ICAM-1和LFA-1单抗对口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞杀伤活性的影响

目的 研究ICAM_1 LFA_1单抗阻断对口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)对自体肿瘤细胞杀伤活性及分泌TNF_α的影响。方法 从 15例口腔鳞癌组织中分离TIL并培养 ,用流式细胞术检测新鲜分离和激活的TIL细胞上ICAM_1和LFA_1的表达水平 ;比较用ICAM_1 LFA_1单抗阻断前后TIL对自体肿瘤细胞杀伤活性及产生TNF_α水平的影响。结果 激活的TIL较新鲜分离的TIL细胞ICAM_1和LAF_1的表达显著增加 (P <0 0 5 ) ;阻断ICAM_1,TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性无显著改变 ;阻断ICAM_1和LAF_1后 ,TIL分泌TNF_α无显著差异 (P >0 0 5 ) ,但TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性显著降低 (P <0 0 5 )。结论 anti_LFA_1单克隆抗体 (McAb)

NF-κB/P65在食管鳞癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞中表达的临床病理意义

目的探讨NF-κB/P65分别在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TILs)中的表达对患者预后的意义。方法回顾性收集80例ESCC的临床病理资料,免疫组化染色法检测NF-κB/P65分别在ESCC细胞和TILs中的表达,分析癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库中NF-κB/P65在ESCC中的功能。结果ESCC细胞中NF-κB/P65表达阳性率高于正常鳞状上皮,非角化型鳞癌细胞中高于角化型鳞癌,与有丝分裂数呈正相关,癌细胞中NF-κB/P65阳性表达率高的患者预后差(P<0.05)。ESCC中TILs在临床1期高于临床2、3期,与癌灶大小呈负相关(P<0.05)。ESCC中NF-κB/P65在癌周和癌内TILs中的表达与TILs的量呈正相关,癌周TILs中NF-κB/P65表达阳性率高于癌内TILs,NF-κB/P65阳性表达率在原位癌癌周TILs中明显高于浸润性癌周TILs,癌内和癌周TILs中NF-κB/P65阳性表达率高的患者预后较好(P<0.05)。生物信息学分析显示NF-κB/P65与DNA修复、上皮间质转化、基质形成、炎性反应和IL-10抗炎信号通路相关因子呈正相关,与T淋巴细胞呈负相关(P均<0.05)。结论NF-κB/P65在ESCC细胞中的高表达可能促进癌组织的发生进展,在ESCC中,TILs的高表达对ESCC的进展可能具有抑制作用,NF-κB/P65可能分别通过不同的信号通路和分子,影响其在癌细胞和TILs中的不同作用。

口腔鳞癌细胞FasL表达对肿瘤浸润淋巴细胞及癌细胞凋亡的影响

目的研究口腔鳞癌细胞FasL表达及其对癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)凋亡的影响。方法38例口腔鳞癌为实验组,10例正常口腔黏膜为对照组。采用免疫组织化学方法和末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位末端标记技术,观察癌组织FasL表达,计算TIL和癌细胞的凋亡指数,观察癌细胞FasL表达与TIL及癌细胞凋亡的关系。结果FasL在正常口腔黏膜不表达,在鳞癌组织中表达明显上调(P<0.05),FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关(P>0.05)。口腔鳞癌细胞FasL表达阳性组癌细胞凋亡指数明显低于FasL表达阴性组,同时TIL的凋亡指数高于FasL表达阴性组(P<0.05),口腔鳞癌细胞凋亡指数与TIL凋亡指数呈负相关(r=-0.72,P<0.05)。结论口腔鳞癌细胞可能通过上调表达FasL诱导TIL的凋亡,间接地使癌细胞凋亡下调而保护了自己,是口腔鳞癌组织免疫反攻击的体现。

免疫化疗对口腔鳞癌浸润T淋巴细胞及其亚群的影响

应用ABC免疫组化技术，检测口腔鳞癌患者接受免疫化疗（S－PVP）和单纯化疗（PVP）治疗前后肿瘤组织内CD3+、CD4+、CD3+和HLA－DR+细胞相对值，比较不同的诱导治疗方案对局部细胞免疫反应的影响．结果显示：S－PVP组治疗前后CD3+、CD4+、CD3+和HLA－DR+细胞分别为65．65、3660、35．93、54．04．和129．26、74．77、38．86、79．64。治疗后CD3+、CD4+细胞较治疗前明显增加（P＜0.05）．PVP组治疗前后CD3+、CD4+、CD3+和HLA－DR+细胞相对值无显著性差异．结果表明，S－PVP免疫化疗可使原发病杜内的T淋巴细胞数量增加，而单纯PVP化疗时局部细胞免疫反应的影响不甚明显。

局部注射IL-2联合化疗对口腔鳞癌浸润淋巴细胞的影响

目的 评价IL_2局部注射联合化疗对口腔鳞癌局部免疫反应的影响。方法 34例T3、T4期口腔鳞癌患者随机分成 2组接受术前治疗 ,其中 2 3例行免疫化疗 (IL_2局部注射合并PVP化疗 ) ,11例行单纯化疗。比较2组患者治疗前后肿瘤浸润T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的变化。结果 免疫化疗组治疗前后CD4 + ,CD8+ ,CD2 0 + 相对值分别为 36 96 ,35 6 5 ,2 8 6 5和 5 6 6 1,38 5 2 ,38 70。治疗后CD4 + ,CD2 0 + 细胞数较治疗前明显增加(P <0 0 1)。单纯化疗组治疗前后CD4 + ,CD8+ ,CD2 0 + 细胞数均无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 IL_2局部注射联合化疗对增强口腔鳞癌患者局部免疫功能具有重要意义。

细胞黏附分子-1和淋巴细胞功能相关抗原在口腔鳞癌中的表达及其临床意义

口腔鳞癌（OSCC）是颌面部常见的恶性肿瘤,在全身系统常见恶性肿瘤中居第6位[1].近年来,OSCC患者术后生活质量有所提高,但5年生存率并没有显著改善[1,2].浸润和转移是影响恶性肿瘤患者预后的主要因素.研究证实,肿瘤细胞与宿主微环境中众多间质细胞的密切联系推动了肿瘤的浸润和转移,黏附因子在其中发挥重要作用.细胞黏附分子1 （ICAM-1）是免疫球蛋白超家族中的一种跨膜糖蛋白,它通过介导免疫细胞与肿瘤细胞之间的黏附与信号转导在多种恶性肿瘤中发挥重要作用[3,4].整合素αL和β2是ICAM-1的受体,它也被称为淋巴细胞功能相关抗原（LFA-1）,是整合素家族重要成员之一,特异表达于白细胞,可通过增加细胞迁移和黏附能力,促进多种恶性肿瘤的浸润和转移[5].但ICAM-1与LFA-1的表达与口腔鳞癌的发生及进展是否相关目前鲜见报道.

小鼠肿瘤浸润淋巴细胞联合放疗对小鼠宫颈癌U_(14)的治疗作用

利用Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ实验室建立的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）制备方法对小鼠宫颈癌ＴＩＬ进行分离培养，在建立小鼠宫颈癌Ｕ１４移植瘤的基础上，用ＴＩＬ联合局部放疗治疗，观察抗瘤作用。结果发现，小鼠ＴＩＬ及放疗对小鼠宫颈癌Ｕ１４均有较好的抑制生长作用，二者联合使用，其抑瘤作用更强，Ｅ／Ｏ值为１．１。提示，ＴＩＬ治疗与放疗存在相加关系。

口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞高分辨染色体研究

采用双同步化制备高分辨染色体技术对20例口腔鳞癌患者及20例对照组健康者外周血淋巴细胞染色体的数目和结构进行了观察分析。结果表明:口腔鳞癌患者染色体数目和结构畸变率均显著性高于对照组(P<0.01)。聚类分析提示,染色体数目畸变多见于 D,E 和 G 组,染色体结构畸变多见于 A组,最常見的染色体结构畸变为染色体和染色单体断裂,在某些病例还观察到一些异常染色体。提示:口腔鳞癌患者存在全身染色体不稳定性,同时讨论了口腔鳞癌患者外周血淋巴细胞染色体畸变的意义。

口腔鳞癌转移淋巴结淋巴细胞的增殖及杀伤活性

:【目的】观察口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞和转移淋巴结淋巴细胞 ,哪一种更适于作过继免疫治疗。【方法】从 15例口腔鳞癌原发灶及其中 5例转移灶中分离肿瘤浸润淋巴细胞和转移淋巴结淋巴细胞 ,体外培养 ,观察两种来源的淋巴细胞增殖能力 ;用3H -TdR 4h释放法对 5例口腔鳞癌的肿瘤浸润淋巴细胞和转移淋巴结淋巴细胞对自体肿瘤杀伤活性进行比较。【结果】转移淋巴结淋巴细胞较肿瘤浸润淋巴细胞扩增高峰延迟 1周 ,转移淋巴结淋巴细胞培养 5周后仍显示强有力的扩增潜力。 3周时肿瘤浸润淋巴细胞对自体肿瘤的杀伤活性较转移淋巴结淋巴细胞强 (P <0 0 2 ) ,分别为 35 %和 2 3 % ;4周时转移淋巴结淋巴细胞对自体肿瘤的杀伤活性大于肿瘤浸润淋巴细胞 (P <0 0 2 ) ,分别为 5 3 %和 40 %。【结论】在口腔鳞癌患者的过继免疫治疗中 。

过继性T细胞疗法在头颈部鳞癌中的研究进展

过继性T细胞疗法(adoptive T cell therapy,ACT)是一种高度个性化的抗肿瘤治疗方法,临床研究正在迅速发展。研究表明,ACT疗法可以通过增加T细胞数量,增强对肿瘤组织的特异性和反应性,从而克服肿瘤免疫缺陷抑制的产生。ACT疗法目前有3种主要模式:肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)和T细胞受体工程化T细胞(TCR-T)治疗。本文对ACT疗法的分类及研究进展进行综述,包括TILs、CAR-T、TCR-T以及基于类器官共培养的过继性T淋巴细胞免疫治疗,探讨ACT作为头颈部鳞癌治疗方式的应用前景。

肿瘤的浸润方式与口腔鳞癌恶性程度

在评价肿瘤的恶性程度及预后方面,有很多临床组织病理学指征,其中,肿瘤的浸润方式这一组织学指征越来越受到人们的重视。本文将肿瘤的浸润方式与口腔鳞癌的恶性程度和预后间的关系,以及它与其他临床组织病理学指征间的关系作一综述。并强调指出肿瘤的浸润方式是判断口腔鳞癌恶性程度的一个重要指征。

4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型肿瘤免疫中的作用

目的:探索建立人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型,评价4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型肿瘤免疫中的作用。方法:SCID鼠右背部皮下注射5×106(0.2 mL)Tca8113细胞。成瘤后,尾静脉注射anti-asialo-GML多抗,随机分为4组,第①组为对照组,不给予成瘤小鼠免疫重建,第②组给予成瘤小鼠免疫重建,第③组给予成瘤小鼠免疫重建+含有空载体的腺病毒做肿瘤内注射,第④组给予成瘤小鼠免疫重建+含有4-1BBL基因的腺病毒做肿瘤内注射。第②、③、④组小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞3×107(0.5 mL),第①组腹腔注射0.5 mL1640培养基。每周记录各组小鼠的成瘤情况,免疫重建后,第2、7周取鼠血,用ELISA法测定人IgG含量。小鼠处死后,比较各组小鼠体重及肿瘤、脾脏的重量。RT-PCR检测4-1BBL基因在瘤体内的表达,HE染色检测肿瘤及脾脏生长情况。结果:模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期12～18 d。免疫重建后第2、7周时人口腔癌PBL-SCID嵌合组小鼠血中人IgG分别达71.8μg/mL、136.9μg/mL。免疫重建及转染4-1BBL基因组小鼠,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01)。RT-PCR证明4-1BBL基因在瘤体内充分表达,冰冻切片HE染色见肿瘤生长、脾脏有大量淋巴细胞浸润。结论 :SCID小鼠皮下注射口腔鳞癌细胞、腹腔注射人淋巴细胞,可建立人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型,经腺病毒转染4-1BBL基因后,可显著提高宿主对瘤体的抑制作用。

口腔鳞癌Th1/Th2平衡漂移中IL-4、IL-10、TGF-β表达与肿瘤发展关系探讨

目的探讨口腔鳞状细胞癌Th1/Th2平衡漂移中IL-4、IL-10、TGF-β表达与肿瘤发展的关系。方法采用免疫组织化学的方法对49例口腔鳞癌标本进行IL-4、IL-10、TGF-β染色,观察肿瘤不同区域IL-4、IL-10、TGF-β的分布情况,同时利用HIPAS100图象分析软件获取各指标表达水平灰度值,综合分析3种指标的表达水平与口腔鳞癌发展的关系。结果肿瘤细胞以及部分间质浸润淋巴细胞表达IL-4、IL-10、TGF-β,3种指标在肿瘤组织中的阳性表达有差别,中央区阳性细胞较多,呈现高水平表达,肿瘤浸润前沿内阳性细胞较少,表达水平明显降低,两区域各指标的表达水平差异有统计学意义(P<0.05);IL-4在口腔鳞癌的表达水平与细胞分化、淋巴结转移、脉管内癌栓密切相关(P<0.05);IL-10在口腔鳞癌的表达水平与临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05);TGFβ在口腔鳞癌的表达水平与口腔鳞癌的体积、淋巴结转移、脉管内癌栓密切相关(P<0.05);肿瘤中央区IL-4、IL-10、TGF-β表达水平之间两两密切相关(IL-4、IL-10间r=0.6617,P<0.05,IL-10、TGF-β间r=0.8862,P<0.05,IL-4、TGF-β间r=0.5731,P<0.05),肿瘤浸润前沿组织中IL-4、IL-10表达存在明显相关(r=0.7529,P<0.05)。结论口腔鳞癌及其间质中浸润淋巴细胞与肿瘤相互作用使Th1/Th2平衡向Th2漂移,肿瘤处于免疫抑制状态,并且可能是导致肿瘤细胞更具侵袭性,远处淋巴结转移的关键因素。

肺鳞癌三级淋巴结构特征及其对预后的影响

背景 肿瘤微环境内三级淋巴结构(tertiary lymphoid structure,TLS)具有招募、活化和增殖T淋巴细胞、B淋巴细胞的功能,是肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte, TIL)的重要来源,已被证明与多种癌症的预后有关。目的 探究肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)患者组织内TLS特征及其对预后的影响。方法 回顾性分析2010-2022年解放军总医院和解放军第一四八医院42例经根治性手术切除且病理确认LUSC患者的临床资料和病理切片,分析LUSC病理组织切片TIL和TLS特征与LUSC临床病理特征的关系及预后。结果 42例中男性40例,女性2例,中位年龄65(范围:50~81)岁;未经新辅助治疗24例,接受新辅助免疫治疗18例。QuPath软件检测发现:新辅助免疫治疗患者相比未经新辅助治疗患者的TLS所含免疫细胞显著增多。TLS与临床指标关系分析中发现:新辅助治疗组较未经新辅助治疗组的TLS密度、圆形/椭圆形TLS密度以及最大TLS面积更高;N分期不同,圆形/椭圆形TLS密度不同,高细胞密度TLS密度不同;年龄越大,最大TLS面积更大;差异均有统计学意义(P<0.05)。经新辅助免疫治疗的LUSC患者免疫应答分析显示:缓解深度≥60%患者较缓解深度<60%患者TIL密度、圆形/椭圆形TLS密度、TLS中位面积、低细胞密度TLS密度、非规则TLS密度更高,差异均有统计学意义(P<0.05)。未经新辅助治疗组22例患者生存分析显示,圆形/椭圆形TLS密度高组相较于密度低组具有相对更好的预后[中位总生存期(median overall survival,m OS):53.5个月vs 25.0个月,P=0.069],最大TLS面积高组相较于面积低组具有相对更好的预后[mOS:50.0个月vs 25.0个月,P=0.074],P值接近0.05。结论 接受新辅助免疫治疗者较未接受者、免疫治疗应答好者较应答差者具有更高的TLS特征,TLS密度、圆形/椭圆形TLS密度和最大TLS面积高可能预示预后良好。

舌鳞癌隐匿性颈淋巴结转移与临床病理相关因素的关系

背景与目的:舌鳞癌的某些临床、组织病理学特征与隐匿性颈淋巴结转移密切相关。本研究旨在探讨舌鳞癌隐匿性颈淋巴结转移与原发灶临床和病理的相关性。方法:选择1988～1996年间在我院治疗、有隐匿性颈淋巴结转移的舌鳞癌患者35例;另选择同期无颈淋巴结转移的舌鳞癌患者35例,在显微镜下测量肿瘤浸润深度、评定组织病理学参数。结果:70例cN0舌鳞癌中,大体形态为浸润加溃疡型、浸润型、溃疡型和外生型4组的隐匿性颈淋巴结转移率分别为70.37%、41.67%、40.00%和27.27%;T1、T2和T43组分别为44.00%、43.48%和62.64%;肿瘤浸润深度<4mm、4～7.9mm和≥8mm3组的隐匿性颈淋巴结转移率分别为14.29%、61.54%和88.89%;癌周淋巴细胞反应“+”、“++”和“+++”3组分别为73.68%、58.62%和18.18%;脉管侵犯和无脉管侵犯两组分别为85.71%和46.03%;病理为高、中和低分化3组分别为52.63%、42.31%和66.67%;浸润方式为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型4组分别为40.9%、50.0%、52.0%和80.0%。单因素分析显示原发肿瘤的大体形态、肿瘤浸润深度、癌周淋巴细胞反应程度和脉管侵犯等参数与舌鳞癌隐匿性颈淋巴结转移的相关性有统计学意义(P<0.05),而T分期、病理分化程度和浸润方式等参数与隐匿性颈淋巴结转移的相关性无统计学意义(P>0.05);

口腔癌TIL的表型及细胞毒活性测定

作者在成功地建立了口腔癌TIL的分离、培养方法的基础上,采用单抗致敏的红细胞花环试验和H^3-TDR释放法,对10例口腔癌TIL的表型及功能特征进行了动态分析。结果发现新分离TIL中CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+较低,体外培养后,TIL中各亚群均有增加,但以CD_3^+、CD_8^+增加为主;新分离TIL的NK和LAK活性分别为10％和10.5％,随体外培养时间延长,其细胞毒活性增强,在4周时达高峰。NK和LAK活性分别为50％和44.8％。4周后,其活性开始降低。提示口腔癌TIL的临床应用时机为培养4周左右。

口腔癌肿瘤浸润淋巴细胞对人舌癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨在体外具有强大细胞毒活性的口腔癌浸润淋巴细胞在体内的抑瘤效果以及化疗药物环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｙ）与肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＴＩＬ）联合应用治疗口腔癌的可能性。方法将舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３注入裸鼠背部皮下建立移植瘤模型，取培养４周的ＴＩＬ联合低剂量Ｃｙ局部注射，观察肿瘤体积变化及肿瘤生长情况。结果①ＴＩＬ＋ｒＩＬ２和ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组在３周内抑瘤率较高（分别为：８６１％±０４％和９７７％±０６％），３周后抑瘤作用减弱；②ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组抑瘤率较ＴＩＬ＋ｒＩＬ２组高（第８周抑瘤率分别为：２００％±１４％和７５５％±２５％，Ｐ＜００１）。结论口腔癌ＴＩＬ在应用后３周内具较强抑瘤作用，３周后减弱；

头颈部鳞癌TIL细胞制备的方法学研究

用直拉分离和酶消化分离两种方法分离头颈部鳞癌组织中淋巴细胞，经重组白细胞介素２培养，制备出具明显抗肿瘤活性的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）。结果示直接法所得ＴＩＬ前体细胞数量少、活性较高，增殖快；酶消化法所得ＴＩＬ前体细胞数量多，但活性较低、增殖慢。培养后期两种方法制备的ＴＩＬ细胞抗肿瘤活性无差异。对某些质地坚硬的肿瘤组织用直接法得ＴＩＬ细胞较少，难以满足细胞数量要求，此时应并用直接分离与酶消化法。