大黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113抑制作用

目的观察大黄素对口腔鳞癌Tca8113细胞的抑制用研究。方法用20μmol/ml,40μmol/ml,60μmol/ml,80μmol/ml,100μmol/ml浓度的大黄素作用于口腔鳞癌Tca8113细胞48h,倒置显微镜下观察细胞的增殖情况,电镜下观察细胞的形态变化,并判定凋亡细胞。荧光染色进一步观察细胞的凋亡情况。结果倒置显微镜下观察到,随着大黄素浓度的升高,细胞的增殖能力随之下降,电镜观察到凋亡细胞,AO/EB染色亦观察到,随着大黄素浓度的增高,处于晚期凋亡的细胞随之增多。结论大黄素可抑制口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖。

雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值。方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况。结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-效关系;较小浓度的雷公藤内酯醇即可产生较好的抑制效果,作用小于7 d时与顺铂相当,7 d时0.001 mg.L-1抑制率达60%,0.01 mg.L-1抑制率达90%,显著优于顺铂(P<0.05);1、3、5 d作用点时,在大于0.1 mg.L-1时顺铂效果优于雷公藤内酯(P<0.05),7 d时两者差异无统计学意义;各个作用点雷公藤内酯醇的50%抑制浓度均小于顺铂。结论雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113有明显的抑制作用,呈量-效、时-效关系,且在较低浓度和较长时间作用下其抑制率明显高于顺铂。

甘草甜素促进口腔鳞状细胞癌细胞系Tca8113的凋亡

目的探讨甘草甜素(GL)对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞系凋亡的作用及相关机制。方法用不同浓度甘草甜素(0、10、20、40与80μmol/L)孵育Tca8113细胞后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞计量术Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡; JC-1染色法观察线粒体膜电位;免疫印迹检测线粒体及胞质中cytochrome C (cyt C)蛋白表达。结果与对照组相比,甘草甜素成浓度依赖性抑制Tca8113存活率(P<0. 05);诱导Tca8113细胞的凋亡(P<0. 05); Tca8113细胞的线粒体膜电位显著下降(P<0. 05);细胞中的Cyt C由线粒体向胞质转移(P<0. 05)。结论甘草甜素可能通过线粒体凋亡通路促进Tca8113细胞的凋亡。

不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

X线对舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度影响的动态观察

【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h至3h间,不同照射剂量的细胞RTL值均有一定程度上升;5h时,除2Gy组外,其它各照射剂量组的RTL值均下降。【结论】经X线照射后,Tca8113细胞端粒明显缩短。端粒缩短可能是放射损伤的机制之一。

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。

人口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞过表达WWOX基因的基因表达谱分析及WWOX基因的抑癌作用机制

目的:分析人口腔鳞状细胞癌(OSCC)Tca8113细胞过表达包含WW域的氧化还原酶(WWOX)基因的基因表达谱变化,探讨WWOX基因的抑癌作用机制。方法:Tca8113细胞分为WWOX基因过表达组和对照组。采用携带WWOX基因的pGV287-LV-WWOX慢病毒颗粒和携带空载体的pGV287-LV慢病毒颗粒分别感染2组Tca8113细胞。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blotting法检测2组Tca8113细胞中WWOX mRNA和蛋白表达情况。采用基因芯片技术筛选差异表达基因并进行生物学分析。采用定量PCR法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的差异表达基因的mRNA相对表达水平。结果:慢病毒感染后,WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX mRNA相对表达水平较对照组明显升高(P<0.05),WWOX基因过表达组Tca8113细胞中WWOX蛋白表达水平升高。基因芯片筛选出差异倍数(FC)1.5倍以上的基因共347个,其中表达上调171个,表达下调176个。生物信息学分析显示这些基因分布于癌症、p53信号、MAPK信号和白细胞介素2 (IL-2)等多条信号传导通路。WWOX基因过表达组MAPK信号通路中的丝裂原活化蛋白激酶2 (MAP2K)、孤核受体4A1 (NR4A1)、双特异性磷酸酶5 (DUSP5)和双特异性磷酸酶6 (DUSP6)mRNA相对表达水平较对照组明显升高(P<0.05),而成纤维生长因子受体2 (FGFR2)mRNA相对表达水平较对照组明显降低(P<0.05)。结论:WWOX基因过表达导致Tca8113细胞的基因表达谱发生变化,WWOX基因的抑癌作用机制与调节MAPK信号途径的多个基因表达有关联。

紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抑制作用

目的:探讨紫杉醇对舌鳞癌细胞株Tca8113的抗癌作用。方法:将不同浓度的紫杉醇作用于Tca8113细胞,用四亚基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法检测其作用的时间效应及剂量效应。结果:紫杉醇对体外培养的Tca8113细胞有明显的抑制作用,在一定时间和剂量范围内,其抑制作用呈时间、剂量依赖性。结论:紫杉醇对舌鳞癌Tca8113细胞有明显的抑制作用。

姜黄素对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨姜黄素对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)Tca8113细胞增殖及凋亡的影响,并研究其作用机制。方法体外培养Tca8113细胞,不同浓度姜黄素(0、25、50、100μmol/L)处理24、48h;PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002、激动剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)姜黄素、IGF-1联合姜黄素处理24、48h。分别采用MTT法和流失细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;采用Western blot和RT-PCR法检测细胞PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平。结果姜黄素可显著抑制OSCC Tca8113细胞的增殖并诱导凋亡,且具有一定的剂量和时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);同时,姜黄素下调Tca8113细胞中的PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。IGF-1处理促进了Tca8113细胞的增殖、降低了凋亡率,同时增加PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与IGF-1组相比,IGF-1联合姜黄素组可降低细胞的活性、提高细胞的凋亡率,降低PI3K、p-AKT及mTOR的蛋白及mRNA表达水平(P<0.05)。结论姜黄素可抑制OSCC Tca8113细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达有关。

那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探究那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞随机分为空白对照组、奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组。CCK-8法检测各组药物对Tca8113细胞的存活率;Hoechst33342染色荧光显微镜下观察凋亡形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PARP、Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平。结果奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Tca8113细胞存活率较空白对照组低(P<0.05),联合用药组较奥沙利铂组、那可丁组低(P<0.05)。Hoechst33342染色法结果显示:奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组处理后均使人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞发生凋亡特征性改变。奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Tca8113细胞凋亡率较空白对照组高(P<0.05),联合用药组较奥沙利铂组、那可丁组高(P<0.05)。奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Bax、PARP、Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-3的蛋白表达较空白对照组高(P<0.05),而Bcl-2的蛋白表达较空白对照组低(P<0.05),联合用药组Bax、PARP、Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-3的蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组低(P<0.05)。结论那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的生长具有协同抑制作用,并促其凋亡,其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。

P75神经营养因子受体在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌中p75神经营养因子受体(p75NTR)的表达,探讨p75NTR作为预测口腔鳞状细胞癌预后指标及将其作为肿瘤干细胞标志物的可能性。方法:采用SP免疫化学方法,对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113及43例手术切除口腔鳞状细胞癌标本进行p75NTR表达的检测,另外选取5例癌旁组织及8例正常组织作为对照。应用SPSS16.0软件包,采用行×列表资料的χ2检验进行统计学分析。结果:p75NTR在Tca8113细胞膜中阳性表达。43例口腔鳞状细胞癌组织中,p75NTR阳性表达33例,在癌旁组织及正常对照组中没有表达。p75NTR均定位于细胞膜上,于癌巢中分散分布,且常有聚集性分布趋势。p75NTR表达与临床分期(P<0.05)及有无淋巴结转移(P<0.05)相关。结论:p75NTR的表达可以作为预测口腔鳞状细胞癌预后的指标,但还不能将其单独作为肿瘤干细胞的标志物,其在肿瘤发生、发展中的作用及机制仍需进一步研究。

E-Cadherin和CD44v6对Tca8113细胞系侵袭性影响的实验研究

目的通过检测粘附分子在立体胶原凝胶培养系统中对口腔黏膜鳞状细胞癌(SCC)细胞侵袭性的影响,加深了解口腔癌细胞侵袭和转移的可能机制,并评估其作为口腔癌预后判断指标的可行性。方法应用免疫组织化学方法检测粘附分子E-cadherin(E-cad)和CD44v6在舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的表达;同时在体外建立鼠尾胶原凝胶三维立体侵袭系统,在此系统中观察粘附分子对Tca8113细胞侵袭胶原能力的影响。结果免疫组织化学检测显示,E-cad在Tca8113细胞有阳性表达,而CD44v6表达阴性;胶原凝胶侵袭实验表明:E-cad可以有效地减少Tca8113细胞在胶原凝胶中的浸润细胞数和程度(0.01<P<0.05)。结论虽然粘附分子只是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素之一,但体外实验表明:E-cad具有抑制肿瘤细胞胶原侵袭的作用,提示E-cad有可能成为一种较好的临床评判口腔黏膜鳞癌预后的有用指标。

平阳霉素抑制舌鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制

目的:探讨平阳霉素体外抑制口腔鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制。方法:用不同浓度的平阳霉素培养人舌鳞癌细胞系Tca8113不同时间,以MTT法和荧光显微镜观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:MTT法和荧光观察显示:不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异(P<0.05),浓度越高,抗增殖效应越明显;随药物作用时间延长,肿瘤细胞生长受抑制递增(P<0.05)。流式细胞术显示:凋亡率随药物浓度增加而增加,但与作用时间长短无关。低浓度药物无法诱导细胞凋亡。结论:平阳霉素在体外能明显抑制人舌鳞癌细胞系Tca8113生长,并具有浓度和时间依赖性。其抗癌机制可能包括细胞毒作用和启动程序化死亡信号等。

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。

miR-126在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-126在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系,探讨其过表达对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响。方法:选取2016年6月至2018年6月在郑州大学第一附属医院手术治疗的62例OSCC患者的癌及癌旁组织标本,以及人舌鳞癌细胞株Tca8113和人口腔角质细胞株HOK,用qPCR法检测癌组织及细胞中miR-126的表达,分析miR-126表达与患者临床病理特征和预后的关系。利用脂质体转染技术,将miR-126 mimics、miR-NC质粒分别转染进Tca8113细胞,分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell小室法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测凋亡、迁移和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:miR-126在OSCC组织和Tca8113细胞中的表达水平明显低于癌旁组织和HOK细胞(均P<0.01)。miR-126表达与OSCC患者的TNM分期、淋巴结转移相关联(均P<0.05),miR-126高表达患者的总生存率显著高于低表达组(P<0.05)。转染miR-126 mimics后,Tca8113细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05或P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01);细胞中Bcl-2、N-cadherin和vimentin表达水平明显降低(均P<0.01),Bax和E-cadherin表达水平明显升高(均P<0.01)。结论:miR-126在OSCC组织及Tca8113细胞中低表达,上调miR-126可抑制Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

nm23-H1基因对Tca8113的转移能力及化疗敏感性影响的实验研究

目的 通过nm2 3_H1的转化及导入Tca81 1 3细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察nm2 3_H1对Tca81 1 3细胞株侵袭转移能力的影响。方法 利用基因转化技术 ,制备高纯度的nm2 3_H1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的转染技术 ,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术 ,检测转染前后的nm2 3_H1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A (NDPKA)的表达。利用transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。MTT法观察nm2 3_H1对Tca81 1 3化疗敏感性影响。结果 使用重组的pCMV_Neo_Bam真核表达载体 ,将nm2 3_H1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。Tca81 1 3细胞株nm2 3_H1基因转染前后表达水平有明显差异 ,转染后Tca81 1 3细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低 ,转染前后Tca81 1 3细胞株对阿霉素 (ADM)、5_氟尿嘧啶 (5_FU)、甲氨喋呤 (MTX)的化疗敏感性无显著差异 ,转染后Tca81 1 3细胞株对顺铂 (CDDP)明显增敏。结论 nm2 3_H1对Tca81 1 3细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 ,nm2

VEGF-C在人舌鳞癌细胞株TCa8113的表达及过表达细胞株的建立

目的 研究VEGF -C在人舌癌发生发展中的作用 ,检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌鳞癌细胞株TCa8113中的表达 ,建立高表达VEGF -C的细胞株TCa8113 /VEGF -C。方法 运用RT -PCR和免疫组化法分别检测VEGF -CmRNA和蛋白在人舌癌细胞株中的表达 ,通过脂质体转基因的方法筛选建立过表达VEGF-C的细胞株。结果 TCa8113中检测到VEGF -C的表达 ,筛选建立的细胞株高表达VEGF -C。结论 TCa8113能转录VEGF -CmRNA ,并在胞浆中翻译表达VEGF -C蛋白 ,但是表达较弱 ;

原花青素提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制研究

目的探讨原花青素(grapeseedproanthocyanidins,GSP)提高人舌癌细胞系放射敏感性及机制。方法2019年3月至2020年2月,将对数期生长的人舌癌Tca8113细胞分为对照组(TcaCON),Tca8113细胞加10 mg/LGSP组(TcaGSP-10 mg/L)、Tca8113细胞加20 mg/LGSP组(TcaGSP-20 mg/L)、Tca8113细胞照射组(TcaIR)、Tca8113细胞照射加10 mg/LGSP组(TcaIR+GSP-10 mg/L)、Tca8113细胞照射加20 mg/LGSP组(TcaIR+GSP-20 mg/L)。MTT法检测加入不同浓度GSP对舌癌细胞Tca8113增殖的影响;流式细胞术检测6 MVX线直线加速器照射后(6 Gy)GSP对Tca8113细胞凋亡的影响;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测在加入不同浓度GSP作用下对照射后Tca8113细胞微小RNA(miR)-124表达的影响;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测加入不同浓度GSP作用下对照射后Tca8113细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和胱天蛋白酶-9(caspase-9)蛋白水平的影响。结果MTT法结果显示,TcaIR组、TcaIR+GSP-10 mg/L组及TcaIR+GSP-20 mg/L组Tca8113细胞存活率分别为(63.21±2.97)%、(41.19±4.33)%及(19.61±2.51)%,GSP加强了照射后对人舌癌Tca8113细胞的抑制,且随药物浓度的增大,抑制效果增强(F=126.30,P<0.001);流式细胞术结果显示,TcaIR组、TcaIR+GSP-10 mg/L组及TcaIR+GSP-20 mg/L组Tca8113细胞凋亡率分别为(7.62±0.27)%、(9.61±0.42)%及(17.50±0.37)%,GSP显著提高了照射后Tca8113细胞的凋亡率(F=55.77,P=0.001);qRT-PCR结果显示,TcaIR组、TcaIR+GSP-10 mg/L组及TcaIR+GSP-20 mg/L组Tca8113细胞miR-124的表达水平分别为(1.43±0.29)、(2.64±0.45)及(3.81±0.44),照射给药组(加10 mg/LGSP组、加20 mg/LGSP组)Tca8113细胞miR-124的表达有明显上调(F=26.54,P=0.001);蛋白质印迹法结果显示,与单纯照射组[Bcl-2:(0.77±0.25),caspase-9:(1.97±0.33)]相比,照射给药组[10 mg/LGSPBcl-2及caspase-9分别为(0.43±0.23)、(2.58±0.43),20 mg/LGSPBcl-2及caspase-9分别为(0.31±0.17)、(2.94±0.52)],Bcl-2表达明显下调(F=7.10,P=0.006),而caspase-9的表达明显上调(F=7.67,P=0.005)。结论GSP可能通过上调miR-124的表达和增强细胞凋亡提高舌癌Tca8113细胞的放射敏感性。