采用GFP标记筛选抑制多血清型口蹄疫病毒3C基因表达的siRNA

为筛选出可抑制多种血清型口蹄疫病毒(FMDV)的小干扰RNA(siRNA),本试验通过多血清型口蹄疫病毒序列比对与siRNA设计分析,筛选出潜在抗多血清型siRNA位点;通过体外合成A型、O型和Asia I型病毒部分基因序列,制备绿色荧光蛋白(GPF)基因融合表达载体;将化学合成的siRNA与融合表达载体共转染,通过GFP观察、Western blot和实时荧光定量反转录PCR(qRT-PCR)方法检验目标siRNA对融合基因的抑制效率。生物信息分析发现,多血清型口蹄疫病毒3C基因高度保守并存在潜在siRNA作用靶位,GFP-3C融合表达载体成功构建,与化学合成的siRNA1-3C共转染293T细胞,GFP观察发现,siRNA1-3C可有效抑制来源于A型、O型和Asia I型3C基因的GFP-3C荧光信号且持续时间达72 h,Western blot检测证实此结果。qRT-PCR检测发现,siRNA1-3C对3个GFP-3C融合基因转录水平抑制效率超85%,且作用可维持72 h。本试验利用GFP作为筛选标记成功筛选出1个作用于FMDV 3C基因的siRNA,为开发多血清型口蹄疫抑制剂提供参考依据。

口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗安全性和抗体消长规律

为研究口蹄疫(FMD)O型、A型二价灭活疫苗在山羊、牦牛体内的免疫安全性和抗体消长规律,试验选用疫苗接种、抗体检测等方法,对疫苗的免疫安全性和免疫抗体水平情况进行了测试和评估。结果显示,接种疫苗的试验动物无免疫副作用,免疫14 d内均未出现临床症状;但随着时间推移,试验动物口蹄疫O型、A型抗体合格率呈逐渐下降趋势,尤其是免疫150 d后抗体合格率下降较快。表明FMD疫苗具有良好的免疫安全性,在动物体内可产生高水平O型、A型抗体且维持较长时间。

牛对表达口蹄疫病毒复合多表位基因的重组鸡痘病毒以及DNA疫苗联合免疫的免疫应答

将构建的共表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTA2-OAT以及DNA疫苗pVRI-OAT,分别以vUTA2-OAT/vVTA2-OAT(首免/加强免疫)、pVRI-OAT/vUTA2-OAT(首免/加强免疫)和vUTA2-OAT/pVRI-OAT(首免/加强免疫)等3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明,这3种方式均能诱导牛产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,其中pVRI-OAT/vUTA2-OAT联合免疫方式的免疫效果最佳,诱导的中和抗体达1∶64,已接近于常规灭活疫苗免疫方式,而且其可以诱导比灭活疫苗免疫方式高得多的细胞免疫水平(P<0.01)。上述试验结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。

新疆某奶牛场口蹄疫O型抗体的监测与分析

为探寻口蹄疫(FMD)疫苗免疫后抗体合格率低于国家要求标准的原因,进一步优化免疫程序,本试验对免疫FMD二价灭活疫苗的成年奶牛和犊牛进行了O型抗体水平跟踪监测,评价免疫后不同时间段的抗体合格率。结果显示:犊牛首次免疫后1个月(30 d)抗体合格率为53.3%,加强免疫后4个月(120 d)抗体合格率为72.4%,接近农业农村部要求的70%的最低标准;成年奶牛免疫后抗体快速上升,免疫后5个月(150d)抗体合格率仍维持在80%。提示一年两免的免疫程序,成年牛全年可维持较高的抗体合格率,而犊牛应在首免后加强免疫,且在首免后5个月(加强免疫后4个月)及时续免。

猪瘟、猪蓝耳病、猪口蹄疫免疫抗体检测分析

为了实时掌握伊州区猪瘟(Classical swine fever,CSF)、猪蓝耳病(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、口蹄疫(Foot-and-mouth disease virus,FMD)抗体免疫状况,研究采用ELISA方法对该区的156份血样进行了猪瘟(CSF)、猪蓝耳病(PRRS)、口蹄疫(FMD)抗体检测。结果表明:规模场猪群猪瘟、猪蓝耳病、口蹄疫抗体合格率分别69.23%、70.51%、79.49%,其中猪瘟免疫效果不理想,必须实施紧急补免;散养户猪群猪瘟、猪蓝耳病、口蹄疫抗体合格率分别80.77%、79.49%、96.15%,免疫效果均较理想。此次检测为更进一步做好全区猪群CSF、PRRS和FMD的有效防控提供了基本参考和科学依据。

奶牛产犊后不同日龄注射口蹄疫亚I型疫苗对产奶量的影响

本文对奶牛产犊后不同日龄注射口蹄疫(FMD)亚I型疫苗对产奶量的影响进行了研究,初步得出结论:奶牛在产犊后2周注射疫苗效果比较好。

扶正解毒散对CSF、PRRS、PR与FMD免疫效果试验

为了评估扶正解毒散对猪主要疫病免疫效果,本试验采取对比试验猪群口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病与猪蓝耳病免疫抗体比较进行了评估,结果表明:饲喂河南洛阳兽药厂生产扶正解毒散试验能显著提高免疫水平,尤其是能显著提高猪群猪伪狂犬病及猪蓝耳病免疫抗体合格率,方案为每袋1kg扶正解毒散拌料1500kg,连用15天,每间2个月用1次。

规模猪场CSF、PRRS、PR与FMD免疫效果监测与分析

在2015-2016年期间,每季度对辖区内母猪存栏量50头以下、母猪存栏50头以上各3个猪场进行采样监测,每场采集20份血清样品,每季度采集血清样品120份,采用ELISA方法对2015-2016年梧州市规模猪场猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪伪狂犬病(PR)及口蹄疫(FMD)免疫抗体进行动态监测,结果表明:从季节上比较分析,口蹄疫、猪瘟与猪伪狂犬病免疫抗体消长随季度呈现波浪式变化,其中第二、四季度分别比第一、三季度的抗体合格率高,猪蓝耳病免疫抗体第二、三、四季度抗体合格率比第一季度抗体合格率高;从年份比较分析,2016年口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬病与猪蓝耳病免疫抗体整体水平优于2015年抗体水平。

枸杞多糖调控口蹄疫重组腺病毒疫苗诱导DC及T细胞亚群的研究

近年来,随着许多病毒性疾病的发展,社会对于新型疫苗的研发迫在眉睫。与传统疫苗相比,新型疫苗具有安全可靠的优点,但其免疫原性较弱的特点也十分突出,因此,研究出安全稳定有效的免疫调节剂来增强疫苗的免疫效果成为研究学者们共同的关注点。枸杞是传统的名贵补益中药,枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)是其中的主要生物活性成分,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种生物学作用。本研究通过体内实验观察LBP对口蹄疫重组腺病毒疫苗(rAd5VP1)诱导小鼠脾脏树突状细胞(Dendritic cells,DC)成熟、辅助性T细胞1(T helper cells 1,Th1)、辅助性T细胞2(T helper cells 2,Th2)、滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh)及调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg)分化的免疫调节作用,为阐明LBP免疫调节的新机制提供实验依据。6周龄的雌性BALB/c小鼠随机分为5组,每组5只,所有小鼠均行腹腔注射rAd5VP1,同时分别给予低剂量(10mg/kg·d)、中剂量(20mg/kg·d)、高剂量(40mg/kg·d)的LBP,阴性对照组和阳性对照组分别给予磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)(1mg/kg·d)。免疫7d后,应用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测小鼠脾脏DC(CD11c+MHCⅡ+CD86+)、Th1细胞(CD4+IFN-γ+)、Th2细胞(CD4+IL-4+)、Tfh细胞(CD4+CXCR5+)及Treg细胞(CD4+CD25+FoxP3+)的数量与比例。结果表明,与PBS组相比,LBP能明显诱导DC的成熟,DC表面的共刺激分子CD86的表达量明显升高;LBP能明显促进Th2细胞、Tfh细胞的分化,LBP对Th1细胞的分化无明显影响,LBP能抑制Treg细胞的分化。本研究证实LBP作为疫苗免疫调节剂,可调控DC及Th细胞亚群的分化而发挥免疫调节作用,为LBP的免疫调节机制提供理论依据。

FMD、HP-PRRS及SCF三种疫苗不同免疫组合同时分点免疫的抗体水平检测

为探索口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)和高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)三种疫苗以不同组合方式对猪免疫的效果,选择新疆生产建设兵团第六师某规模化猪场30日龄左右仔猪150头,随机分成5组,对三种疫苗的5种免疫组合方式分别进行了免疫试验,检测免疫后各时间点FMD、CSF和HPPRRS的抗体水平,对不同免疫组合方式的免疫效果进行评估。结果表明:CSF、FMD、PRRS三种疫苗同时分点免疫注射的免疫程序可以获得较好的免疫效果,同时还可以减轻基层动物防疫员的劳动量,建议在散养户和小规模养殖场可以采用此种联合免疫的方法;CSF和FMD同时免疫的程序与单独注射CSF和FMD疫苗的抗体水平和抗体消长规律一致,甚至比单独注射组免疫效果还好,与其他几种免疫程序组相比,CSF和FMD同时免疫的程序可以获得最好的免疫效果,建议大型规模养殖场、公路沿线和疫区采用这种免疫程序。

FMD、CSF、PRRS联合免疫方案在临高猪上的效果观察

为进一步验证多重免疫同时进行的可行性,以减少生猪的疫苗接种次数及应激反应,试验针对临高猪开展口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)三种疫苗同时免疫效果观察。结果表明:采用FMD、CSF、PRRS三种疫苗同时分点注射在临高猪上的免疫效果未达到预期目标,说明猪FMD、CSF、PRRS三种疫苗同时分点注射免疫不适合在临高猪上推广应用。

FMD、CSF、PRRS三种疫苗同时分点免疫效果观察

为减少生猪疫苗接种次数及应激反应,探讨多重免疫同时进行的可行性,试验针对杜长大猪,开展了口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)三种疫苗同时免疫的效果观察。结果表明:采用猪FMD、CSF、PRRS三种疫苗同时分点注苗组的效果到达了预期目标,可以推广应用。