口腔黏膜拭子在遗传性耳聋常见致病基因检测中的应用研究

目的：探讨口腔黏膜拭子在遗传性耳聋常见致病基因检测中的应用，为常见耳聋致病基因筛查提供无创的样本采集方式。方法：195例新生儿，经听力筛查被诊断为听力障碍，收集其口腔黏膜拭子和外周血样本，抽提DNA，核酸测定仪检测两种收集方式样本所得DNA质量。对两种样本进行三种常见遗传性耳聋致病基因GJB2基因、SLC26A4基因和线粒体基因12S rRNA全外显子巢式PCR扩增，比较两种方法扩增产物及测序效果。结果：口腔黏膜拭子抽提DNA质量较外周血低，差异具有统计学意义（P〈0．05）；在PCR扩增后，两种样本扩增产物凝胶电泳无明显差异，测序结果无明显差异（P〉0．05）。结论：口腔黏膜拭子作为一种无创的样本采集方式，可用于三种常见遗传性耳聋致病基因检测的样本采集。

上海市中青年人群在造血干细胞采集中口腔黏膜拭子的接受意愿及其影响因素

目的:调查中青年人群在造血干细胞采集中口腔黏膜拭子的接受意愿及其影响因素,为口腔拭子采样工作的开展提供建议。方法:对接受口腔拭子采样的志愿者进行调查,采用单因素分析和logistic回归分析口腔拭子采样入库接受意愿及影响因素。结果:共收集有效问卷1985份,志愿者口腔拭子采样入库的接受率为96.83%;口腔拭子接受意愿在职业、排队等候时间、对口腔拭子技术的认知、采集操作难度、与现场指导人员沟通难度上的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:口腔拭子采样社会接受度较高,受职业、认知等因素影响。

口腔拭子在药物性耳聋基因检测中的应用

目的:探讨口腔黏膜上皮细胞基因组DNA在药物性耳聋基因A1555G及C1494T突变检测中的应用,寻求基因检测中更简单快捷并无损的样本来源。方法:采集97例来自温州特殊教育学校非综合征型耳聋学生的口腔拭子和外周血,分别提取基因组DNA,进行浓度与纯度的测定、基因扩增及产物测序,比较2种样本来源及2种方法提取的基因组DNA的浓度、纯度、扩增成功率,并将测序结果与人类线粒体DNA剑桥参考序列进行比对。结果:口腔拭子DNA的手工法提取浓度(42.5±41.7)ng/mL与试剂盒法DNA浓度(44.8±43.4)ng/mL差异无统计学意义(P>0.05);手工法DNA纯度(1.45±0.73)低于试剂盒法(1.87±0.87),两组间差异有统计学意义(P<0.05);二者扩增成功率与外周血差异均无统计学意义(P>0.05);口腔拭子DNA的药物性耳聋基因扩增产物长短一致,测序结果完全相符,均显示A1555G突变阳性2例,阴性95例;C1494T突变97例均阴性。结论:无损性样本口腔拭子扩增成功率高,诊断结果可靠,可替代外周血作为药物性耳聋基因检测的DNA来源,具有一定的临床应用价值。

儿童氨基糖苷类药物性耳聋基因快速无创检测法的应用

目的:探讨氨基糖苷类药物性耳聋相关基因位点A1555G和C1494T的快速无创检测法在儿童耳聋诊断中的应用。方法:选取2015年5月至2017年5月温州医科大学附属第一医院诊断为非综合征型感音神经性耳聋患儿126例,收集其口腔黏膜拭子及静脉血。采用多重等位基因特异性PCR(MAS-PCR)检测口腔拭子来源DNA中A1555G和C1494T突变情况。同时用Sanger测序法检测静脉血来源DNA中A1555G和C1494T突变情况,并通过Kappa一致性检验分析2种方法检出率的一致性来验证前者的可靠性。结果:采用MAS-PCR检测口腔黏膜拭子来源DNA中A1555G和C1494T突变的检出率为6.35%(8/126),其中A1555G突变7例、C1494T突变1例。静脉血Sanger测序法的检出率为6.35%(8/126),Kappa一致性检验结果显示2种方法检出率一致性较好(kappa=1,P<0.01)。结论:采用MAS-PCR检测口腔黏膜拭子来源DNA中A1555G和C1494T突变是一种简便、快速、无创的检测手段,为婴幼儿,乃至新生儿药物性耳聋检测的开展提供一种可行的方法。