基于网络毒理学及实验验证探讨槟榔对口腔黏膜下纤维化的影响

目的基于网络毒理学方法和体内实验验证探讨槟榔对口腔黏膜下纤维化的影响及作用机制。方法通过TCSMP和Swiss数据库筛选槟榔潜在活性成分对应靶点,利用GeneCards、Disgenet数据库得到口腔黏膜下纤维化(oral submucosal fibrosis,OSF)疾病相关靶点。将交集靶点上传至STRING数据平台构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,再采用Metascape数据平台进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。采用槟榔水提取液低、中、高浓度干预大鼠口腔黏膜,大鼠开口度、病理形态学、免疫组织化学等检测对网络毒理学结果进行验证。结果网络毒理学结果表明槟榔52个成分中含有587个相关靶点,OSF相关靶点761个,二者交集靶点72个。PPI网络分析结果显示,白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、细胞凋亡调节因子Bcl-2(apoptosis regulator Bcl-2,BCL2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)可能是槟榔影响OSF的关键靶点。KEGG通路富集分析获得PI3K-Akt信号通路、AGE-RAGE信号通路、松弛素信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路。动物实验结果显示,中、高剂量组开口度值较对照组、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05),HE染色、Masson染色表明中、高剂量组出现不同程度的纤维化病变,免疫组织化学结果提示槟榔水提取液上调IL-6、TNF-α等炎性因子,且呈一定的剂量相关性。结论槟榔可能通过上调IL-6、TNF-α等关键炎性因子以介导炎症反应诱导口腔黏膜下纤维化的发生。

基于基因表达综合数据库芯片挖掘结合网络药理学与分子对接探讨芒果苷治疗口腔黏膜下纤维化的机制研究

目的基于基因表达综合(GEO)数据库芯片挖掘、网络药理学及分子对接技术探讨芒果苷(MF)治疗口腔黏膜下纤维化(OSF)的核心作用靶标及潜在作用机制。方法基于GEO芯片挖掘OSF的潜在治疗靶点,利用数据库预测MF潜在作用靶标和收集OSF疾病靶标,使用EVenn平台绘制维恩图,STRING数据库绘制蛋白质互作(PPI)网络,DAVID平台进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,Cytoscape 3.10.1软件绘制药物—靶标—通路—疾病网络图,AutoDocktools 1.5.6软件进行分子对接分析及可视化。结果从多种数据库挖掘得到MF潜在靶标356个,OSF疾病靶标360个,选取PPI网络中排名前15个关键靶蛋白,GO功能及KEGG通路富集分析结果显示,MF治疗OSF主要涉及高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)、表皮生长因子受体(EGFR)等信号通路。分子对接显示,MF与丝氨酸蛋白激酶(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)等核心靶点有较佳结合活性。结论MF可能通过多靶点、多途径的方式对OSF发挥治疗作用。

红花-牛膝治疗口腔黏膜下纤维化作用机制的网络药理学分析

目的联合使用网络药理学和分子对接技术探究红花-牛膝的有效成分作用于口腔黏膜下纤维化(OSF)的治疗靶点。方法通过网络药理学方法获得“红花”“牛膝”的有效成分及作用靶点,以及OSF的疾病靶点。利用STRING平台构建蛋白互作PPI网络图;对关键活性成分与核心靶点进行分子对接分析,并对交集靶点进行了GO和KEGG富集分析。结果发现红花-牛膝作用于OSF的主要活性成分为木犀草素、黄芩苷、黄连素和黄连碱等;主要核心靶点为肿瘤坏死因子(TNF)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)等;主要涉及癌症中的蛋白多糖、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、白介素-17(IL-17)、C型凝集素受体等信号通路。分子对接结果亦表明活性分子与靶点基因均具备良好的结合力。结论本研究结果提示红花-牛膝可能通过多活性成分、多靶点以及多种信号通路来治疗OSF。

姜黄素通过调控HIF-1α/miR-760/LTBP2机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果研究

目的:探究姜黄素通过调控缺氧诱导因子-1α/微小RNA-760/潜在转化生长因子结合蛋白2(HIF-1α/miR-760/LTBP2)机制轴抑制口腔黏膜下纤维化的效果。方法:40只SD大鼠中随机取10只作为正常组,正常饲养不作处理;另30只大鼠采用槟榔碱诱导建立口腔黏膜下纤维化模型。将30只模型大鼠随机分为模型组、姜黄素组和阳性对照组,每组10只。姜黄素组和阳性对照组大鼠分别予以相应药物,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,1次/d,连续给药8周。比较各组大鼠张口度、颊黏膜组织变化、纤维化标志物及HIF-1α/miR-760/LTBP2信号轴表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠张口度明显减小(P<0.05),颊黏膜评分、颊黏膜组织TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,姜黄素组和阳性对照组张口度均明显增大(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ水平、miR-760 mRNA、HIF-1αmRNA、LTBP2 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),且姜黄素组张口度大于阳性对照组(P<0.05),颊黏膜评分、TGF-β1、ColⅢ、IFN-γ、miR-760 mRNA、LTBP2 mRNA及HIF-1α、LTBP2蛋白表达均低于阳性对照组(P<0.05)。结论:姜黄素可能降低HIF-1α、miR-760、LTBP2表达,抑制口腔黏膜下纤维化。

133例口腔黏膜下纤维性变癌变的病理及临床生物学行为研究

目的分析嚼食槟榔鲜果习惯的口腔黏膜下纤维性变(OSF)癌变的临床特点、病理及临床生物学行为。方法回顾性分析经手术治疗的247例口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者,其中嚼食槟榔鲜果习惯的OSF癌变组133例,非OSF癌变组114例,收集患者临床资料和病理结果,对患者的年龄、性别、病变部位、临床分期、病理分级、淋巴结转移率、肿瘤复发率及5年生存率进行分析;使用SPSS 26.0统计软件进行数据分析,P<0.05记为差异有统计学意义。结果OSF癌变组的平均年龄(50.68±11.54)岁低于非OSF癌变组(57.90±12.85)岁,OSF癌变组的男女比例高于非OSF癌变组(6.82∶1 vs 2.16∶1),差异具有统计学意义(P<0.05)。OSF癌变组和非OSF癌变组的OSCC病理分化结果差异具有统计学意义(P<0.05),经比较,OSF癌变组的肿瘤分化较好,非OSF癌变患者肿瘤分化较差。OSF癌变组复发率(19.1%)低于非OSF癌变组(31.5%),OSF癌变组5年生存率(85.5%)高于非OSF癌变组(74.8%),差异具有统计学意义(P<0.05)。是否OSF癌变对OSCC淋巴结转移及临床分期的差异无统计学意义(P>0.05)。结论具有嚼食槟榔鲜果习惯的OSF癌变患者以男性为主,肿瘤好发于舌及唇颊部,病理分化程度较高,预后较好。

三七总皂苷通过激活Nrf2/GCLC信号通路抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞氧化应激而缓解口腔黏膜下纤维化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)在槟榔碱(ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化中的抗纤维化作用,并分析PNS对核因子E2相关因子2(Nrf2)∕谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)信号通路的影响。方法:采用CCK-8法评估不同浓度的PNS和ANE对人永生化角质形成细胞系HaCaT活力的影响,根据CCK-8结果选择75 mg/L的ANE及25、50和100 mg/L的PNS作为后续实验浓度;细胞设为空白对照组、模型组和PNS低、中、高剂量(25、50和100 mg/L)组,采用Western blot和RT-qPCR法检测各组细胞中I型胶原(COL-I)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Nrf2、GCLC和谷胱甘肽还原酶(GR)的蛋白及mRNA表达情况;采用免疫荧光法检测Nrf2入核情况;采用生化试剂盒检测各组细胞中谷胱甘肽(GSH)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量。结果:与空白对照组相比,模型组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达上调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达下调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量升高,GSH含量和SOD活性明显减弱;与模型组相比,PNS 50和100 mg/L组细胞中COL-I蛋白及mRNA表达下调,E-cadherin、Nrf2、GCLC、核Nrf2和GR的蛋白及mRNA表达上调,细胞中NADPH、MDA和ROS含量下降,GSH含量和SOD活性明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论:PNS具有抗HaCaT细胞纤维化作用,其作用机制可能与激活Nrf2/GCLC信号通路,进而抗氧化应激改善口腔黏膜下纤维化有关。

口腔黏膜下纤维化患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效的关系研究

目的分析口腔黏膜下纤维化(OSF)患者血清微小RNA(miR)-204和miR-200b水平与临床疗效的关系。方法选取2021年12月至2022年12月在河北工程大学附属医院就诊的110例OSF患者作为研究组,另选取50例同期体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测研究组及对照组血清miR-204和miR-200b水平并进行比较。将研究组分为miR-204高表达组、低表达组和miR-200b高表达组、低表达组;比较血清miR-204和miR-200b不同水平患者的临床疗效、转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、临床病理特征、视觉模拟评分(VAS),采用Spearman法和Pearson法分析血清miR-204和miR-200b水平与研究组各指标的相关性。结果研究组血清miR-204和miR-200b水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-204、miR-200b高表达组患者临床疗效总有效率均为100.00%,分别高于miR-204、miR-200b低表达组临床疗效总有效率(86.79%、88.89%),差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果表明,嚼槟榔、张口度≤28 mm、口腔黏膜病损面积>4 cm^(2)、VAS评分>3分的OSF患者血清miR-204和miR-200b水平显著低于不嚼槟榔、张口度>28 mm、口腔黏膜病损面积≤4 cm^(2)、VAS评分≤3分的患者,差异有统计学意义(P<0.05);miR-204、miR-200b高表达组TGF-β1和IL-6水平显著低于miR-204、miR-200b低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果表明,OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与口腔黏膜病损面积、VAS评分、TGF-β1、IL-6呈负相关(P<0.05),与张口度呈正相关(P<0.05)。结论OSF患者血清miR-204和miR-200b水平与临床疗效关系密切,血清miR-204和miR-200b水平升高,OSF患者临床疗效较好。

槟榔碱黏膜下注射法构建SD大鼠口腔黏膜下纤维化模型

目的:通过黏膜下注射槟榔碱溶液构建SD大鼠口腔黏膜下纤维化(OSF)模型。方法:将20只SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠采用口腔颊黏膜下注射槟榔碱溶液进行造模,对照组大鼠则注射生理盐水。处理10周后,观察大鼠口腔黏膜颜色及体质量变化,测量被动开口度;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色观察黏膜组织病理学变化;免疫组化染色和实时荧光定量PCR检测黏膜组织内平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板-内皮细胞黏附分子(PECAM-1/CD31)蛋白及基因表达水平。结果:实验组大鼠颊黏膜出现白色病变,张口度减小(P<0.001);大鼠颊黏膜上皮萎缩,固有层胶原纤维沉积;大鼠黏膜组织内α-SMA蛋白和基因表达显著增加(P<0.001),CD31蛋白和基因表达显著减少(P<0.001)。结论:槟榔碱黏膜下注射法可构建出具有OSF典型症状、病理变化符合OSF的大鼠模型。

口腔黏膜下纤维化大鼠模型造模方法的优化

目的比较三种口腔黏膜下纤维化(OSF)大鼠模型造模方法:槟榔碱涂擦、颊黏膜下注射槟榔碱、槟榔碱涂擦联合颊黏膜下注射槟榔碱,探讨建立大鼠OSF模型的更优造模方法。方法选择雄性SPF级SD大鼠40只,随机分成空白对照组、槟榔碱涂擦组、槟榔碱注射组、槟榔碱涂擦+注射组各10只。观察处理后每周各组大鼠的生存状况、张口度及体重变化;处理8周后处死大鼠,取颊黏膜进行苏木精-伊红(HE)染色观察颊黏膜组织炎症变化、免疫组化检验颊黏膜组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性程度及蛋白质印迹法(WB)检测颊黏膜组织中TGF-β1蛋白表达量。结果各组大鼠经过8周造模后,双颊部颊黏膜出现不同程度发白、呈纤维条索样改变;其中,槟榔碱涂擦组大鼠双颊黏膜下纤维化程度不一、分布不均。槟榔碱涂擦组大鼠体重与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),槟榔碱注射组、槟榔碱涂擦+注射组大鼠体重均下降(P<0.05),其中槟榔碱涂擦+注射组大鼠体重下降最明显(P<0.05)。与空白对照组比较,三种造模方式的OSF大鼠张口度均降低(P<0.05),与槟榔碱涂擦组比较,槟榔碱注射组和槟榔碱涂擦+注射组张口度降低更明显(P<0.05);与空白对照组比较,三种造模方式的OSF大鼠TGF-β1表达量均显著上升(P<0.05),且各模型组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。其中TGF-β1在槟榔碱涂擦+注射组中表达量最高。结论槟榔碱涂擦联合颊黏膜下注射槟榔碱是建立大鼠口腔黏膜下纤维化的优选造模方法。

旴江谢氏刺营疗法配合丹参黏膜下注射治疗口腔 黏膜下纤维化的临床研究

目的探讨口腔黏膜下纤维化(OSF)患者采用旴江谢氏刺营疗法配合丹参黏膜下注射治疗的效果。方法将2020年1月至2022年6月该院收治的80例OSF患者随机分为观察组和对照组,每组各40例。对照组予以丹参黏膜下注射治疗,观察组予以旴江谢氏刺营疗法配合丹参黏膜下注射治疗,两组均治疗3个月。比较两组治疗效果、症状体征、血清指标水平。结果观察组治疗总有效率为95.00%,高于对照组的80.00%,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后视觉模拟评分法评分、张口度和口腔黏膜病损面积均较治疗前改善,并且观察组较对照组改善情况更明显,差异均有统计学意义(P<0.05);两组治疗后血清转化生长因子-β1(TGF-β1)及白细胞介素-6(IL-6)水平均低于治疗前,并且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论OSF患者采用旴江谢氏刺营疗法配合丹参黏膜下注射治疗效果满意,可有效改善患者临床症状,调节血清TGF-β1、IL-6水平。

祛瘀化浊解毒消纤汤联合曲安奈德治疗口腔黏膜下纤维化42例

口腔黏膜下纤维化(OSF)是一种慢性炎症性黏膜疾病,主要是由结缔组织中异常的胶原沉积引起,可侵及口腔任何部位。其病理学特征为炎症反应伴上皮下固有层及结缔组织深层逐渐纤维化[1]。以进行性张口受限、进食疼痛和水疱、溃疡等为主要临床表现,严重影响患者的口腔功能和生活质量[2]。

槟榔碱对口腔黏膜下纤维化NF-κB、TGF-β_(1)信号通路的影响研究

目的探讨槟榔碱对口腔黏膜下纤维化(OSF)核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))信号通路的影响。方法选取10份上颚正常口腔黏膜样本,随机分为观察组和对照组,各5份。均经细胞培养后,观察组第6代口腔黏膜成纤维细胞(OMFb)内加入40μg/ml浓度的槟榔碱溶液,对照组加入含10%胎牛血清的DMEM培养液。比较两组样本中NF-κB、TGF-β_(1)mRNA表达、蛋白含量及12、24、48 h后细胞增殖情况。结果观察组样本NF-κB、TGF-β_(1)mRNA表达分别为(2.04±0.31)、(1.54±0.22),显著高于对照组的(1.47±0.23)、(1.17±0.18),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组样本NF-κB、TGF-β_(1)蛋白含量分别为(123.56±3.56)、(90.14±4.15)kDa,均显著高于对照组的(77.45±2.14)、(54.11±2.18)kDa,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组样本24、48 h后细胞增殖数量分别为(320.82±48.59)×10^(9)、(380.45±37.85)×10^(9),显著低于对照组的(600.76±45.37)×10^(9)、(1200.98±100.95)×10^(9),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度槟榔碱可能通过上调NF-κB及TGF-β_(1)通路促进口腔黏膜下纤维性变,对后续的临床研究具有重要意义。

口腔黏膜下纤维性变相关口腔癌患者唾液菌群、Cyfra21-1及CAT含量变化及与其临床病理特点的关系

目的 口腔黏膜下纤维性变(OSF)相关口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液菌群、细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)及过氧化氢酶(CAT)含量变化及与其临床病理特点的关系。方法 选择OSF相关OSCC患者96例,同时选择同期OSF无相关OSCC患者96例。收集患者资料,包括患者肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移、临床分期。采集患者清晨空腹状态下无刺激性混合唾液4 mL,检测唾液菌群分布以及Cyfra21-1、CAT含量变化,比较不同病理特点OSCC患者唾液中Cyfra21-1、CAT含量。结果 OSF相关OSCC患者唾液中CYFRA21-1、CAT含量显著高于OSF无相关OSCC患者(P<0.05)。96例OSF相关OSCC患者唾液中共分离出104株菌株,其中奈瑟氏菌群、链球菌属占比较高,分别为14.42%、13.46%。OSF相关OSCC患者唾液中CYFRA21-1含量与患者性别、年龄、BMI、肿瘤部位、分化程度无关(P>0.05),与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);CAT含量与患者性别、年龄、BMI、肿瘤部位、分化程度、临床分期、淋巴结转移均无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,唾液中CYFRA21-1、CAT含量诊断OSF相关OSCC的AUC分别为0.795、0.733,均有较好的诊断价值(P<0.05)。结论 OSF相关OSCC患者唾液菌群主要为奈瑟氏菌群、链球菌属,其唾液中CYFRA21-1、CAT含量较高,且与患者病理特点密切相关。

基于网络药理学分析探讨槟榔促进口腔黏膜下纤维化的活性成分及其潜在分子作用机制

目的基于网络药理学分析探讨槟榔促进口腔黏膜下纤维化(OSF)的活性成分以及其潜在的分子作用机制。方法利用中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)筛选槟榔的活性成分和相关潜在靶点;应用GeneCards和DisGeNET数据库建立OSF的基因靶点数据库;进一步采用Venny2.1.0数据处理平台和微生信数据处理平台取槟榔及OSF交集基因;基于槟榔潜在靶点与OSF靶点的匹配结果,构建蛋白质–蛋白质相互作用(PPI)网络,通过拓扑分析来筛选核心靶点;采用基于核心靶点的基因组(KEGG)通路富集分析及基因本体(GO)功能富集分析建立槟榔促进OSF的信号通路图。结果共筛选出槟榔5种活性成分,包括表儿茶素、原花青素B1等;213个槟榔相关的作用靶点以及596个OSF的疾病作用基因。通过取交集,获得31个关键相交基因,主要包括TP53、MDM2、MMP2等。GO功能富集分析显示,槟榔作用靶点共涉及到20条生物学过程,KEGG通路富集筛选出20条信号通路参与OSF的形成。结论初步证实了槟榔具有多成分-多靶点-多途径协同作用的特点以及促进OSF形成发病的潜在分子机制,为进一步探索其作用机制及临床应用奠定基础。

丹参对大鼠口腔黏膜下纤维化的治疗效果

目的探讨丹参治疗大鼠口腔黏膜下纤维化的效果。方法选取8周龄SPF级雄性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠70只,采取槟榔碱涂擦法建立SD大鼠口腔黏膜下纤维化模型后,将大鼠分为6个实验组和对照组,每组10只。实验组分别局部注射5 mg/ml丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、异隐丹参酮、丹酚酸A、丹酚酸B,对照组局部注射生理盐水,处理8周后测量局部黏膜病变面积后取局部颊黏膜行HE染色观察病理变化;并检测组织内Ⅲ型胶原、TGF-β_(1)和IFN-γ的表达情况。结果丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮组的口腔黏膜下纤维化面积减小分别达到2.72、1.95、1.58 cm^(2),治愈率60%~80%,明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮组的Ⅲ型胶原蛋白灰度比值、TGF-β_(1)蛋白降低明显,IFN-γ蛋白明显增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);而丹参酮ⅡB、丹酚酸A和丹酚酸B组的黏膜病变减少量、治愈率及Ⅲ型胶原、TGF-β_(1)和IFN-γ蛋白的表达与对照组比较,差异均无统计学意义。结论丹参酮ⅡA、隐丹参酮和异隐丹参酮具有治疗口腔黏膜下纤维化的效果。

长链非编码RNA MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞活化能力影响的研究

目的:本研究旨在明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA) MALAT1对槟榔碱诱导的颊黏膜成纤维细胞(buccal mucosal fibroblasts, BMFs)活化能力影响的作用,为寻找新的口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis, OSF)治疗途径提供理论基础。方法:体外培养BMFs,采用不同浓度槟榔碱刺激BMFs,在细胞水平上构建OSF疾病模型。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力;Transwell法和胶原凝胶收缩法检测BMFs活化;实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测BMFs中平滑肌肌动蛋白-α(α-smooth muscle actin, α-SMA)和lncRNA MALAT1的表达情况;siRNA-MALAT1瞬时转染到BMFs中,评估槟榔碱刺激下BMFs迁移和收缩能力的变化。结果:10μg/mL槟榔碱是体外构建OSF疾病模型的最佳浓度,此时细胞内α-SMA和lncRNA MALAT1表达升高。Transwell实验和胶原凝胶收缩实验提示敲低lncRNA MALAT能抑制槟榔碱诱导的BMFs收缩和迁移。结论:lncRNA MALAT1对槟榔碱诱导的BMFs激活,细胞收缩和迁移有重要作用。

槟榔生物碱致癌性、致口腔黏膜下纤维化及兴奋作用等活性研究进展

槟榔是棕榈科植物槟榔的果实,是海南农业经济的重要支柱产业。生物碱是槟榔中重要的生物活性物质,与嚼食槟榔引起的神经兴奋作用密切相关。槟榔中生物碱种类众多,各生物碱含量、结构、作用也不尽相同,生物碱的含量与槟榔产品的成瘾性和致癌性密切相关。槟榔生物碱同时具有促进胃肠道消化、驱虫、抑菌、抗抑郁等的正面及致癌性、致口腔黏膜下纤维化、生殖系统毒性等的负面效应。该文系统全面地概述了目前研究报道的槟榔生物碱的种类结构、生物碱形成亚硝胺衍生物的代谢途径及致癌性研究进展、生物碱致口腔黏膜下纤维化及兴奋作用的分子机制以及槟榔生物碱在心血管系统、消化系统、生殖系统等系统中发挥的作用,以期为槟榔生物碱的深入研究提供理论指导。

三七总皂苷通过抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻口腔黏膜下纤维化

目的:探讨三七总皂苷(PNS)是否通过调控铁死亡减轻槟榔碱(ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化(OSF),并初步研究其机制。方法:采用ANE作用于人永生化角质形成细胞系HaCaT构建OSF模型,设置空白组,模型组(50 mg/L ANE),低、中、高剂量(12.5、25和50 mg/L)PNS组,以及liproxstatin-1(铁死亡抑制剂)组,共计6组。光镜观察HaCaT细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平;透射电镜观察细胞线粒体形态学变化;Ferro-Orange荧光探针检测细胞Fe^(2+)水平;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;比色法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量。结果:与空白组比较,模型组HaCaT细胞多数呈长梭形,纤维化样外观,贴壁不牢靠,形态学改变显著,电镜下线粒体双层膜密度增加,嵴显著减少,呈典型的铁死亡表现,Col-Ⅰ蛋白表达增加,GPX4和SLC7A11蛋白表达降低,Fe^(2+)和ROS水平升高,GSH含量降低(均P<0.05);与模型组相比,低、中、高剂量PNS组细胞多数恢复圆润,呈上皮细胞样,线粒体膜密度减小,嵴数目增加,形态趋于正常,Col-Ⅰ蛋白表达减少,ROS水平下降,GSH含量升高(均P<0.05);与模型组相比,中、高剂量PNS组GPX4和SLC7A11蛋白表达显著上升,Fe^(2+)含量显著降低(均P<0.05);liproxstatin-1组细胞和线粒体形态及各指标水平与高剂量PNS组相比无显著差异(均P>0.05)。结论:PNS可通过抑制ANE诱导的HaCaT细胞铁死亡减轻OSF。

丹红注射液联合活血化瘀解毒法对口腔黏膜下纤维化的临床效果及对MCP-1、VEGF的影响

目的 观察丹红注射液联合活血化瘀解毒法对口腔黏膜下纤维化患者单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 选取2019年10月至2022年6月湖南中医药大学第一附属医院收治的100例口腔黏膜下纤维化患者,按照随机数表法分为对照组和研究组,每组各50例。两组患者均行临床常规治疗,对照组采用丹红注射液进行治疗,研究组在对照组的基础上联合活血化瘀解毒法治疗。评价两组患者张口度、黏膜病损面积、疼痛、口腔健康影响程度、炎症反应指标、口腔颊黏膜组织中MCP-1、VEGF mRNA表达量及治疗效果。结果 治疗后,研究组患者张口度高于对照组,黏膜病损面积、疼痛、口腔健康影响程度低于对照组(P <0.05),研究组患者白介素(IL)-1水平低于对照组,IL-10水平高于对照组(P <0.05),研究组患者口腔颊黏膜组织中MCP-1、VEGF mRNA表达量低于对照组(P <0.05),研究组患者治疗总有效率为96.00%,高于对照组的82.00%(P <0.05)。结论 丹红注射液联合活血化瘀解毒法可缓解口腔黏膜下纤维化患者疼痛,改善临床症状,减轻炎症反应,抑制MCP-1、VEGF表达。

口腔黏膜下纤维化的细胞及分子机制的研究进展

口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibrosis, OSF)是口腔黏膜在持续的慢性损伤中形成异常修复的病理过程。其特征是炎性反应、大量细胞外基质沉积及血管丢失,最终导致口腔黏膜的结构及功能损伤。炎症细胞的浸润是口腔黏膜下纤维化的导火索,提示局部组织的免疫微环境在其发生、发展中起重要作用。激活的肌成纤维细胞可分泌大量的细胞外基质,它们重新组装、重塑,从而抵抗胶原酶降解,而血管的丢失可明显加重纤维化的进展。本文就口腔黏膜下纤维化的病因及局部组织免疫环境失调、细胞外基质的沉积及血管的丢失对口腔黏膜下纤维化进展中的影响作一综述。