雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值。方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况。结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-效关系;较小浓度的雷公藤内酯醇即可产生较好的抑制效果,作用小于7 d时与顺铂相当,7 d时0.001 mg.L-1抑制率达60%,0.01 mg.L-1抑制率达90%,显著优于顺铂(P<0.05);1、3、5 d作用点时,在大于0.1 mg.L-1时顺铂效果优于雷公藤内酯(P<0.05),7 d时两者差异无统计学意义;各个作用点雷公藤内酯醇的50%抑制浓度均小于顺铂。结论雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113有明显的抑制作用,呈量-效、时-效关系,且在较低浓度和较长时间作用下其抑制率明显高于顺铂。

敲低circ0001273抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨circ_0001273对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用,为口腔鳞癌的靶向治疗研究提供相关的研究基础。方法收集12例临床诊断为口腔鳞癌患者肿瘤标本及癌旁组织,qRT⁃PCR检测circ_0001273、circ_0018569和circ_0027152的表达,选取在癌及癌旁组织中表达差异最大的circ_0001273;在UM1及CAL27两种口腔鳞癌细胞株中使用siRNA敲低circ_0001273,以MTS、Transwell实验分别检测对UM1及CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果circ_0001273在12例口腔鳞癌组织中表达异常升高(P<0.05),在UM1及CAL27细胞中敲低circ_0001273后,UM1及CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论敲低circ_0001273可以抑制口腔鳞癌的增殖、迁移及侵袭。

红芪多糖和硒化红芪多糖对口腔癌细胞作用的体外实验研究

目的研究红芪多糖(sedysarum polybotys saccharides,HPS)和硒化红芪多糖(selenizated hedysarum polybotyssaccharides,SE HPS)对口腔癌细胞SCC25的影响。方法取对数生长期的口腔癌细胞系SCC25,分别加入不同浓度(0、10、25、50、100、200、400μg/mL)的HPS和SE HPS,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT qPCR及Westernbloting观察细胞凋亡相关的指标。结果各浓度HPS和SE HPS均可抑制SCC25增殖,50μg/mLHPS和SE HPS抑制SCC25增殖的效果最强,并呈现时间依赖性,48h内抑制增殖效果明显,48h后效果达到平台期;SE HPS抑制SCC25细胞增殖的效果强于HPS(P<0.05)。流式细胞术结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡率分别为25.8%、30.8%,与对照组(0μg/mLHPS和SE HPS)相比差异有统计学意义(P<0.05);RT qPCR及Westernbloting结果显示50μg/mLHPS和SE HPS作用于SCC2548h,凋亡基因Fas/Fasl的mRNA与蛋白表达均上调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论HPS和SE HPS均可以抑制口腔癌细胞SCC25的增殖,SE HPS效果优于HPS,可能通过Fas/Fasl途径发挥诱导凋亡作用。

高迁移率族蛋白N2抑制口腔鳞状细胞癌增殖作用的体外研究

目的以人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113为实验模型,初步探讨高迁移率族蛋白N2(HMGN2)抗口腔鳞状细胞癌的作用。方法大量培养重组人HMGN2表达载体大肠杆菌BL21,用异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导HMGN2的表达,产物用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit进行纯化。在细胞培养基中加入不同质量浓度的HMGN2,通过MTT、Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和Western-blot法检测其凋亡效果及抗凋亡的分子机制。结果经MTT检测证明HMGN2能显著抑制Tca8113细胞的生长,通过Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和Western-blot检测证明HMGN2能使Tca8113的细胞形态发生改变,并且能使Tca8113细胞阻滞于细胞周期的S期,促进Tca8113细胞凋亡。结论 HMGN2可以促进人口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

九种中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外研究

目的 分别从温阳、益气、化痰、活血类中药里选择九种单味中药活性成分 ,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗肿瘤耐药效应。方法 采用MTT比色法 ,选择耐长春新碱的人口腔鳞状上皮癌细胞株 (KBv2 0 0 )为靶细胞 ,观察上述单味中药活性成分细胞毒与增敏效应。结果 桂皮醛、大豆甙元、金雀黄素、薯蓣皂苷对KBv2 0 0 细胞具有明显的抑制效应。结论 桂皮醛、大豆甙元、金雀黄素。