中上调表达,抑制LncRNA CASC9表达可通过调节miR-195-5p/VEGFA轴抑制OSCC细胞增殖与迁移,促进细胞凋亡。

双氢青蒿素通过诱导自噬抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的探讨双氢青蒿素(DHA)对人口腔鳞癌细胞增殖能力的影响及其作用机制。方法用不同浓度的双氢青蒿素干预CAL27细胞,采用CCK-8法检测其细胞增殖活力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力;基于网络药理学和生物信息学筛选DHA抑制口腔癌生物学行为的潜在靶点;不同浓度的DHA干预CAL27细胞后,Western blot检测增殖相关蛋白PCNA和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的表达;联合自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤和自噬诱导剂雷帕霉素与双氢青蒿素共处理细胞后,检测细胞增殖活力、克隆形成能力和增殖及自噬相关蛋白的表达。结果双氢青蒿素显著降低了CAL27细胞的增殖活力及克隆形成能力,且呈现浓度依赖性,PCNA的表达量也显著下降。网络药理学结合生物信息学发现DHA抑制口腔癌的靶点涉及自噬相关通路。DHA干预可升高细胞内自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的表达,DHA联合自噬阻断剂共处理CAL27后,细胞的增殖活力及克隆形成能力降低,PCNA的表达升高、Beclin-1、LC3的表达降低。结论双氢青蒿素可在体外抑制口腔鳞癌细胞的增殖能力,其作用机制可能与诱导细胞自噬相关。

口腔鳞状细胞癌治疗研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是最常见的一种头颈部肿瘤,其发病隐匿,易发生转移,5 a生存期短,病死率高。目前,OSCC治疗的方法多种多样,但均不可避免地导致与非特异性细胞死亡相关的问题;因此,迫切需要为OSCC寻找其他新的治疗方案。本文就OSCC治疗的研究进展进行综述,以期为临床OSCC的治疗提供新的选择。