长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因(SNHG)22调控微小RNA(miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞(CAL-27、SCC-25和HSC-3),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组(未进行转染)、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数(PI)];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR-27b-3p的靶向作用关系。结果与癌旁组织比较,OSCC癌组织中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低(P<0.05);与HOK细胞比较,CAL-27、SCC-25和HSC-3细胞中SNHG22表达显著升高,miR-27b-3p表达显著降低,且SCC-25细胞中SNHG22与miR-27b-3p的表达与HOK细胞差异最大(P<0.05)。与Ctrl组比较,si-SNHG22组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著减少(P<0.05),miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05);与si-SNHG22组比较,si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组SCC-25细胞增殖率、PI、侵袭数和划痕面积愈合率均显著增加(P<0.05)。双荧光素酶实验显示SNHG22与miR-27b-3p存在靶向作用关系。结论SNHG22在OSSC中高表达,miR-27b-3p在OSSC中低表达,SNHG22可能通过海绵化miR-27b-3p促进SCC-25细胞增殖、侵袭和迁移,SNHG22/miR-27b-3p轴可能是OSCC一个新的诊断和治疗靶点。

淫羊藿苷对口腔鳞癌细胞系CAL27铁死亡的作用

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对人口腔鳞癌细胞系CAL27细胞铁死亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度ICA处理人口腔鳞癌细胞系CAL27,用CCK-8法检测细胞增殖情况以选取最佳浓度;用不同浓度铁死亡抑制剂处理CAL27细胞,用CCK-8法检测铁死亡抑制剂对细胞的毒性作用以选取最佳浓度;将CAL27细胞随机分为对照组、ICA组和ICA联合铁死亡抑制剂组。用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞铁死亡影响因子重链亚基溶质载体家族7成员11(solute vector family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH1)mRNA的表达情况;用蛋白印迹法(Western blotting)检测c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino terminal kinase,JNK)和p53蛋白(protein 53,p53)的表达情况。结果CAL27细胞增殖能力随着ICA和铁死亡抑制剂浓度的升高而降低(P<0.05);与对照组比较,ICA组CAL27细胞侵袭数量、细胞迁移数量、SOD、GSH、SLC7A11和GPX4 mRNA的表达水平降低,MDA和FTH1 mRNA、JNK和p53蛋白的表达水平升高(P<0.05);与ICA组比较,ICA联合铁死亡抑制剂组CAL27细胞侵袭数量、细胞迁移数量、SOD、GSH、SLC7A11和GPX4 mRNA的表达水平升高,MDA、FTH1 mRNA表达水平、JNK和p53蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论ICA对口腔鳞癌细胞CAL27增殖、侵袭和迁移能力有一定的抑制作用,可能是通过激活JNK/p53通路提高细胞内铁死亡相关因子水平,降低细胞抗氧化能力发挥作用的。

环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA Hsa_circ_0006948(circ_0006948)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ_0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为pc-NC组、pc-circ_0006948组、si-NC组以及si-circ_0006948组,取正常培养的细胞作为NC组。CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高(P<0.05),由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验。与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05);与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化(EMT)有关。

SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

探讨SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖和凋亡的应用效果。方法:选取我院2018年5月到2021年7月之间收治的患有口腔鳞癌患者癌组织及癌旁组织共计29例进行研究,并将CAL-27细胞分为si-NC组和si-SLC7A11-AS1组,以及si-SLC7A11-AS1+anti-miRNC组和si-SLC7A11-AS1+anti-miR-429组。全部采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测的方式,在SLC7A11-AS1和miR-429表达水平和平板克隆实验检测克隆形成细胞数,以及流式细胞术检测细胞凋亡率和Transwell检测细胞迁移数,甚至包括蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达和双荧光素酶报告实验验证SLC7A11-AS1和miR-429的靶向关系上的情况对比。结果:SLC7A11-AS1在口腔鳞癌中的表达水平较高,这意味着SLC7A11-AS1在CAL-27中克隆数降低,随之细胞凋亡概率上升能够促进口腔鳞癌中起着促进癌细胞的作用。SLC7A11-AS1加以抑制处理后,Bax、Bcl-2表达水平降低。结论:SLC7A11-AS1抑制表达后上调miR-429能够显著降低CAL-27的增殖,提高细胞凋亡和迁移率。

miR-222-3p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR检测口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞和正常口腔角质细胞株(hNOK)中miR-222-3p的表达,培养CAL-27细胞并分为对照组(NC组)、inhibitor NC组(转染阴性对照质粒)和miR-222-3p inhibitor组(转染miR-222-3p inhibitor)。分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化,蛋白质印迹法检测BAX、Bcl-2、MMP-2、N-cadherin及E-cadherin的表达。结果CAL-27细胞中miR-222-3p的表达水平显著高于hNOK细胞(P<0.05)。与inhibitor NC组和NC组相比,miR-222-3p inhibitor组CAL-27细胞的凋亡率显著升高,增殖、侵袭能力显著降低(P<0.05),且Bcl-2、MMP-2和N-cadherin蛋白表达水平显著降低,BAX和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-222-3p在CAL-27细胞中高表达,下调miR-222-3p可抑制CAL-27细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的:探讨IL-22/IL-22受体A1(IL-22RA1)通路在口腔鳞状细胞癌(OSCC)恶性进展中的作用及其机制。方法:利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平,采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系,通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达,用q PCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照(si NC)组和IL-22RA1敲减(siIL-22RA1)组OSCC细胞克隆形成及迁移能力的影响,WB法检测IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果:OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及预后不良(P<0.05)有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联,IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响(均P>0.05)。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力(均P<0.01),并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2信号分子;敲减OSCC细胞的IL-22RA1后,IL-22则无法发挥上述作用。结论:IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移,其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。

LncRNA HCP5调节miR-27b-3p/H2AFZ轴对口腔鳞状细胞癌增殖侵袭迁移的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合物P5(HCP5)通过调节微小RNA(miR)-27b-3p/H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭、迁移的影响。方法:收集2021年2月至2022年2月在本院行手术治疗的48例OSCC患者癌组织及邻近癌旁组织、OSCC细胞系(Tca-811、SCC-9、SCC-25、HN4)及人正常口腔角质形成细胞(hNOK),检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;取对数生长期Tca-811细胞,分为对照组、小干扰RNA阴性对照(si NC)组、干扰HCP5表达(si HCP5)组、si HCP5+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、si HCP5+miR-27b-3p抑制物(miR-27b-3p inhibitor)组。双荧光素酶验证LncRNA HCP5与miR-27b-3p、miR-27b-3p与H2AFZ的靶向关系;qRT-PCR检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;流式细胞仪及MTT法检测Tca-811细胞凋亡及增殖变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移变化;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、H2AFZ蛋白表达。结果:与hNOK细胞和癌旁组织比较,OSCC细胞和组织中LncRNA HCP5、H2AFZ mRNA表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。miR-27b-3p与LncRNA HCP5、H2AFZ均存在靶向关系。si HCP5组细胞凋亡率、cleaved caspase-3、miR-27b-3p表达较si NC组、对照组升高(P<0.05),OD570(24h、48h)、侵袭、迁移细胞数及CyclinD1、MMP-2、HCP5、H2AFZ表达下降(P<0.05);抑制miR-27b-3p表达逆转了干扰HCP5对Tca-811细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论:干扰LncRNA HCP5可通过靶向上调miR-27b-3p、抑制H2AFZ表达,进而抑制OSCC的增殖、侵袭、迁移。

新城疫病毒D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27机制的研究

目的探讨新城疫病毒(NDV)D90杀伤口腔鳞癌细胞系CAL-27的机制。方法 CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用0、12、24、36 h后用以Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测NDV D90对口腔鳞癌细胞系CAL-27细胞凋亡情况的影响,接种于24孔板中的CAL-27细胞用稀释10倍的D90病毒作用12 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色检测NDV D90对CAL-27细胞作用前后细胞形态学的变化;用稀释10倍的病毒与细胞分别共同孵育12、24、36 h,同时设置对照组。使用BCA蛋白测定试剂盒的裂解物中的蛋白质含量进行测定。免疫蛋白印迹法检测NDV D90作用CAL-27细胞后对凋亡相关蛋白表达量的影响。结果 NDV D90能引起细胞CAL-27的凋亡,并且凋亡率随着病毒作用的时间增加而升高[0 h,12 h,24 h,36 h的凋亡率分别为(3.68±1.50)%、(19.22±0.99)%、(82.80±0.74)%、(99.69±0.13)%];D90作用于CAL-27后细胞核出现凋亡的相关形态改变,如核固缩以及核碎裂;随着病毒作用时间的增加,细胞色素C蛋白表达水平升高,胱天蛋白酶3前体蛋白(procaspase-3)以及procaspase-9蛋白表达水平降低,procaspase-8蛋白表达水平没有明显变化,同时未检测到肿瘤坏死因子α蛋白的表达。结论 NDV D90毒株能引起人口腔鳞癌细胞系CAL-27的凋亡,且凋亡率呈时间依赖性;NDV D90引起CAL-27细胞凋亡主要是通过线粒体途径,死亡受体途径没有被激活或者作用非常小。

槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖凋亡等细胞生物学行为及p38/JNK MAPK信号通路的影响

目的:探讨槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p38/JNK MAPK信号通路的影响。方法:以体外培养的口腔鳞癌Tac8113细胞为研究对象,分别设置空白对照组,槲皮素低剂量组(25μmoL/L)、高剂量组(50μmoL/L)及阳性对照组(顺铂4μg/mL)。CCK-8法检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞增殖的影响;流式细胞仪检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞凋亡的影响;Transwell实验检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞迁移、侵袭的影响;WB法检测p38/JNK MAPK信号通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数、侵袭数及凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;空白对照组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组、阳性对照组p38、JNK蛋白表达差异不显著(P>0.05)。结论:槲皮素可以降低口腔鳞癌Tac8113细胞的增殖活力、迁移和侵袭数,诱导Tac8113细胞凋亡,这可能是通过激活p38/JNK MAPK信号通路实现的。

口腔鳞状细胞癌细胞周期因子p27 cyclin D1及CDK4的表达与意义

目的:从细胞周期调控的角度来探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)的发生、发展及预后和p27、cyclinD1和CDK4的关系。方法:采用免疫组织化学方法,检测了50例口腔鳞状细胞癌及10例正常口腔粘膜中p27、cyclinD1和CDK4蛋白表达的水平,然后用Spearman相关分析检验它们与临床病理学指标的关系以及它们三者之间的相关关系,用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线并进行生存分析,Cox比例风险模型作预后分析。结果:1)p27在所有正常口腔粘膜上皮均呈现高表达,而在口腔鳞状细胞癌组织表达降低,p27的低表达与临床分期、淋巴结转移有显著性相关关系。cyclinD1和CDK4在正常粘膜上皮呈现低水平表达,在口腔鳞状细胞癌组织中过表达。2)cyclinD1的表达与CDK4呈正相关(r=0.442,P=0.001);p27与CDK4的表达呈负相关(r=-0.384,P=0.006)。3)Kaplan-Meier生存分析显示p27高表达组(+)的各期的生存率均高于低表达组(-),cyclinD1染色(+)组的生存率低于(-)组。4)Cox比例风险模型分析结果显示p27蛋白表达水平,cyclinD1蛋白表达水平,淋巴结转移和临床分期分别是口腔鳞状细胞癌的独立预后指标。结论:口腔鳞状细胞癌组织中p27、cyclinD1和CDK4蛋白的异常表达说明它们均参与了口腔鳞状细胞癌的发生发展,且在这一过程中三者之间存在相互协同与制约关系。

FAK基因沉默对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖与迁移能力的影响

目的探讨运用RNA干扰技术沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖与迁移能力的影响。方法使用si RNA干扰技术瞬时转染构建FAK si RNA。将实验细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。运用q PCR和Western blotting法检测FAK m RNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞的增殖情况,Transwell小室法研究细胞的迁移能力。结果 q PCR和Western blotting实验结果显示,实验组细胞FAK m RNA和蛋白表达量明显低于空白对照组和阴性对照组(Pm RNA<0.01,P蛋白<0.05);MTT实验结果显示在48和72 h时,空白对照组和阴性对照组的吸光度值均明显高于实验组(P<0.01);Transwell实验结果显示实验组穿膜迁移细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论沉默FAK基因表达可有效抑制人舌鳞癌CAL-27细胞的增殖和迁移能力。

MicroRNA-27b通过靶向调控FZD7抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖

目的探讨microRNA-27b(miR-27b)对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响及其作用的分子生物学机制。方法 MTT方法检测细胞增殖水平;实时定量PCR方法检测miR-27b表达水平以及卷曲蛋白7(Frizzled7,FZD7)、cyclin D1和c-myc的信使RNA(mRNA)表达水平;Western blot方法检测FZD7的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因方法检测miR-27b与FZD7的靶向关系以及Wnt信号通路的活性。结果 miR-27b在口腔鳞状细胞癌细胞株中表达降低;过表达miR-27b可以显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖;miR-27b可以靶向FZD7并抑制FZD7的表达及其下游的Wnt信号通路。结论 miR-27b通过靶向抑制FZD7的表达来抑制口腔鳞状细胞癌细胞的增殖,其机制可能与抑制FZD7介导的Wnt信号通路的激活有关。

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达的影响。结果三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组(P<0.05),细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。

miR-30a-5p对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞的影响及分子机制

目的:探讨miR-30a-5p对人口腔鳞状细胞癌(OSCC) CAL-27细胞的增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响,并探讨其分子机制。方法:人OSCC CAL-27细胞转染后,设置为miR-30a-5p mimic组(miR-30a-5p的模拟物)、NC mimic组(阴性对照模拟物)、NC inhibitor组(阴性对照抑制剂)及miR-30a-5p inhibitor组(miR-30a-5p的抑制剂),同时设未转染CAL-27细胞为Control组;采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-30a-5p基因表达,采用Western blot实验检测各组细胞EMT上皮标志物E-cadherin和间质标记物N-cadherin的蛋白表达,采用3-(4,5二甲基噻唑-2)-2,5二苯基四氮唑溴盐(MTT)法、划痕实验及Transwell实验分别检测各组细胞的细胞活力、迁移能力和侵袭能力。结果:miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞miR-30a-5p表达较NC mimic组明显上调,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组表达明显下降(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞OD值较NC mimic组下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞的迁移率较NC mimic组明显下降,miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞侵袭数较NC mimic组明显下降(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组较NC inhibitor组上调(P <0. 05);miR-30a-5p mimic组CAL-27细胞EMT上皮标志物E-cadherin表达较NC mimic组明显上调、间质标志物N-cadherin的表达较NC mimic组明显下调(P <0. 01),miR-30a-5p inhibitor组E-cadherin表达较NC inhibitor组明显下调、N-cadherin表达较NC inhibitor组明显上调(P <0. 01)。结论:MiR-30a-5p可抑制OSCC CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与miR-30a-5p抑制CAL-27细胞EMT转化有关。

5-氟尿嘧啶对口腔鳞癌细胞株热休克蛋白27/70表达的影响

目的:为探讨热休克蛋白27和热休克蛋白70在口腔鳞状细胞癌化疗中的意义,本实验选用口腔鳞状细胞癌细胞株OSC-4作为研究对象,随机分组。实验组加100μg/mL5-氟尿嘧啶。方法:用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测HSP27和HSP70的表达。结果:OSC-4细胞经5-Fu处理后,MTT和流式细胞仪显示5-Fu抑制OSC-4细胞的存活率(P<0.05),并存在时间和剂量依赖。Western Blot结果显示HSP27和HSP70在OSC-4中均有表达,在OSC-4细胞中5-Fu能诱导HSP27和HSP70的表达(P<0.05)。HSP27和HSP70在不同口腔鳞状细胞癌细胞株中均有表达,表达有差异(P<0.05)。结论:5-Fu能诱导OSC-4细胞的凋亡,并呈现时间与剂量依赖;5-Fu能上调HSP27和HSP70的表达。

miR-7-5P在口腔鳞癌中表达及其调控CDK-10信号通路对细胞增殖、凋亡与周期的影响

目的 探索miR-7-5P在口腔鳞癌的表达及其调控CDK-10信号通路对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡与周期的影响。方法 收集癌旁组织和癌组织样本,免疫组化染色和PCR检测CDK-10和miR-7-5P的表达。SCC-25细胞作为体外模型,检测miR-7-5P对SCC-25细胞增殖、LDH及CDK-10等的影响。结果 在腔鳞癌患者中miR-7-5P呈低表达,CDK-10高表达,miR-7-5P与CDK-10成负相关性。miR-7-5p过表达可降低口腔鳞癌CDK-10和Bcl2蛋白表达水平,提高Bax、LDH、caspase-3/8/9水平,促进细胞凋亡。抑制MiR-7-5p表达可提高CDK-10和Bcl2蛋白表达水平,降低Bax、LDH、caspase-3/8/9水平,抑制细胞凋亡。结论 miR-7-5p能够通过调控CDK-10表达抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进凋亡,miR-7-5p对口腔鳞癌的诊断和治疗具有潜在的价值,提示miR-7-5p有希望成为口腔鳞癌分子标志物。

二烯丙基二硫对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖及凋亡的研究

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对口腔鳞癌CAL-27细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用。方法体外培养口腔鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度二烯丙基二硫对CAL-27细胞进行干预,并设立对照组,采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用比色法检测caspase-3活性的改变。结果倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞形态改变,细胞脱壁,变小、变圆,细胞膜皱缩。MTT结果显示,随着浓度的增加,时间的延长,二烯丙基二硫对CAL-27细胞的生长及增殖有显著的抑制作用,并且各实验组相比及实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜下观察到经Hoechst33342染色的凋亡细胞。实验组caspase-3活性较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论二烯丙基二硫体外能抑制CAL-27的细胞增殖,呈一定的时间及剂量依赖性,并且诱导细胞凋亡,caspase-3可能参与了细胞凋亡的调控。

敲低circ0001273抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨circ_0001273对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用,为口腔鳞癌的靶向治疗研究提供相关的研究基础。方法收集12例临床诊断为口腔鳞癌患者肿瘤标本及癌旁组织,qRT⁃PCR检测circ_0001273、circ_0018569和circ_0027152的表达,选取在癌及癌旁组织中表达差异最大的circ_0001273;在UM1及CAL27两种口腔鳞癌细胞株中使用siRNA敲低circ_0001273,以MTS、Transwell实验分别检测对UM1及CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果circ_0001273在12例口腔鳞癌组织中表达异常升高(P<0.05),在UM1及CAL27细胞中敲低circ_0001273后,UM1及CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论敲低circ_0001273可以抑制口腔鳞癌的增殖、迁移及侵袭。

槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的:探究槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响。方法:CCK-8试剂盒检测口腔鳞状细胞癌细胞(SCC-15)增殖情况;流式细胞术检测SCC-15细胞周期分布;Western blot检测CyclinD1/CDK复合体、p21/cip1、p27/kip1、p-GSK3β、GSK3β、p53和c-Myc蛋白表达;qRT-PCR检测SCC-15细胞p21/cip1和p27/kip1 mRNA表达;激光共聚焦显微镜检测SCC-15细胞中p21/cip1和p27/kip1蛋白亚细胞定位;放线菌酮蛋白合成抑制实验检测SCC-15细胞中p21/cip1和p27/kip1蛋白半衰期。结果:与对照组相比,槲皮素呈剂量依赖性(6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)抑制SCC-15细胞增殖(P<0.05),槲皮素在48 h对SCC-15细胞的IC 50为80.07μmol/L。与对照组相比,槲皮素(40μmol/L和80μmol/L)可显著升高SCC-15细胞中G 1/G 0期细胞比例,显著降低S期和G 2/M期细胞比例(P<0.05),呈剂量依赖性抑制CyclinD1/CDK复合体、p-GSK3β和c-Myc蛋白表达(P<0.05),促进p21/cip1和p27/kip1的mRNA和蛋白表达,促进GSK3β和p53的蛋白表达(P<0.05)。与对照组相比,槲皮素(80μmol/L)促进SCC-15细胞中p21/cip1蛋白由细胞质转移至细胞核(P<0.05),显著提高p21/cip1和p27/kip1蛋白生物半衰期(P<0.05),对p27/kip1蛋白的亚细胞定位无显著影响(P>0.05)。结论:槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性抑制口腔鳞状癌细胞增殖。

miR-127-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及Zwint-1基因表达的影响

目的探讨miR-127-3p调控Zeste white 10(ZW10)相互作用着丝粒蛋白1(Zwint-1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法体外培养OSCC细胞系PE/CA-PJ15、CAL27,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(NC组)、过表达miR-127-3p组(miR-127-3p-mimics组)。倒置荧光显微镜下观察转染效果;采用实时荧光定量PCR法检测miR-127-3p、Zwint-1 mRNA水平;MTT法检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测PE/CA-PJ15、CAL27细胞迁移能力;Transwell实验检测PE/CA-PJ15、CAL27细胞侵袭能力;免疫印迹法检测人增殖细胞核抗原(Ki-67),凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,侵袭及迁移相关蛋白E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及Zwint-1蛋白表达情况;应用TargetScan数据库预测miR-127-3p与Zwint-1靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果细胞转染成功;与NG组、NC组比较,miR-127-3p-mimics组PE/CA-PJ15、CAL27细胞miR-127-3p、增殖抑制率、E-cadherin、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),划痕治愈率、细胞侵袭数、Zwint-1 mRNA及其蛋白、Ki-67、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2蛋白表达显著减少或降低(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示Zwint-1是miR-127-3p的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系,且miR-127-3p可负向调控Zwint-1表达。结论上调miR-127-3p表达可靶向下调Zwint-1表达,并抑制OSCC细胞增殖、侵袭及迁移。