β-榄香烯通过PI3K/Akt通路对人口腔鳞癌顺铂耐药细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨β-榄香烯(β-Ele)通过PI3K/Akt通路对人口腔鳞癌顺铂(DDP)耐药细胞的增殖、凋亡及耐药性的影响及机制。方法构建DDP耐药细胞株CAL-27/DDP,将细胞分为对照组、β-Ele组(40μg/mlβ-Ele)、DDP组(2 mg/L DDP)、β-Ele+DDP组(40μg/mlβ-Ele联合2 mg/L DDP)和β-Ele+DDP+PI3K激活剂740Y-P组(40μg/mlβ-Ele、2 mg/L DDP和50μg/ml 740Y-P)。采用MTT法检测其增殖活力,计算半数抑制浓度(IC_(50))。流式细胞术检测各组细胞的周期变化及凋亡情况。Western blotting检测PI3K/Akt通路相关蛋白的表达。结果CAL-27/DDP细胞对DDP的IC_(50)为5.53 mg/L,显著高于CAL-27细胞对DDP的IC_(50)(1.45 mg/L)。与对照组比较,β-Ele组和DDP组CAL-27/DDP细胞在72 h的增殖活力降低、凋亡率升高,而p-PI3K和p-Akt相对表达水平降低,其中β-Ele组细胞发生S期阻滞,而DDP组细胞发生G_(0)/G_(1)期阻滞(P<0.05)。与DDP组比较,β-Ele+DDP组细胞增殖活力进一步降低,细胞发生G_(0)/G_(1)期阻滞,凋亡率升高,p-PI3K和p-Akt相对表达水平降低(P<0.05)。与β-Ele+DDP组比较,β-Ele+DDP+740Y-P组的p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平升高,CAL-27/DDP细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论β-Ele通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,抑制CAL-27/DDP细胞的增殖活力,促进其凋亡,从而降低其对DDP的耐药性。

长链非编码RNA01139靶向调控微小RNA-300对口腔鳞癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA01139(LINC01139)调控微小RNA-300(miR-300)对口腔鳞癌顺铂(DDP)耐药细胞(CAL-27/DDP)增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CAL-27/DDP及其亲本细胞株CAL-27中LINC01139和miR-300的表达水平。将CAL-27/DDP分为DDP+si-NC组、DDP+si-LINC01139组、DDP+miR-NC组、DDP+miR-300组、DDP+si-LINC01139+anti-miR-NC组、DDP+si-LINC01139+anti-miR-300组。采用噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖抑制率;Transwell实验检测迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告实验和qRT-PCR确定LINC01139与miR-300的靶向关系。结果与CAL-27细胞比较,CAL-27/DDP中LINC01139的表达升高,miR-300的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+si-NC组比较,DDP+si-LINC01139组CAL-27/DDP增殖抑制率升高,迁移和侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+miR-NC组比较,DDP+miR-300组CAL-27/DDP增殖抑制率升高,迁移和侵袭细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与DDP+si-LINC01139+anti-miR-NC组比较,DDP+si-LINC01139+anti-miR-300组CAL-27/DDP增殖抑制率降低,迁移和侵袭细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抑制LINC01139可通过上调miR-300抑制CAL-27/DDP的增殖、迁移和侵袭。

基于RNA-Seq技术初步探索顺铂在口腔鳞状细胞癌的相关耐药机制

目的 探索口腔鳞状细胞癌(简称口腔鳞癌)顺铂化疗耐药的相关基因及信号通路。方法 建立顺铂诱导的口腔鳞癌细胞耐药模型,将顺铂耐药细胞(HN6-R)与非顺铂耐药细胞(HN6-WT_Control)进行转录组RNA-Seq测序分析,筛选两组中差异表达的基因(DEGs),利用生物信息学方法分析差异基因及相关信号通路。结果 测序结果显示顺铂耐药细胞与非顺铂耐药细胞有216个基因发生显著变化(log_(2)Fold Change, log_(2)FC>1;adjusted P value<0.05),其中55个基因下调,161个基因上调。对耐药细胞中上调的基因进行了基因富集分析(GSEA)确定了潜在的耐药相关通路,其中包括IL6/JAK2/STAT3信号通路、TNF-α和NF-κB信号通路、低氧通路、干扰素-γ应答和干扰素-α的应答通路等,其中变化最显著的基因为CXCL10、CXCL11、NR4A3和IGFBP3等。结论 IL6/JAK2/STAT3等信号通路在口腔鳞癌顺铂耐药细胞株中显著上调,可能成为预测口腔鳞癌化疗疗效的标志物及潜在的治疗靶点。

当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制

目的 探讨当归多糖对结直肠癌细胞顺铂耐药性的影响及作用机制。方法 将人结直肠癌细胞HT-15、顺铂耐药细胞株HT-15/DDP仅使用30μmol/L浓度的顺铂干预设为对照组,使用对应质量浓度1.0、1.5、2.0 mg/mL的当归多糖干预12 h后再加入30μmol/L浓度顺铂设为当归多糖组。通过脂质体细胞转染技术分别将miR-10b-5p inhibitor、TGFBR2 mimics转染至HT-15/DDP细胞中,再加入2.0 mg/mL当归多糖干预48 h,然后将其分为当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室试验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力。RT-PCR检测miR-10b-5p、TGFBR2 mRNA表达水平;Western blot检测TGFBR2蛋白表达水平。结果 单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显高于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,可明显增强HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞增殖率、细胞迁移个数明显降低(P<0.01)。单独顺铂干预的对照组HT-15/DDP细胞凋亡率明显低于HT-15细胞(P<0.01);经不同质量浓度当归多糖预处理12 h后,明显增强了HT-15/DDP细胞对顺铂的敏感性,HT-15/DDP细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。HT-15/DDP细胞miR-10b-5p、TGFBR2表达水平在各组间比较差异均具有统计学意义(P<0.01);不同剂量当归多糖组中HT-15/DDP细胞miR-10b-5p表达水平明显低于对照组,TGFBR2表达水平明显高于对照组(P<0.01),随着当归多糖剂量的增加miR-10b-5p表达水平逐渐降低,TGFBR2表达水平逐渐升高(P<0.01)。使用生物信息学数据库(TargetScan、miRanda)预测miR-10b-5p的靶基因,结果显示,TGFBR2是miR-10b-5p的候选靶基因。miR-10b-5p表达下调后,HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量明显高于对照组HT-15/DDP细胞中TGFBR2相对表达量(P<0.01)。当归多糖(2.0 mg/mL)+miR-10b-5p inhibitor组、当归多糖(2.0 mg/mL)+TGFBR2 mimics组的HT-15/DDP细胞增殖率、细胞增殖迁移个数明显低于当归多糖组(2.0 mg/mL),HT-15/DDP细胞凋亡率明显高于当归多糖组(2.0 mg/mL)(P<0.05)。结论 当归多糖可通过下调miR-10b-5p表达、上调TGFBR2表达逆转结直肠癌细胞顺铂耐药性,进而抑制肿瘤细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。

降低有氧糖酵解增强非小细胞肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性

目的:探究顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞糖代谢的特点及抑制有氧糖酵解对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药细胞的影响及其机制。方法:通过梯度倍增浓度法建立非小细胞肺癌顺铂耐药细胞模型(A549/DDP);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测A549/DDP与A549细胞两组葡萄糖消耗量、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;CCK-8法(cell counting kit-8)检测2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)及顺铂处理后A549/DDP与A549细胞增殖能力的变化;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞葡萄糖消耗量、ATP释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞后对非神经元性烯醇化酶(recombinant enolase 1,ENO1)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)、缺氧诱导因子-α(hypoxia inducible factor-α,HIF-α)表达的影响。结果:与A549细胞相比,顺铂耐药细胞株短时间内生长速度无明显差异。A549/DDP细胞消耗葡萄糖量增多、有氧糖酵解产生ATP增多、乳酸生成及丙酮酸释放量也增多,有氧糖酵解能力明显增强,差异具有统计学意义。2-DG处理后能够显著逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,增强对顺铂的敏感性,达到抑制A549/DDP细胞增殖的效果,差异具有统计学意义。2-DG能够抑制A549/DDP细胞的葡萄糖摄取,减少ATP的释放,减少乳酸生成及丙酮酸的产生,差异具有统计学意义。与A549细胞相比,A549/DDP细胞ENO1、G6PD、HIF-α表达水平升高,2-DG抑制有氧糖酵解后三者表达水平均降低,差异具有统计学意义。结论:2-DG抑制非小细胞肺癌细胞顺铂耐药有氧糖酵解,可在一定程度上逆转其对顺铂的耐药性。

LncRNA AC093818.1对口腔鳞癌细胞顺铂耐药的影响及作用机制

目的:探究LncRNA AC093818.1(AC09)对口腔鳞癌细胞顺铂耐药的影响及作用机制。方法:根据细胞转染质粒和药物不同将实验组分为顺铂组(Ctrl+Cis)、si-NC+顺铂组(si-NC+Cis)、si-AC09+顺铂组(si-AC09+Cis),并设置空白对照组(Ctrl),检测各组细胞增殖和凋亡差异以及NIBP和NF-κB p65的表达水平。结果:AC09在口腔鳞癌细胞系Tca8113、CAL-27、SCC-25和SCC-090及顺铂耐药细胞系Tca8113/DDP、CAL-27/DDP中高表达。抑制AC09表达后顺铂耐药细胞增殖水平下降,而凋亡水平升高。经顺铂处理后,耐药细胞中NIBP、NF-κB p65表达上调,而转染AC09-siRNA后,耐药细胞中NIBP、NF-κB p65表达下降。结论:AC09在OSCC细胞中上调,抑制AC09表达通过阻滞NF-κB通路的激活抑制口腔鳞癌顺铂耐药细胞的增殖、促进凋亡,降低口腔鳞癌细胞对顺铂的耐药性。

MicroRNA-21调控口腔鳞癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:探讨micro RNA-21(mi RNA-21)在人口腔鳞癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法 :采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测mi RNA-21在口腔鳞癌细胞株Tca8113及顺铂耐药细胞株Tca8113/DDP的表达;采用体外转染法将mi RNA-21模拟物(mimics)或抑制物(inhibitor)分别转染Tca8113和Tca8113/DDP细胞,采用RT-PCR检测转染前后细胞中mi RNA-21的表达情况;采用CCK8实验检测转染前后细胞对顺铂敏感性的变化;并用Western blot检测转染前后细胞中PTEN的表达变化。采用双荧光素酶报告基因验证mi RNA-21是否作用于PTEN基因的3’-UTR区预测靶位。结果:mi RNA-21在Tca8113/DDP细胞中的表达水平是Tca8113细胞的(8.26±1.37)倍(P<0.01)。Tca8113细胞转染mi RNA-21 mimics后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(10.51±2.18)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113细胞增殖的抑制率较转染前明显下降(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显下降(P<0.05)。Tca8113/DDP细胞在转染mi RNA-21 inhibitor后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(0.32±0.14)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113/DDP细胞增殖的抑制率与转染前比较明显增加(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显增高(P<0.05)。经双荧光素酶报告基因验证PTEN是mi RNA-21的靶基因。结论:mi RNA-21在口腔鳞癌顺铂耐药细胞Tca8113/DDP中异常高表达,下调其表达可部分逆转细胞耐药性,mi RNA-21可能通过作用于PTEN参与口腔鳞癌细胞顺铂耐药的发生和发展。

TCRP1在口腔鳞癌中介导顺铂耐药的体内实验研究

目的 TCRP1是新近从舌癌耐药细胞系Tca8113/PYM中克隆出来的一个新基因,前期体外实验研究表明TCRP1在口腔鳞癌细胞中能特异地介导对顺铂化疗耐受,本研究将进一步探讨TCRP1在体内实验中介导化疗耐受的作用。方法通过建立TCRP1过/沉默表达裸鼠移植瘤模型,观测TCRP1对化疗药物5-Fu、cDDP的作用敏感性的影响并初步探讨其机制。结果肿瘤生长曲线及肿瘤瘤重结果显示TCRP1能增强裸鼠移植瘤对顺铂的耐药性,而对5-Fu则没有影响。TUNEL检测发现TCRP1高表达的组织中凋亡细胞计数更少。结论 TCRP1是一个新的耐药相关基因,其作用机制与通过增强口腔鳞癌细胞凋亡抗性有关。

肿瘤源性S100A9对食管鳞癌细胞顺铂耐药性的影响

目的研究S100A9是否参与食管鳞癌细胞顺铂耐药过程。方法建立食管鳞癌及其耐药株(KYSE140细胞)。分为Control vector组、vector+cisplatin、S100A9 vector组、S100A9 vector+cisplatin组。Control vector组为细胞转染空白质粒对照,vector+cisplatin组为细胞转染空白质粒对照并加入顺铂处理,S100A9 vector组为细胞转染S100A9质粒,S100A9 vector+cisplatin组为细胞转染S100A9质粒并加入顺铂处理。MTT观察顺铂的细胞毒性。Western blot检测蛋白表达。结果 Western blot结果显示,与单纯的食管鳞癌细胞株相比,S100A9在食管鳞癌耐药细胞中的表达显著增加。MTT结果显示,与顺铂治疗组相比,过表达S100A9可显著降低顺铂的细胞毒性作用(P<0.01);与过表达S100A9组相比,沉默经典的S100A9受体-RAGE受体对过表达S100A9所引起的顺铂细胞毒性降低的效应没有作用(P>0.05)。Western blot结果显示KYSE140细胞中主要表达的NOX亚型是NOX5,此外还有NOX2表达。MTT结果显示,与过表达S100A9的KYSE140细胞相比,NOX抑制剂DPI可显著逆转过表达S100A9所引起的顺铂细胞毒性降低效应(P<0.01)。结论 S100A9可能通过激活NOX通路,介导食管鳞癌细胞顺铂耐药机制。

自噬介导人舌鳞癌细胞对顺铂耐药的作用及其机制研究

观测自噬在人舌鳞癌细胞对顺铂(DDP)耐药产生中的作用及分子机制,并进一步研究抑制自噬是否能够逆转肿瘤细胞对DDP的耐药,MTT法检测舌鳞癌Tca8113细胞的存活率,western-blot和RT-PCR法分别检测各实验组细胞外信号调节激酶(ERK)及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达情况。结果显示DDP联合氯喹组较DDP组细胞存活率低,差异有统计学意义(P<0.05),蛋白ERK的表达显著降低,mTOR的表达显著升高。因此,自噬抑制剂氯喹能够提高顺铂对舌鳞癌细胞的敏感性,增强了DDP的抗肿瘤作用。

穿心莲内酯通过抑制Fas/FasL信号轴降低子宫内膜癌Ishikawa/DPP细胞对顺铂的耐药性

目的:探讨穿心莲内酯(Andro)调节脂肪酸合成酶(Fas)/脂肪酸合成酶配体(FasL)信号轴对子宫内膜癌Ishikawa细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法:采用0、5、10、20μg/mL DDP分别处理Ishikawa细胞和顺铂耐药的Ishikawa/DPP细胞,0、5、10、25、50μmol/L Andro处理Ishikawa/DDP细胞,MTT法检测细胞增殖情况并为后续实验选择合适的给药剂量。将Ishikawa/DDP细胞随机分为对照组、DDP组(DDP干预)、Andro组(DDP、Andro干预)、pcDNA3.1-NC组(转染pcDNA3.1+DDP、Andro干预)、pcDNA3.1-Fas/FasL组(转染pcDNA3.1-Fas/FasL+DDP、Andro干预),24 h后,采用qPCR法检测Fas、FasL mRNA的表达,平板克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞克隆能力、细胞迁移与侵袭和细胞凋亡,WB法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、BAX、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、多药耐药蛋白-1(MDR-1)及Fas、FasL蛋白表达。结果:DDP以剂量依赖的方式抑制Ishikawa和Ishikawa/DPP细胞增殖,并且与Ishikawa细胞比较,Ishikawa/DPP细胞对DDP的敏感性更低(均P<0.05);Andro以剂量依赖性的方式抑制Ishikawa/DPP细胞的增殖(均P<0.05)。Ishikawa/DPP细胞中Fas、FasL的表达水平均高于Ishikawa细胞(均P<0.05)。选取20μg/mL DDP和25μmol/L Andro为干预剂量,干预时间24h。与对照组比较,DDP组Ishikawa/DPP细胞中PD-L1、MDR-1、Fas、FasL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05);与DDP组比较,Andro组Ishikawa/DPP细胞中Fas、FasL mRNA表达水平、细胞克隆形成率、迁移与侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、PD-L1、MDR-1、Fas、FasL蛋白表达水平显著降低,BAX蛋白表达水平及凋亡率显著升高(P<0.05或P<0.01),pcDNA3.1-NC组与Andro组类似;与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-Fas/FasL组Ishikawa/DPP细胞上述指标变化均被逆转(P<0.05)。结论:Andro可能通过抑制Fas/FasL信号轴来抑制Ishikawa/DPP细胞增殖、迁移与侵袭,促进凋亡,从而降低细胞对DDP的耐药性。

牙龈卟啉单胞菌对口腔鳞状细胞癌化疗耐药行为的影响

目的:研究口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)肿瘤中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对OSCC化疗治疗过程中化疗耐药性的影响。方法:使用原位免疫杂交的方法检测67例OSCC患者肿瘤组织中P.gingivalis的含量,使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)实验检测OSCC细胞在P.gingivalis感染后化疗药物的细胞毒性作用,使用Western blot实验检测OSCC细胞在P.gingivalis感染后耐药蛋白的表达。结果:OSCC上皮组织中P.gingivalis含量比非肿瘤区域上皮组织中P.gingivalis含量高,P.gingivalis的感染降低了化疗药物紫杉醇对OSCC细胞的杀伤作用(P<0.05),在P.gingivalis感染后耐药蛋白P-糖蛋白在肿瘤细胞中的表达显著提高。结论:OSCC患者肿瘤组织中P.gingivalis含量较高,可能与OSCC化疗耐药相关。

食管鳞状细胞癌顺铂耐药关键基因及临床病理分析

目的探索在食管鳞癌(ESCC)进展中驱动顺铂耐药的关键基因,并分析其与肿瘤临床病理因素的关系。方法从高通量基因表达数据库通过GPL21290和GPL570平台下载并分析GSE169337和GSE161533,以获得差异表达基因,并对两个数据集取交集。使用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白质-蛋白质相互作用网络并确定关键基因。DAVID数据库对GSE169337的差异基因进行生物学功能和途径富集分析。利用癌症基因组图谱数据和TIMER分析和验证关键基因在食管癌中的表达情况、免疫细胞浸润、临床病理因素(肿瘤分期、性别、吸烟状态、淋巴结转移及TP53状态)的关系及预后价值。结果生物学功能和途径富集分析示,差异基因与免疫反应存在潜在联系。确定并验证了在ESCC进展过程中顺铂耐药的10个关键基因,其中GBP1、IFI44L与食管癌组织中多种免疫细胞浸润程度呈正相关(r>0,P<0.05);在不同食管癌分期中IFI44L表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);与无淋巴结转移食管癌患者比较,早期淋巴结转移的食管癌患者GBP1高表达(P<0.05);IFI6、RTP4高表达患者生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论本研究有助于ESCC顺铂耐药性的分子机制研究,联合免疫治疗是抑制顺铂耐药的重要方向。

5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂通过微小RNA-92a/Wnt/β-连环蛋白通路影响非小细胞肺癌细胞的顺铂耐药机制研究

目的探讨5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂通过微小RNA-92a(miR-92a)/Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路影响非小细胞肺癌细胞的顺铂耐药机制。方法体外培养人非小细胞肺癌细胞(A549),构建顺铂耐药模型,实验分组如下:A549组为正常A549细胞;A549/顺铂组为顺铂耐药模型细胞;A549+顺铂组为A549组给予顺铂共培养;A549/顺铂+顺铂组为A549/顺铂组给予顺铂共培养;A549/顺铂+miR-92a inhibitor组为A549/顺铂组转染miR-92a inhibitor;5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组为A549/顺铂组给予5-氟尿嘧啶+奥沙利铂共培养;5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics组为5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组转染miR-92a mimics;5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics+Wnt/β-catenin inhibitor组为5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics组转染Wnt/β-catenin inhibitor。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷实验检测细胞增殖率;细胞划痕实验检测细胞迁移率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;荧光原位杂交法检测miR-92a的表达情况;实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-92a、Wnt4和β-catenin的表达;蛋白质印迹法检测Wnt4、β-catenin和CD44的蛋白表达。结果与A549组相比,A549/顺铂组miR-92a的表达升高(P<0.05)。与A549/顺铂组相比,A549/顺铂+miR-92a inhibitor组细胞迁移率和侵袭个数均降低(均P<0.05)。与A549/顺铂组相比,5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组细胞增殖率和侵袭个数以及miR-92a、Wnt4、β-catenin和CD44表达水平均降低(均P<0.05)。与5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组相比,5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics组细胞增殖率和侵袭个数以及miR-92a、Wnt4和β-catenin的表达水平均上升(均P<0.05)。与5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics组相比,5-氟尿嘧啶+奥沙利铂+miR-92a mimics+Wnt/β-catenin inhibitor组细胞增殖率和侵袭个数以及miR-92a[(0.49±0.07)比(0.97±0.14)]、Wnt4[(0.37±0.05)比(1.19±0.16)]和β-catenin[(0.27±0.04)比(1.54±0.20)]的表达水平均下降(均P<0.05)。结论5-氟尿嘧啶联合奥沙利铂能够有效改善A549细胞的顺铂耐药性,抑制细胞增殖和侵袭,可能与下调miR-92a/Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达有关。

非编码RNA在口腔鳞状细胞癌耐药机制中的研究进展

口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是一种常见的口腔恶性肿瘤,在化疗过程中耐药的产生是临床治疗面临的最大难题。研究表明,非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)可以通过促进上皮-间充质转化、调节药物外排转运体、影响DNA损伤应答、诱导自噬、调控耐药相关基因及通路等介导OSCC的化学耐药机制。以非编码RNA为新的治疗靶点,深入研究其在OSCC中的耐药机制具有重要的临床意义。本文综述了OSCC中非编码RNA耐药机制和治疗研究的新进展。

口腔鳞状细胞癌耐药的表观遗传学调控研究进展

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤,具有易侵袭、易复发、预后差的特征,患者对化疗药物产生耐药是其疗效降低的重要原因。近年的研究发现,肿瘤耐药过程中表观遗传学修饰变化显著,表观遗传学药物已成为耐药抵抗的研究热点。相较于以手术为主的常规治疗,基于表观遗传调控联合靶向治疗将成为极具前景的治疗策略。本文综述DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA、染色质重塑对OSCC耐药的表观遗传学调控机制研究进展,以期为OSCC耐药抵抗研究提供参考。

X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白与口腔鳞癌细胞Tca8113化疗耐药的关系

目的研究X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达水平,并探讨XIAP表达与Tca8113细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法用平阳霉素(PYM)间歇性加药,逐步递增剂量,采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测药物处理前后细胞对PYM的敏感性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测XIAP在药物处理前后的各Tca8113细胞组中的表达变化,并探讨XIAP与细胞耐药性的关系。结果Tca8113细胞在PYM间断作用下产生耐受,Tca8113-1-10组、Tca8113-10-10组耐药细胞对PYM的半数有效浓度(IC50)分别为(12.758±0.030)、(18.986±0.150)μg·mL-1。Tca8113-1-20、Tca8113-10-20组耐药细胞对PYM的IC50分别为(26.302±0.072)、(35.294±0.115)μg·mL-1。XAIP的表达水平与细胞对PYM的耐药有相关性(P<0.01)。结论XIAP在口腔鳞癌中的表达水平升高,可能与鳞癌的化疗耐药性有关,这可作为口腔鳞癌基因治疗的一个新靶点。

巨噬细胞移动抑制因子与趋化因子受体7对结肠癌细胞侵袭及奥沙利铂耐药的影响

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与趋化因子受体7(CXCR7)对结肠癌细胞侵袭能力及奥沙利铂(L-OPH)耐药的影响。方法体外培养L-OPH结肠癌耐药细胞株HCT116/L-OPH和结肠癌敏感细胞株HCT116,设置对照组(A组,HCT116细胞株)和实验组[B组(HCT116/L-OPH细胞株),C组(shRNA转染技术沉默HCT116/L-OPH细胞株中CXCR7的表达,CXCR7-shRNA),D组(HCT116/L-OPH细胞株阴性对照,CXCR7-shCtrl),E组(HCT116/L-OPH加入MIF特异性小分子拮抗剂ISO-1),F组(CXCR7-shRNA加入ISO-1),G组(CXCR7-shCtrl加入ISO-1)],采用噻唑蓝(MTT)法检测各细胞组的耐药性及在不同L-OPH浓度下的细胞增殖活性,采用Transwell法检测细胞的侵袭能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测CXCRT mRNA的表达水平和磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)的表达水平,采用逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测CXCR7蛋白的表达水平。结果A组、B组、C组、D组细胞对L-OHP的半数抑制浓度分别为6.36,74.72,7.01,7.49μmol/L,B组细胞的耐药指数为11.74。10,20,50,100μmol/L L-OHP浓度下,B组细胞的增殖抑制率显著低于A组(P<0.05),C组细胞的增殖抑制率显著高于B组和D组(P<0.05),E组细胞的增殖抑制率显著高于B组(P<0.05)。C组细胞CXCR7的mRNA和蛋白表达水平均显著低于B组(P<0.05)。C组和E组细胞的侵袭能力显著弱于B组(P<0.05)。C组和E组细胞的p-Akt表达水平显著弱于B组(P<0.05)。结论MIF与CXCR7均可调控结肠癌细胞侵袭及L-OPH耐药,其作用机制可能与MIF通过CXCR7激活Akt信号通路相关。

川芎嗪基于KDM2B调控卵巢癌细胞顺铂耐药的机制

目的探索川芎嗪调控卵巢癌细胞顺铂耐药的潜在机制。方法用顺铂(cisplatin,DDP)诱导A2780细胞成为A2780顺铂耐药细胞株(A2780/DDP);将其分为对照组、阴性对照组、干扰组和川芎嗪组。干扰组和阴性对照组分别用si-KDM2B和si-NC进行转染。川芎嗪组给予终浓度为5 nmol·L^(−1)的川芎嗪(培养基溶解)处理细胞,对照组给予相同体积的培养基。每组细胞培养48 h后,收集耐药细胞。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)用于检测mRNA表达水平,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)用于细胞增殖实验,流式细胞术用于检测细胞凋亡,Western blotting用于检测细胞凋亡相关蛋白[(B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(BCL2-associated X protein,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)]的表达水平。结果赖氨酸特异性去甲基化酶2B(lysine-specific demethylase2B,KDM2B)在A2780/DDP中高表达,A2780/DDP细胞经川芎嗪或者KDM2B敲减处理后可以抑制A2780/DDP细胞增殖、促进细胞凋亡、上调凋亡相关蛋白(Bax和caspase-3)和下调BCl-2的表达水平。结论川芎嗪可能通过调控KDM2B抑制A2780/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡。

病毒介导IL-24基因对口腔鳞癌耐药细胞株凋亡的影响

目的:研究杂合病毒介导的IL-24基因对口腔鳞状细胞癌耐药细胞的凋亡诱导作用,探讨其治疗耐药口腔癌的可能性。方法:通过MTT细胞活力测定鉴定口腔鳞状细胞癌细胞株KB和其耐药细胞株KBV。利用杂合病毒Ad LTR2EF1α搭载EGFP和IL-24转染KB细胞,确定最佳转染浓度,荧光倒置显微镜及RT-PCR鉴定EGFP或IL-24基因表达。以人永生化上皮细胞Ha Ca T细胞作为对照,使用Ad LTR2EF1α-IL-24转染KB、KBV及Ha Ca T细胞后,MMT法检测细胞活力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果:KBV细胞对长春新碱的耐受性明显高于KB细胞。Ad LTR2EF1α-IL-24搭载的IL-24基因可以在KB及KBV细胞内过表达。IL-24基因在KB和KBV细胞中的过表达,有明显抑制细胞生长和促凋亡作用,而在Ha Ca T细胞中没有类似的作用。结论 :杂合病毒介导的IL-24对口腔鳞状细胞癌耐药细胞有较强的细胞毒性和诱导凋亡作用,并且对正常组织细胞没有影响。具有治疗耐药口腔癌的潜在价值。