口腔鳞癌相关成纤维细胞能量代谢表型的实验研究

目的运用细胞代谢呼吸动态分析仪研究口腔鳞癌相关成纤维细胞(oral cancer associated fibroblasts,CAFs)能量代谢表型,为靶向CAFs代谢治疗口腔鳞癌提供研究依据。方法原代培养CAFs和癌旁正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),细胞代谢呼吸动态分析仪对CAFs和NFs进行线粒体和糖酵解压力测试,通过比较CAFs和NFs的OCR、ECAR值分析二者氧化磷酸化和糖酵解代谢水平的差异,得出CAFs能量代谢表型。结果 CAFs和NFs氧化磷酸化基础水平基本一致,CAFs氧化磷酸化最大值和储备值明显提高(P<0.01);CAFs糖酵解基础值、最大值和储备值均明显高于NFs(P<0.01)。结论 CAFs氧化磷酸化和糖酵解代谢能力较NFs显著增强,氧化磷酸化水平的增强主要体现在储备能力上,抑制CAFs氧化磷酸化储备能力可能成为新的抑癌靶点。

VEGF-D在口腔鳞癌相关成纤维细胞的表达研究

目的:研究VEGF-D在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的表达情况以及其表达水平是否与口腔鳞癌淋巴结转移相关。方法:通过免疫组化和RT-PCR检测VEGF-D在NFs、无淋巴结转移CAFs、淋巴结转移CAFs的蛋白和mRNA表达情况。结果:成功培养和纯化CAFs,与NFs相比,CAFs阳性表达α-SMA,生长增殖速度明显增加,细胞排列混乱;VEGF-D在淋巴结转移CAFs的染色强度明显增加,用2-ΔΔCT法计算VEGF-D的mRNA表达水平分别为0.806 7±0.117、1.192 5±0.125、2.085 3±0.131。结论:与NFs相比,CAFs表达VEGF-D明显增加,且与患者淋巴结转移相关。

口腔鳞癌相关成纤维细胞糖代谢的初步研究

目的通过对口腔鳞癌相关成纤维细胞(carcinoma-associate fibroblasts,CAFs)糖代谢相关指标的检测,探讨肿瘤微环境CAFs糖代谢的可能方式并分析其作用和意义。方法培养CAFs和癌旁正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),詹纳斯绿B染色观察线粒体的数量及分布,JC-1荧光染色观察线粒体膜电位的改变。培养1、2、3、4 d,通过定磷法用可见分光光度计检测细胞中ATP的含量,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测细胞摄取葡萄糖的能力,乳酸酶法检测细胞分泌乳酸情况。结果与NFs组相比,CAFs线粒体詹纳斯绿B和JC-1荧光染色强度明显下降,显示CAFs线粒体活性下降。随着培养时间的延长,CAFs较NFs组摄取葡萄糖增多,ATP产能却减少,分泌乳酸增加,差异均有统计学意义(P<0.05);以培养第4天差异更明显,CAFs和NFs组培养基葡萄糖浓度分别为(10.85±1.42)、(16.04±1.09)mmol/L,产生ATP浓度分别为(42.99±4.64)、(57.37±2.75)μmol/g,产生乳酸浓度分别为(12.1±0.81)、(7.06±0.95)mmol/L。结论口腔鳞癌CAFs细胞糖代谢方式发生了改变,以糖酵解为主。

肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞状细胞癌生物学行为影响的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是全球第六大常见恶性肿瘤,其发生、发展与肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)密切相关。肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)作为TME中重要的组成成分,通过分泌多种生长因子、细胞因子、炎性因子、外泌体等参与上皮-间充质转化、重塑细胞外基质,激活多种生物学途径,对OSCC的发生、发展产生影响。本文对CAFs的来源、特点、异质性以及CAFs对OSCC的生物学行为的影响做一综述。

SCRN1在口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞中的表达及对HSC3细胞株生物学特性的影响

目的:探究胞吐作用相关蛋白(SCRN1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)中的表达及对CAFs分泌MMP2功能的影响,进一步研究CAFs对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。方法:通过免疫组织化学染色(IHC)检测SCRN1在OSCC组织及癌旁组织中的表达。原代培养、分离、纯化、验证正常成纤维细胞(NFs)和CAFs,用免疫细胞化学染色法(ICC)、蛋白免疫印迹(WB)、qRT-PCR检测NFs、CAFs中SCRN1的表达情况。CCK-8、Transwell实验检测NFs、CAFs及CAFs-shSCRN1增殖、迁移及侵袭能力。收集NFs、CAFs上清并用ELISA和明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2(MMP2)水平及活性,然后分别与HSC3细胞株共培养,探究两种上清共培养对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。沉默CAFs的SCRN1基因后,收集CAFs、CAFs-shSCRN1和CAFs-Vector上清并检测MMP2水平及活性,然后分别与HSC3共培养,探究三种上清培养条件对HSC3细胞株迁移、侵袭能力的影响。结果:SCRN1在OSCC组织中阳性表达率及表达水平较高。成功分离、培养、鉴定NFs和CAFs, CAFs较NFs表达更高水平的SCRN1,且其增殖、迁移、侵袭能力均较NFs强。沉默SCRN1能够降低CAFs增殖、迁移及侵袭能力。CAFs上清分泌更高水平和活性的MMP2,与HSC3细胞株共培养可明显促进HSC3细胞株迁移、侵袭能力。沉默SCRN1后的CAFs上清中MMP2水平和活性降低,其促进HSC3细胞株迁移、侵袭能力也明显减弱。结论:SCRN1可调控CAFs分泌MMP2,在肿瘤微环境中,促进HSC3细胞株迁移和侵袭能力。

肿瘤相关成纤维细胞对口腔鳞癌细胞生长和迁移的影响

目的研究肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响,初步探讨CAFs在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法采用原代培养的方法,培养口腔鳞癌相关成纤维细胞,光学显微镜观察其形态,免疫组化和免疫印迹实验进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖能力。transwell迁移实验检测CAFs诱导口腔鳞癌细胞迁移的能力;萤火虫荧光素酶报告系统检测CAFs对肿瘤细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验评价CAFs对肿瘤细胞克隆形成能力的影响。结果成功分离培养出口腔鳞癌来源的CAFs。CAFs能促进口腔鳞细胞的迁移、增殖和克隆形成等生物学行为。结论 CAFs能显著影响口腔鳞癌的增殖和迁移,表明其在口腔鳞癌的发生发展中发挥着一定的作用。

口腔鳞癌对牙龈成纤维细胞转化为肿瘤相关成纤维细胞的影响

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的来源。方法:分离正常牙龈组织和口腔鳞癌组织的成纤维细胞,将口腔鳞状细胞癌细胞Cal27培养基加入到正常牙龈成纤维细胞内(NFs);以NFs作为阴性对照、来自于口腔鳞癌组织的成纤维细胞为阳性对照,通过免疫细胞化学染色、实时定量RT-PCR等技术对其进行对比研究。结果:与NFs相比,CAFs胞体更大,排列更加混乱,生长更为快速,形态明显不同。免疫细胞化学染色结果显示:CAFs波形蛋白(VIM)呈阳性,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)部分呈强阳性、部分呈阴性,成纤维细胞激活蛋白(FAP)呈强阳性,血小板源性生长因子受体α(PDGFR-α)呈阳性,细胞角蛋白(CK)呈阴性;NFs的VIM呈阳性,其余呈阴性;NFs与Cal27条件培养基共培养后,可见α-SMA表达部分阳性,FAP和PDGFR-α表达呈强阳性。实时定量RT-PCR结果发现:与NFs比较,CAFs、NFs与Cal27条件培养基共培养后α-SMA、FAP的表达明显上调,PDGFR-α的表达明显下调。结论:口腔鳞状细胞癌细胞可激活NFs转化为CAFs,NFs可能为CAFs的来源之一。

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株增殖活性的影响

目的本研究拟通过体外实验观察口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对舌癌细胞增殖能力的影响。方法建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,对Tca8113进行形态学观察,并通过MTT法及流式细胞术,观测口腔CAFs对Tca8113增殖活性及细胞周期的影响。结果CAFs和Tca8113直接混合培养组的Tca8113细胞形态及生长方式发生变化;与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)相比,CAFs增强了Tca8113的增殖活性(P<0.05),并提高了处于S期和G2期的癌细胞的比例(48.1%vs40.0%)。结论口腔CAFs可在体外促进舌癌细胞株Tca8113的增殖,提示其在口腔鳞癌发展中起重要作用。

口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响

目的研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞(NFs),免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs(实验A组)、NFs(实验B组)与人淋巴管内皮细胞(HLEC)共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力。结果培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组(P<0.01)。结论口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs。

口腔癌相关成纤维细胞的体外生物学行为研究

目的探讨口腔鳞癌中癌相关成纤维细胞(carcinoma associated fibroblasts,CAFs)的体外生物学行为。方法组织块贴壁法培养CAFs及牙龈正常成纤维细胞(normal fibrolasts,NFs);通过形态观察,免疫组化染色,细胞增殖活性、贴壁率、迁移能力等测定,比较两种细胞的生物学行为差异。结果与NFs相比,CAFs特征性表达成纤维激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2),具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05)。结论口腔癌CAFs特征性表达相关蛋白,体外增殖、粘附、迁移能力均高于NFs。

肿瘤相关成纤维细胞在口腔鳞状细胞癌中的作用及其靶向治疗的研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是世界排名第六的恶性肿瘤,5年生存率不足50%,其发病机制目前尚未完全阐明。肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中的重要细胞成分之一,在肿瘤的侵袭、转移及血管生成中发挥重要的作用。CAFs主要通过分泌生长因子、修饰细胞外基质、支持血管生成以及抑制抗肿瘤免疫应答来促进肿瘤的发生发展。以CAFs作为治疗靶点,可以有效地抑制OSCC的侵袭和转移,限制肿瘤血管生成,进而为OSCC的干预提供新的治疗策略。本文就CAFs在OSCC的作用及其靶向治疗的研究进展进行综合论述。

敲低癌相关成纤维细胞HSF1基因对口腔鳞癌细胞裸鼠皮下成瘤的影响

目的:探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)中热休克因子1(HSF1)基因对口腔鳞癌(OSCC)细胞裸鼠皮下移植瘤生长和转移的影响。方法:采用Western blot鉴定体外分离培养的OSCC组织及癌旁组织成纤维细胞,以获取CAFs;采用慢病毒敲低CAFs中的HSF1,构建CAFs-shHSF1细胞(实验组)和CAFs-shNC细胞(对照组);将肿瘤细胞Cal27分别与CAFs-shHSF1细胞和CAFs-shNC细胞按1∶1混匀,接种于裸鼠腋下,观察成瘤情况及移植瘤生长变化,分析体质量和瘤体体积差异,HE染色和免疫组化染色观察移植瘤转移以及上皮间质转化(EMT)情况。结果:OSCC组织成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)和成纤维细胞特异蛋白-1(FSP-1)等CAFs标记物的蛋白丰度较癌旁组织成纤维细胞明显升高。实验组裸鼠的肿瘤体积明显低于对照组(P<0.05),而裸鼠体质量没有显著差异(P>0.05);实验组肝转移瘤数目少于对照组(P<0.05);与对照组比较,实验组移植瘤α-SMA和波形蛋白免疫组化染色减弱,上皮细胞钙粘蛋白染色无明显改变。结论:敲低CAFs中的HSF1基因能够显著抑制OSCC细胞裸鼠移植瘤的生长和转移,可能通过部分EMT机制发挥作用。

一株永生化口腔癌相关成纤维细胞系的建立及鉴定

背景:肿瘤相关成纤维细胞系是构成肿瘤微环境的重要细胞成分,但是在原代培养过程中极易老化和表型丢失,进而显著降低肿瘤相关成纤维细胞功能相关研究的实验重复性。目的:旨在建立一种永生化的口腔癌相关成纤维细胞系,为探索口腔癌中肿瘤相关成纤维细胞功能提供稳定的细胞实验材料。方法:采用酶消化法分离、纯化人口腔癌组织来源肿瘤相关成纤维细胞,利用包装有人端粒酶反转录酶(pBABE-hygro-hTERT)的慢病毒感染原代肿瘤相关成纤维细胞,鉴定其形态及其标志物,然后进行细胞增殖、衰老功能检测,对原代和永生化肿瘤相关成纤维细胞进行染色体核型分析、细胞系身份鉴定。结果与结论:①成纤维细胞永生化后,其标志物α-SMA、PDGFRβ以及FSP-1表达没有发现显著改变;②即使在传代15代后,永生化成纤维细胞的增殖速率明显优于非永生化成纤维细胞;③β-半乳糖苷酶染色结果显示:随着细胞代数增加,与非永生化成纤维细胞相比,永生化成纤维细胞未见明显衰老;④永生化成纤维细胞染色体核型仍保留正常细胞的基本特征,而未发生恶性转化;⑤短串联重复序列鉴定结果显示,永生化成纤维细胞为原代细胞,与已知细胞数据库信息均无重合;⑥以上结果说明,成功建立了口腔癌来源的永生化成纤维细胞系,为口腔癌肿瘤微环境研究提供进一步的实验基础。

肿瘤相关成纤维细胞对舌鳞癌细胞功能的影响及机制研究

目的:探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对口腔癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响,初步分析产生影响的可能原因。方法:体外培养CAFs、舌癌细胞株SCC-9和CAL-27,并建立CAFs与舌癌细胞株共同培养体系;采用红色荧光蛋白标记法观察CAFs对舌癌细胞株增殖能力的影响;利用Transwell小室建立CAFs与舌癌细胞株SCC-9或CAL-27的交互作用模型,观察CAFs对舌癌细胞株迁移和侵袭能力的影响;采用细胞因子芯片检测CAFs单独培养、SCC-9单独培养、CAFs和SCC-9共同培养上清中可溶性细胞因子水平的差异。采用裸鼠成瘤实验观察CAFs对舌癌成瘤能力的影响。结果:培养第5天SCC-9与CAFs共同培养组中SCC-9的数量是初始SCC-9量的(4.41±0.38)倍,明显高于SCC-9单独培养组(3.21±0.35)倍;CAL-27组结果相似。24 h后SSC-9+CAFs组迁移到小室底面的SCC-9细胞与SCC-9单独培养组相比比值为2.6±0.42,CAL-27组比值为3.11±0.46。细胞侵袭研究结果与迁移研究结果类似,共同培养组穿透基质胶的OCC细胞明显增多(P<0.05)。细胞因子抗体芯片分析发现,与细胞单独培养相比,共同培养组培养上清中CCL2、CCL5、IL8水平明显升高。裸鼠成瘤实验结果发现,6周后,SCC-9与CAFs混合注入组的肿瘤体积明显大于SCC-9单独注入组。结论:口腔CAFs能促进舌癌细胞株SCC-9和CAL-27的增殖、迁移和侵袭和肿瘤生长,癌细胞功能的改变可能与微环境中CCL2、CCL5、IL8等细胞因子水平升高有关。

口腔鳞状细胞癌肿瘤相关成纤维细胞的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤,与其他恶性肿瘤相似,其肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是肿瘤微环境中最重要的间质细胞,在肿瘤的增殖、转移、免疫耐受及治疗抵抗等方面发挥重要的调控作用。本文就OSCC中CAFs研究进展及其对临床治疗的启发,建立CAFs作为干预靶点,打破肿瘤细胞赖以生存的微环境,干扰肿瘤细胞的生长和侵袭,有效阻断肿瘤新生血管的形成,激活机体免疫功能,为OSCC辅助治疗提供新的思路和策略。

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株侵袭特性的影响

目的采用重建基底膜细胞侵袭实验，研究直接分离自舌癌组织旁的癌相关成纤维细胞（CAFs）对舌癌细胞株侵袭特性的影响，探讨CAFs在口腔鳞癌发展中的作用。方法以Matrigel模拟重建基底膜，采用Transwell小室建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型，观测CAFs对Tca8113侵袭特性的影响。结果与正常成纤维细胞（NFs）相比，CAFs能促使更多的Tca8113细胞穿透Matrigel（P〈0．05）。结论口腔CAFs能促进舌癌细胞株Tca8113的侵袭，在口腔鳞癌发展中起重要作用。

口腔癌相关成纤维细胞的特殊体外行为研究

目的探讨口腔颊癌中癌相关成纤维细胞(Carcinoma Associated Fibroblasts,CAFs)的特殊体外生物学行为。方法组织块贴壁法培养CAFs及正常颊黏膜成纤维细胞(Normal Fibrolasts,NFs);通过体外生长形态观察,增殖、粘附行为差异的区别,比较两种细胞的生物学行为差别。结果与NFs相比,CAFs均具有更高的增殖活性、贴壁率及迁移能力(P<0.05)。结论口腔癌CAFs的体外增殖、粘附能力均高于NFs,这或许提示其在口腔癌的侵袭、转移中发挥了重要的作用。

不同分化程度口腔鳞癌旁的成纤维细胞增殖活力比较

背景与目的:有关口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生发展的机制目前尚未阐明,过去多数研究仅单纯从上皮的角度进行探讨,忽略了间质(宿主)细胞的变异在OSCC发生发展中的重要作用。本研究探讨在不同分化程度OSCC旁的癌相关成纤维细胞(CAFs)其增殖活性是否存在差异。方法:将前期冻存的第三代不同分化程度OSCC旁的CAFs和同部位正常成纤维细胞(NFs)进行复苏并鉴定,测定细胞生长曲线、有丝分裂指数曲线、MTT法,了解各类细胞的增殖活性是否存在差异。重复试验3次,每次检测3孔细胞,将平均值作为最终结果,并用两因素方差分析对检测值进行统计分析。结果:CAFs每天的细胞生长计数值、有丝分裂计数值、MTT检测值均高于NFs,CAFs的生长及存活能力均强于NFs(P<0.05),不同分化程度OSCC旁的CAFs增殖活性的差异有显著性(P<0.05),分化程度较低的舌癌旁CAFs的增殖活性更强。结论:OSCC与CAFs存在交互作用,CAFs增殖活性的改变可能对OSCC的分化程度产生影响。

癌相关成纤维细胞促口腔鳞状细胞癌侵袭转移的研究进展

癌相关成纤维细胞是口腔鳞状细胞癌间质中的主要成分,与肿瘤患者的预后息息相关。癌相关成纤维细胞自分泌和旁分泌信号蛋白,直接或间接作用于肿瘤微环境,调控肿瘤的发生、发展、侵袭和转移。目前,癌相关成纤维细胞促口腔鳞状细胞癌侵袭转移的机制包括细胞外基质改建、生长因子及趋化因子的分泌、上皮-间质转化、免疫抑制和血管新生等,本文对此作一综述。

癌相关成纤维细胞标志物在食管鳞癌中的临床病理学意义

目的通过观察癌相关成纤维细胞(CAFs)标志物成纤维细胞激活蛋白1(FSP1)、平滑肌肌动蛋白(SMA)、血小板衍生生长因子受体-α(PDGFRα)在食管鳞癌组织中的表达情况,研究CAFs在食管鳞癌中的临床病理学意义。方法用免疫组化法观察141例食管黏膜组织中FSP1、SMA、PDGFRα的表达情况,分析CAFs 3个标志物与食管鳞癌相关临床病理学的关系。结果过表达的FSP1与原发肿瘤分期(P<0.001)、临床分期(P=0.005)和总生存率(P=0.009)相关;高表达的SMA与原发肿瘤分期(P=0.007)、淋巴结转移(P=0.043)、临床分期(P=0.002)和总生存率(P=0.018)相关;过表达的PDGFRα与原发肿瘤分期(P=0.005)、临床分期(P=0.048)和总生存率(P=0.045)相关。结论 CAFs参与食管鳞癌的发生、发展,对于评价食管鳞癌患者的预后具有重要意义,可能成为食管鳞癌潜在的诊断和治疗靶点。