梓醇调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探究梓醇调节Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1/核因子E2相关因子2/血红素氧合酶-1(Keap1/Nrf2/HO-1)信号通路对口腔鳞癌细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养口腔鳞癌细胞Tac8113;CCK-8法筛选梓醇最佳作用水平;将Tac8113细胞分为对照组、梓醇组(24μg/mL)、sh-NC组(转染sh-NC慢病毒质粒)、sh-Keap1组(转染sh-Keap1慢病毒质粒)、梓醇+sh-NC组(转染sh-NC+24μg/mL梓醇)、梓醇+sh-Keap1组(转染sh-Keap1+24μg/mL梓醇);CCK-8法检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞凋亡;2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞活性氧(ROS)水平;采用试剂盒分别检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Western Blot分别检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。结果与0μg/mL组比较,随着梓醇剂量增加Tac8113细胞存活率显著降低(P<0.05),因此,选择24μg/mL梓醇作为后续实验的干预条件;与对照组比较,梓醇组Tac8113细胞OD450值、划痕愈合率、ROS水平、MDA水平及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Nrf2、HO-1表达显著降低,细胞凋亡率、SOD水平及Keap1、胱天蛋白酶3(caspase3)表达显著升高(P<0.05);Keap1低表达后Tac8113细胞恶性生物学行为程度加重,且逆转了梓醇对Tac8113细胞恶性生物学行为的影响。结论梓醇抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡发挥抑癌作用,可能与上调Keap1表达,下调Nrf2和HO-1表达有关。

蒲公英甾醇通过p53通路影响口腔鳞癌细胞增殖与凋亡

目的:分析蒲公英甾醇对口腔鳞癌SCC-9细胞增殖、凋亡的影响,并探究其潜在机制。方法:采用不同浓度蒲公英甾醇处理人口腔鳞癌SCC-9细胞。通过CCK-8实验分析不同浓度蒲公英甾醇对SCC-9细胞增殖的影响;通过蛋白免疫印迹实验检测不同浓度蒲公英甾醇处理后SCC-9细胞中p53蛋白和增殖、凋亡相关蛋白的相对表达量;通过RT-qPCR检测p53 mRNA的表达。结果:相较于对照组,不同浓度蒲公英甾醇显著抑制SCC-9细胞的增殖(P<0.05),抑制作用与蒲公英甾醇的浓度与作用时间成正比;蒲公英甾醇显著促进SCC-9细胞凋亡(P<0.05),并存在剂量效应作用;蒲公英甾醇显著促进SCC-9细胞p53 mRNA的表达以及p53蛋白的表达(P<0.05)。结论:蒲公英甾醇激活p53信号通路,抑制口腔鳞状细胞癌SCC-9细胞增殖,促进SCC-9细胞凋亡。

石蒜碱通过降解SCAP蛋白抑制口腔鳞癌细胞增殖与侵袭的实验研究

目的:探讨天然植物提取物石蒜碱对口腔鳞癌细胞的作用及相关机制。方法:应用平板克隆形成实验和流式细胞术检测石蒜碱对口腔鳞癌细胞体外增殖的作用,采用划痕实验和Transwell实验检测石蒜碱对口腔鳞癌细胞侵袭的作用,应用Western免疫印迹和免疫荧光验证石蒜碱对口腔鳞癌细胞SCAP蛋白的抑制作用。构建裸鼠荷瘤模型检测石蒜碱的体内抗口腔鳞癌效果。采用Graphpad Prism软件包进行统计学分析。结果:平板克隆形成和流式细胞实验显示,石蒜碱对口腔鳞癌细胞的体外增殖具有明显的抑制作用。划痕实验和Transwell结果显示,石蒜碱对口腔鳞癌细胞的体外迁移、侵袭也具有明显的抑制作用。Western免疫印迹和免疫荧光结果显示,石蒜碱能够降解口腔鳞癌细胞的SCAP蛋白,影响癌细胞的胆固醇代谢。动物实验结果进一步表明,石蒜碱在体内也具有良好的抗癌活性,能显著抑制口腔鳞癌细胞的生长,降低癌细胞内SCAP蛋白水平。结论:石蒜碱能够通过降解SCAP蛋白,抑制口腔鳞癌细胞增殖与侵袭,有望成为治疗口腔鳞癌的低毒高效天然植物提取药物。

PTK7在口腔鳞癌中的表达分析及其生物学功能研究

目的探讨PTK7在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达水平、潜在的生物学功能及其临床意义。方法采用实时荧光PCR(quantitive real-time polymerase chain reaction,qPCR)和Western blot检测PTK7在OSCC细胞系和口腔鳞癌组织标本中的表达情况,利用siRNA干扰技术下调PTK7在HN6和Cal27细胞系中的表达,通过CCK-8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测PTK7下调后其对OSCC细胞系增殖、迁移、侵袭的影响;同时采用免疫组织化学染色法检测75例口腔鳞癌组织中PTK7蛋白的表达水平,分析其相关的临床意义。结果qPCR及Western blot结果显示PTK7基因及其编码蛋白在口腔鳞癌细胞系HN6和Cal27中高表达,并在6例新鲜口腔鳞癌标本中的表达高于其配对的癌旁正常组织;下调PTK7的表达可抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭功能;在75例口腔鳞癌组织中,PTK7的表达水平与OSCC患者的发病年龄、吸烟情况、病理分化程度等相关,其差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,高表达PTK7的OSCC患者的预后较差。结论PTK7是口腔鳞癌发生发展过程的潜在癌基因,其表达水平影响OSCC细胞的生物学功能,临床上可根据PTK7表达水平了解口腔鳞癌的特性,PTK7可作为口腔鳞癌预后判定的独立指标。

基于单原子铁纳米催化剂的纳米催化疗法对 口腔鳞癌细胞Cal27的作用

目的:制备单原子铁纳米催化剂(single-atom Fe nanocatalysts,SAF NCs),探讨其体外治疗口腔鳞癌的疗效,为口腔鳞癌治疗提供新策略。方法:用隔离与热解结合方法制备SAF NCs,利用透射电镜和球差电镜观察微观形态,X射线衍射图和元素分布能谱分析其结构和成分,溶液层面采用TMB显色实验和电子自旋共振试验检测催化性能,最后通过CCK-8和流式细胞技术、共聚焦显微镜观察体外处理口腔鳞癌Cal27细胞后的活性变化。采用GraphPad Prism 9软件包对数据进行统计学分析。结果:成功合成和表征SAF NCs,在溶液层面显示出优异的催化特性。细胞实验中,SAF NCs显示出良好的生物相容性,在模拟肿瘤微环境特性的条件下,进行体外催化治疗,Cal27细胞活性低至32.08%。结论:初步实验证明,SAF NCs具有良好的生物催化性能,在体外可有效抑制口腔鳞癌细胞增殖,为口腔鳞癌治疗提供了新策略。

circFOXK2靶向miR-4677-3p促进口腔鳞癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨circFOXK2靶向miR-4677-3p对口腔鳞癌(OSCC)细胞恶性行为的影响。方法:RT-qPCR检测circFOXK2和miR-4677-3p在OSCC组织和癌旁组织的表达。分别将si-circFOXK2、si-NC、miR-NC、miR-4677-3p模拟物、pcDNA、pcDNA-circFOXK2、si-circFOXK2+anti-miR-NC、si-circFOXK2+anti-miR-4677-3p转染OSCC细胞HSC3。通过划痕愈合实验、CCK-8法、Transwell实验、集落形成实验检测circFOXK2和miR-4677-3p表达对HSC3细胞恶行行为的影响。circFOXK2和miR-4677-3p的靶向关系通过双荧光素酶法确定。结果:OSCC组织中circFOXK2表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),miR-4677-3p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。抑制circFOXK2表达后HSC3细胞吸光度(OD)值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数显著降低(P<0.01),miR-4677-3p表达水平显著升高(P<0.01)。过表达miR-4677-3p后HSC3细胞OD值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数显著降低(P<0.01)。miR-4677-3p是circFOXK2的靶基因。下调miR-4677-3p显著减弱抑制circFOXK2表达对HSC3细胞OD值、划痕愈合率、克隆形成数、侵袭数的影响(P<0.01)。结论:抑制circFOXK2可通过促进miR-4677-3p表达来抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭。

改良衰弱评估对行口腔鳞癌皮瓣重建术老年患者术后并发症的预测价值

目的:探讨改良衰弱评估对行口腔鳞癌皮瓣重建术老年患者术后并发症的预测价值。方法:回顾性分析2014年1月—2022年12月在上海交通大学医学院附属第九人民医院接受口腔鳞癌肿瘤切除并行游离皮瓣重建的老年患者(>60岁)的围术期资料。根据改良5项衰弱评估工具(5 modified frailty index,5-mFI),依照是否衰弱分为衰弱组(≥2分)和非衰弱组(<2分),统计术后短期并发症发生率,以明确衰弱是否与其相关。采用R 4.0.5软件包中的logistics回归分析确定与衰弱相关的术后并发症。结果:共纳入1 083例患者,其中376例(34.7%)发生术后并发症。纳入衰弱组235例(21.7%),非衰弱组848例(78.3%)。衰弱组在术后并发症发生率、重症监护室住院天数、术后住院天数方面均显著多于非衰弱组(P<0.05)。在校正性别、年龄、吸烟、饮酒情况等混杂因素后,多因素logistics回归显示,肺部并发症(OR=4.76,95%CI:3.32~6.83,P<0.001)、皮瓣并发症(OR=2.65,95%CI:1.57~4.42,P<0.001)、肾功能损伤(OR=3.31,95%CI:1.13~9.66,P<0.05)等与衰弱显著相关。结论:5-mFI评分与接受口腔鳞癌皮瓣重建手术的老年患者术后并发症显著相关,为临床工作提供了一个方便、简洁的评估工具。

碳酸酐酶9在口腔鳞癌中的表达及其预后诊断价值

目的分析碳酸酐酶9(CA9)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达与临床病理特征的相关性及其预后诊断价值。方法采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CA9 mRNA在5对新鲜OSCC组织和癌旁组织中的表达。通过免疫组化检测CA9蛋白在86对配对的OSCC组织和癌旁组织中的表达水平,并探讨CA9的表达水平与患者临床病理参数的相关性。通过Kaplan-Meier生存分析法探讨CA9表达水平与OSCC预后的相关性,采用Cox回归分析影响OSCC预后的因素。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CA9在OSCC组织中的表达及其预后诊断价值。结果CA9在OSCC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),与TCGA数据库分析结果一致,且其表达高低与淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05);CA9高表达OSCC患者的总生存期短于CA9低表达组(P<0.05);淋巴结转移、CA9表达水平是影响OSCC患者预后的独立预测因素(P<0.05);CA9可能对OSCC有一定诊断意义(P<0.01)。结论CA9在OSCC中高表达,且与OSCC预后不良有关,对OSCC可能具有一定的诊断价值。

牙龈卟啉单胞菌促进口腔鳞癌恶性演进

目的检测口腔鳞癌细胞SCC-25感染牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)后细胞行为和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)相关分子表达变化,探讨Pg对口腔鳞癌进展的促进作用。方法Pg感染口腔鳞癌细胞SCC-25检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化,裸鼠皮下荷瘤模型检验该细菌对体内肿瘤生长的作用,免疫组化和Western blot检测EMT相关分子表达,甲硝唑清除Pg后检测上述细胞行为或分子变化。结果Pg感染明显促进了SCC-25细胞体外增殖、迁移、侵袭和体内裸鼠皮下荷瘤生长,并诱导E-cadherin蛋白质分子表达下调、N-cadherin和Vimentin蛋白质分子表达上调,甲硝唑清除Pg能够逆转细胞增殖、迁移、侵袭和EMT相关分子表达。结论Pg诱导口腔鳞癌发生EMT转化,促进了口腔鳞癌恶性进展。

槟榔提取物通过上调Max蛋白对口腔鳞癌细胞迁移、侵袭的影响

目的 分析槟榔提取物通过上调MYC关联因子X(Max)蛋白对口腔鳞癌细胞迁移、侵袭的影响。方法 将口腔鳞癌细胞分为对照组、低浓度槟榔提取物(低浓度)组、中浓度槟榔提取物(中浓度)组、高浓度槟榔提取物(高浓度)组,体外培养CAL127人口腔鳞癌细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定Max相对表达量;通过进行划痕实验来检验胃癌细胞株的迁移能力;通过Transwell小室对口腔鳞癌细胞的侵袭个数进行观察;采用Western印迹测定血小板源性生长因子(PDGF)B、磷酸化血小板源性生长因子(p-PDGFR)β、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白相对表达量。结果 与低、中浓度组相比,高浓度组Max表达均明显升高,口腔鳞癌细胞迁移能力及侵袭个数均明显降低(P<0.05)。高浓度组口腔鳞癌细胞处于G0/G1期均明显高于对照组、低、中浓度组(P<0.05);高浓度组口腔鳞癌细胞处于S期均明显低于对照组、低、中浓度组(P<0.05);高浓度组口腔鳞癌细胞处于G2/M期明显低于对照组、低、中浓度组(P<0.05)。高浓度组口腔鳞癌细胞增殖率较对照组及低、中浓度组明显降低,凋亡率较对照组、低、中浓度组明显升高(P<0.05)。高浓度组口腔鳞癌细胞PDGFB、p-PDGFRβ、CyclinD1蛋白表达较对照组及低、中浓度组明显降低(P<0.05)。结论 槟榔提取物可能通过上调Max蛋白的表达而显著抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭。

LINC00472通过下调miR-155-5p表达抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472通过靶向微小RNA-765(miR-155-5p)在口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制。方法:生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证LINC00472与miR-155-5p的关系。采用qRT-PCR检测40例OSCC组织样本及SCC-15细胞系中LINC00472和miR-155-5p表达水平。将SCC-15细胞分为对照组、LINC00472过表达组、miR-155-5p过表达组和LINC00472过表达+miR-155-5p过表达组。用MTT法、划痕实验和Transwell法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。用qRT-PCR和western blotting检测细胞钙黏附蛋白E(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果:miR-155-5p是LINC00472的直接靶基因。OSCC组织和SCC-15细胞中LINC00472低表达(P<0.01),而miR-155-5p高表达(P<0.01),二者表达呈负相关性(r=-0.766,P<0.01)。与对照组比较,LINC00472过表达组SCC-15细胞的增殖、迁移、侵袭减弱,Vimentin和MMP9表达减少、E-cadherin表达增加(P<0.01);miR-155-5p过表达组SCC-15细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强,Vimentin和MMP9表达增加、E-cadherin表达减少(P<0.01)。miR-155-5p过表达可逆转过表达LINC00472对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭等的作用。结论:LINC00472抑制OSCC的发生发展,LINC00472/miR-155-5p调控轴的发现可能为OSCC提供潜在的治疗靶点。

EGFR、PRDX4、GLUT-1在口腔鳞癌组织中的表达水平及其临床意义

目的研究表皮生长因子受体(EGFR)、过氧化物还原蛋白4(PRDX4)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在口腔鳞癌(OSCC)组织中的表达水平及其临床意义。方法选取口腔鳞癌患者74例,比较其癌组织和癌旁正常组织EGFR、PRDX4、GLUT-1 mRNA和蛋白表达情况,分析三者表达水平的相关性,以及其与OSCC病理特征、患者生存时间的关系。结果OSCC癌组织中EGFR、PRDX4、GLUT-1 mRNA水平及蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(P<0.05)。OSCC患者组织EGFR、PRDX4、GLUT-1表达水平互相呈正相关(P<0.001)。低分化程度、有淋巴结转移、Ⅲ期~Ⅳ期患者EGFR、PRDX4和GLUT-1阳性表达率较高(P<0.05)。EGFR、PRDX4、GLUT-1阳性表达者总生存率低于阴性表达者(P<0.05)。结论OSCC癌组织EGFR、PRDX4、GLUT-1表达水平明显升高,且与临床病理参数及生存时间紧密相关,可能参与OSCC的发生发展。

lncRNA MAFG-AS1靶向miR-3180-3p调控口腔鳞癌HSC4细胞增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MAFG反义RNA1(MAFG-AS1)靶向miR-3180-3p对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时定量PCR检测口腔鳞癌组织和对应正常黏膜中MAFG-AS1和miR-3180-3p表达。以口腔鳞癌细胞HSC4为研究对象,分别构建干扰MAFG-AS1、过表达miR-3180-3p或抑制miR-3180-3p表达的口腔鳞癌细胞株,CCK-8、平板克隆实验、流式细胞术、蛋白印迹法检测细胞活力、克隆形成数、凋亡率及cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9表达。荧光素酶报告实验验证MAFG-AS1和miR-3180-3p的靶向关系。结果:与正常黏膜比较,口腔鳞癌组织MAFG-AS1表达显著升高(P<0.05),miR-3180-3p表达显著降低(P<0.05)。干扰MAFG-AS1或过表达miR-3180-3p均可降低HSC4细胞活力和克隆形成数(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),上调cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 9蛋白表达(P<0.05)。miR-3180-3p是MAFG-AS1的直接靶点,MAFG-AS1负调控miR-3180-3p表达。抑制miR-3180-3p可增加HSC4细胞活力和克隆形成数(P<0.05),抑制细胞凋亡(P<0.05),下调cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 9蛋白表达(P<0.05),进而削弱干扰MAFG-AS1对HSC4细胞的增殖抑制和凋亡促进作用(P<0.05)。结论:干扰MAFG-AS1通过上调miR-3180-3p表达抑制口腔鳞癌HSC4细胞增殖,促进细胞凋亡。

BMI1/NF-κB轴重塑TAMs表型促进口腔鳞癌恶性生物学行为

目的:探究口腔鳞癌(OSCC)细胞中BMI1调控肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)表型转化的作用及其机制。方法:分析GEPIA 2.0网站中519例头颈鳞癌组织和44例正常组织中BMI1表达。实时荧光定量PCR、蛋白印迹法检测3例OSCC组织和SCC9、SCC15和CAL27细胞系中BMI1的表达;siRNA技术建立SCC9细胞的BMI1敲除细胞系,CCK-8、划痕实验、Transwell实验探究BMI1/NF-κB轴介导癌细胞恶性生物学行为;收集各组细胞条件培养基,通过OSCC细胞条件培养基与人单核细胞(THP-1)共培养,检测THP-1的募集和巨噬细胞分型相关标志物的表达情况。裸鼠荷瘤实验进一步体内检测BMI1对移植瘤增生的影响。结果:BMI1在OSCC组织以及细胞系中显著高表达;BMI1/NF-κB轴促进了OSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力,也促进了THP-1细胞的募集与M2型极化。体内实验进一步证明了敲低BMI1可以抑制OSCC生长。结论:BMI1/NF-κB轴可通过调控TAMs的M2型转化,促进口腔鳞癌的增殖、迁移和侵袭能力。靶向阻断BMI1/NF-κB轴可能为口腔鳞癌治疗提供新靶点和新策略。

鼠尾草酚抑制巨噬细胞NLRP3/IL-1β 通路活化对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响研究

目的旨在探讨巨噬细胞中NLRP3/IL-1β通路对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及鼠尾草酚对这一过程的调控作用。方法qRT-PCR,Western Blot,ELISA法检测口腔鳞癌细胞与巨噬细胞串扰对巨噬细胞NLRP3炎症小体激活及IL-1β释放的影响;Transwell以及qRT-PCR实验检测不同浓度IL-1β对于口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响;ELISA实验检测鼠尾草酚对于串扰引起巨噬细胞NLRP3炎症小体激活及IL-1β释放的影响;Transwell实验检测鼠尾草酚通过影响串扰引起的口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的改变;CCK8实验检测鼠尾草酚培养口腔鳞癌细胞系Cal-27和单核巨噬细胞系THP-1的毒性作用。结果口腔鳞癌细胞与巨噬细胞串扰导致巨噬细胞中NLRP3炎症小体激活,IL-1β释放;Transwell实验结果表明,IL-1β以剂量依赖性的方式促进口腔鳞癌细胞迁移和侵袭;鼠尾草酚以剂量依赖性的方式抑制着串扰引起的巨噬细胞NLRP3炎症小体激活与IL-1β释放,且40μM浓度的鼠尾草酚显著抑制被串扰增强的口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力;CCK8实验结果表明0~100μM浓度的鼠尾草酚对于Cal-27和THP-1细胞均无毒性。结论本研究证明口腔鳞癌细胞与巨噬细胞的串扰可以促进巨噬细胞中NLRP3炎症小体激活与IL-1β释放,进而显著增强口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭能力;鼠尾草酚通过抑制巨噬细胞NLRP3/IL-1β通路的激活与IL-1β释放,抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭。

黄芩苷调节JAK2/STAT3信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:研究黄芩苷通过调节Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路对口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:体外培养人OSCC细胞CAL27,分为对照组、低浓度黄芩苷组(100 mg/L)、中浓度黄芩苷组(150 mg/L)、高浓度黄芩苷组(200 mg/L)、高浓度黄芩苷(200 mg/L)+Broussonin E组(20μmol/L JAK2/STAT3激活剂)。然后用集落形成实验检测各组细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,Transwell法检测各组细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞白细胞介素(IL)-18、IL-1β表达水平,Western blot检测各组细胞中磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。结果:与对照组比较,低浓度黄芩苷组、中浓度黄芩苷组、高浓度黄芩苷组CAL27细胞的集落形成率、细胞侵袭数目、细胞中IL-18、IL-1β表达水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、PCNA、MMP-9蛋白表达降低,细胞凋亡率、BAX蛋白表达增加(均P<0.05);中浓度黄芩苷组、高浓度黄芩苷组与低浓度黄芩苷组相比,以及高浓度黄芩苷组与中浓度黄芩苷组比较与上述结果一致(均P<0.05);高浓度黄芩苷+Broussonin E组与高浓度黄芩苷组比较,与上述结果趋势相反(P<0.05)。结论:黄芩苷可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路对口腔鳞癌细胞的增殖、凋亡和侵袭产生影响。

基于网络药理学和分子对接的白药子抗口腔鳞癌作用机制研究

为利用网络药理学及分子对接技术探究白药子有效成分对应靶基因治疗口腔鳞癌的作用机制.采用TCMSP、PubChem、GeneCards、David、STRING 11.5、SwissTargetPrediction、中国知网等数据库进行文献挖掘获取中药活性成分及疾病相关靶标,并对其进行条件筛选.运用Cytoscape3.7.2绘制白药子的“药物-活性成分-靶点-疾病”网络图,运用Venny 2.1.0网站绘制白药子有效成分-口腔鳞癌交集靶点的韦恩图,利用STRING 11.5网站,将置信度设为0.400,其他设置保持默认,提取交集基因制作蛋白互作(PPI)关系网络图,依据相互关系筛选核心靶标.制作“中药-成分-靶点-疾病”核心靶标互作网络模型.基于David数据库进行功能分析及通路富集分析,再用微生信网站(http://www.bioinformatics.com.cn/)进行可视化分析.结果得到白药子活性成分25个,筛选出有效活性成分6个,筛选出有效基因靶点155个、口腔鳞癌相关基因靶点3450个,获取相关交集靶点90个,得到20条主要KEGG通路.本研究通过网络药理学研究分析,构造白药子治疗口腔鳞癌“化合物、靶点及其途径”的互作网络,为研究白药子治疗口腔鳞癌临床应用提供理论基础.

口腔鳞癌患者血清miRNA-503-5p、PIK3R1表达水平与临床特征及预后的相关性研究

目的探讨口腔鳞癌患者血清微RNA(miRNA)-503-5p、磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)表达水平及其与临床特征和预后的相关性。方法选取2022年3月至2023年11月在康复大学青岛中心医院(青岛市中心医院)就诊的157例口腔鳞癌患者作为疾病组进行前瞻性研究,并根据患者预后情况将口腔鳞癌患者分为预后良好组(n=121)和预后不良组(n=36)。另选取在本院进行体检的136名健康者作为健康组。采用实时聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法对各组血清miRNA-503-5p、PIK3R1表达水平进行检测,并比较血清miRNA-503-5p、PIK3R1表达水平与临床特征的关系;采用Pearson相关性分析对患者血清miRNA-503-5p与PIK3R1表达水平的相关性进行分析;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估血清miRNA-503-5p、PIK3R1表达水平及二者联合对口腔鳞癌患者预后的预测价值。结果疾病组血清miRNA-503-5p表达水平为1.32±0.19,高于健康组(1.02±0.16),疾病组血清PIK3R1表达水平为0.71±0.13,低于健康组(1.01±0.15),差异均有统计学意义(P<0.05)。Target Scan Human网址预测miRNA-503-5p与PIK3R1间存在结合位点,Pearson相关性分析结果显示,口腔鳞癌患者血清miRNA-503-5p与PIK3R1表达水平呈负相关(r=-0.453,P<0.001)。TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况等临床特征不同的患者血清miRNA-503-5p、PIK3R1表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清miRNA-503-5p表达水平为1.52±0.21,高于预后良好组(1.26±0.18),预后不良组血清PIK3R1表达水平为0.59±0.10,低于预后良好组(0.75±0.14),差异均有统计学意义(P<0.05)。血清miRNA-503-5p、PIK3R1联合预测口腔鳞癌患者预后情况的曲线下面积(AUC)为0.903,灵敏度和特异度分别为76.86%和94.44%,二者联合预测优于血清miRNA-503-5p、PIK3R1单独预测(P<0.05)。结论在口腔鳞癌患者中血清miRNA-503-5p呈高表达,PIK3R1呈低表达,二者表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况等临床特征以及预后有关,可以作为评估口腔鳞癌患者预后的生物学指标。

皖南尖吻蝮蛇蛇毒抑瘤组分Ⅰ促进Erastin诱导人口腔鳞癌Hsc3细胞发生铁死亡的相关机制

目的 研究皖南尖吻蝮蛇蛇毒抑瘤组分Ⅰ(anti-tumor component Ⅰ from Agkistrodon acutus venom, AAVC-Ⅰ)是否能够促进Erastin诱导口腔鳞癌细胞铁死亡的水平并初步探索相关机制。方法 通过CCK8检测细胞活力,通过流式细胞仪检测细胞中活性氧、脂质氧化以及线粒体膜电位水平,通过Western-blot检测细胞内胱氨酸谷氨酸转运受体(system XC-,xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)蛋白表达水平,通过还原性谷胱甘肽(Glutathione, GSH)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)试剂盒检测细胞内GSH、MDA水平。结果 经Erastin和浓度为2μg/ml的AAVC-Ⅰ联合处理后,细胞活力相比于单独的Erastin处理出现了明显下降(P<0.05),并且可以被铁死亡抑制剂Fer-1所逆转(P>0.05),同时联合处理组细胞中活性氧、脂质氧化水平出现了明显上升(P<0.05),而线粒体膜电位、GSH水平明显下降(P<0.05),此外xCT、GPX4蛋白表达被抑制(P<0.05)。结论 浓度为2μg/ml的AAVC-Ⅰ可以促进Erastin诱导口腔鳞癌细胞铁死亡的水平,其机制可能是通过抑制xCT/GPX4使细胞抗氧化能力下降,氧化应激水平增加。

Hh信号通路分子TPX2对口腔鳞癌增殖的作用探讨

目的探讨与分析Hedgehog(Hh)信号通路分子TPX2对口腔鳞癌增殖的作用。方法选取2022年1月—2023年7月呼伦贝尔职业技术学院口腔教研室培养的6株CAL-27人口腔鳞癌细胞株为研究对象,将转染Lv-pc3.0 vector的3株CAL-27人口腔鳞癌细胞株作为对照组,将转染Lv-pc3.0-shTPX2的3株CAL-27人口腔鳞癌细胞株作为Lv-shTPX2组,对比两组CAL-27人口腔鳞癌细胞株细胞周期、细胞增殖与目的基因、蛋白表达情况。结果转染后24、48 h,Lv-shTPX2组的TPX2 mRNA[(5.44±0.17)、(5.18±0.47)]与蛋白相对表达水平[(2.01±0.23)、(1.33±0.16)]低于对照组的TPX2 mRNA[(24.59±0.33)、(24.58±2.76)]与蛋白相对表达水平[(10.47±0.16)、(7.48±0.33)],差异有统计学意义(t=89.352,12.002,52.299,29.045,P均<0.05);Lv-shTPX2组的细胞增殖指数更低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,Lv-shTPX2组的G_(2)+M期细胞相对比例高于对照组,S期细胞相对比例低于对照组,GLI2、FOXM1蛋白相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论抑制Hh信号通路分子TPX2的表达可抑制口腔鳞癌细胞增殖,也可抑制GLI2、FOXM1蛋白表达,还可调节细胞周期状况,可为治疗口腔鳞状细胞癌提供新的途径。