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口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒制备工艺及体外释药规律研究
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作者 周长江 戴蔚荃 +1 位作者 仲维清 孙树汉 《中南药学》 CAS 2005年第3期135-138,共4页
目的优选制备口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(DNAPBCANP)的工艺条件。方法以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体,用乳液聚合二步法制备不同配方的DNAPBCANP,采用正交设计实验法,以包封率为指标,综合分析实验结果确定工艺条件。结果优选... 目的优选制备口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(DNAPBCANP)的工艺条件。方法以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体,用乳液聚合二步法制备不同配方的DNAPBCANP,采用正交设计实验法,以包封率为指标,综合分析实验结果确定工艺条件。结果优选出的制备工艺条件为:在pH值为3的条件下制备聚氰基丙烯酸正丁酯空白纳米粒,以2mL·min-1的速度将1份口蹄疫DNA疫苗溶液滴入到5份空白纳米球乳液中,继续搅拌8h。运用优化的工艺条件制备的纳米粒平均粒径为(78.12±16.5)nm,分布范围为30~150nm,平均包封率为51.25%±3.92%。体外缓释试验表明释药符合双相动力学规律。结论所确定的制备口蹄疫DNA疫苗聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的工艺条件稳定、可行。 展开更多
关键词 口蹄疫dna疫苗纳米粒 聚氰基丙烯酸正丁酯 正交实验设计 制备工艺 体外释药规律
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IL-2真核质粒对乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗猪体免疫反应的分子佐剂效应 被引量:4
2
作者 李云岗 田夫林 +4 位作者 周开锋 高凤山 李新生 马慧玲 夏春 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期73-78,共6页
为研究猪IL-2真核表达质粒对乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗(Lactobacillus acidophilusSFMD-1)猪体免疫的分子佐剂效应,通过RT-PCR方法从猪的肠系膜淋巴结克隆猪IL-2基因,基于pRc/CMV2载体,构建编码猪IL-2的真核表达质粒pCSIL2,以RT-PC... 为研究猪IL-2真核表达质粒对乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗(Lactobacillus acidophilusSFMD-1)猪体免疫的分子佐剂效应,通过RT-PCR方法从猪的肠系膜淋巴结克隆猪IL-2基因,基于pRc/CMV2载体,构建编码猪IL-2的真核表达质粒pCSIL2,以RT-PCR方法分析了该质粒转染PK15细胞以后的mRNA表达。结果显示预期的429 bp IL-2带仅出现在pCSIL2转染细胞。试验猪单独免疫L.acidophilusSFMD-1或者联合免疫pCSIL2质粒,后者能够增强FMDV-VP1特异的T细胞和B细胞反应,免疫后5周,单独免疫组和联合免疫组的抗体水平分别为1.50和1.66;免疫后6周,抗体水平分别上升到1.83和2.28;在T细胞增殖试验中,L.acidophilusSFMD-1单独免疫组和pCSIL2联合免疫组的刺激指数(SI)分别为2.00和2.70。结果表明,联合应用IL-2真核表达质粒是改进乳酸杆菌载体口蹄疫VP1 DNA疫苗免疫原性和效能的有效方法。 展开更多
关键词 dna疫苗 乳酸杆菌 IL-2 基因 分子佐剂
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以多层磷酸钙纳米颗粒为载体的O型口蹄疫病毒VP1和VP2基因重组疫苗的构建 被引量:1
3
作者 唐冬梅 付丽新 +2 位作者 周彪 郭政宏 严亨秀 《动物医学进展》 北大核心 2015年第7期1-6,共6页
构建以多层纳米颗粒为载体的O型口蹄疫病毒基因重组疫苗。在GenBank中查询编码O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1 141-160氨基酸和VP2 1-33氨基酸的核苷酸序列,合成该两段基因的重组基因并命名为VP1-VP2基因。再通过PCR扩增VP1和VP2基因,并将VP1、... 构建以多层纳米颗粒为载体的O型口蹄疫病毒基因重组疫苗。在GenBank中查询编码O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1 141-160氨基酸和VP2 1-33氨基酸的核苷酸序列,合成该两段基因的重组基因并命名为VP1-VP2基因。再通过PCR扩增VP1和VP2基因,并将VP1、VP2及VP1-VP2基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1中,构建3种重组真核表达质粒(pcDNA3.1-VP1、pcDNA3.1-VP2和pcDNA3.1-VP1-VP2),并分别对重组质粒进行酶切、PCR鉴定及测序分析。将构建的重组质粒制备成多层磷酸钙纳米颗粒,检测其粒径、稳定性及体外转染效率。重组质粒酶切结果显示,基因片段大小与预期相符;测序显示与GenBank中相应基因序列同源性为100%。制备的多层纳米颗粒粒径约为530nm;在4℃过夜保存后,溶液均匀透明;体外转染HEK293细胞的转染效率在9.6%左右。成功构建了以多层磷酸钙纳米颗粒为载体的O型口蹄疫病毒VP1和VP2基因重组质粒,为进一步研究该基因疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 多层纳米 VP1基因 VP2基因 磷酸钙 基因疫苗
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口蹄疫病毒复合多表位DNA疫苗的设计及构建 被引量:11
4
作者 马鸣潇 金宁一 +8 位作者 刘慧娟 鲁会军 田明尧 金明兰 沈国顺 张林 李旭 计越 金扩世 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期190-194,共5页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT及其DNA疫苗。方法以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和Asia1型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,非结构蛋白3ABC上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白VP4上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建表达盒。将构建好的表达盒OAAT克隆到真核表达载体pVAX1 PCMV启动子下游,构建三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT,并用Western blot和IFA方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。结果通过InsightⅡ软件同源建模和DNAStar5.0软件分析表明,所构建的FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT理论上符合设计要求,且在真核细胞获得了正确表达。结论已成功设计FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,并构建了三价口蹄疫核酸疫苗pVAX1-OAAT。 展开更多
关键词 病毒 复合多表位抗原 表达盒 dna疫苗
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以猪IgG重链恒定区为抗原载体的抗口蹄疫病毒DNA疫苗的研制 被引量:18
5
作者 李光金 严维耀 +2 位作者 徐泉兴 盛祖恬 郑兆鑫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期322-324,共3页
The peptide of amino acids 141~160 of VP1 protein of foot\|and\|mouth disease virus (FMDV) is a major B cell epitope and the peptide of amino acids 21~40 is an important T cell epitope.In this study,the DNA fragment... The peptide of amino acids 141~160 of VP1 protein of foot\|and\|mouth disease virus (FMDV) is a major B cell epitope and the peptide of amino acids 21~40 is an important T cell epitope.In this study,the DNA fragments of 141~160 and 21~40 peptide epitopes of a strain of type O FMDV was chemically synthesized and arranged into a tandem repeat 141~160 (20AA)\|21~40 (20AA)\|141~160 (20AA).This tandem sequence was fused to the 3′ end of the heavy chain constant region gene of swine immunoglobulin G and was then cloned into mammalian expression vector pCDM8 to form a recombinant plasmid pCDM8FZ3.After pCDM8FZ3 was inoculated intramuscularly into guinea pigs,it elicited a neutralizing antibody response and a specific spleen T cell proliferative response,and 66% of the vaccinated animals were protected from viral challenge.Our study indicated that the heavy chain constant region of swine IgG can act as the carrier protein for FMDV peptide epitopes,and pCDM8FZ3 is a potential DNA vaccine candidate to prevent FMDV infection. 展开更多
关键词 病毒 dna疫苗 球蛋白G 抗原
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口蹄疫病毒多价DNA疫苗的构建及其免疫原性 被引量:7
6
作者 常巧呈 霍晓伟 +9 位作者 李太元 金宁一 鲁会军 郑敏 谷长维 牟伟锋 胡博 于长勇 马鸣潇 丛艳昭 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期876-879,共4页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)多价DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法以复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C基因为基础,构建FMDV多价DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C,并用间接免疫荧光(IFA)方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。进一... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)多价DNA疫苗,并检测其免疫原性。方法以复合多表位表达盒OAAT及AsiaⅠ型FMDV的P1-2A-3C基因为基础,构建FMDV多价DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C,并用间接免疫荧光(IFA)方法检测目的蛋白在HeLa细胞中的表达。进一步进行小鼠免疫试验,并应用ELISA法检测小鼠血清抗体,ELISPOT检测小鼠脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌水平,流式细胞术检测脾T淋巴细胞亚群数量,淋巴细胞转化试验检测特异性淋巴细胞增殖水平。结果所构建的FMDV多价DNA疫苗在HeLa细胞中获得了正确表达。免疫小鼠后,血清特异性抗体水平、脾淋巴单细胞IFN-γ的分泌、脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+的数量及特异性淋巴细胞增殖水平均显著提高。结论已成功构建了FMDV多价DNA疫苗,并诱导小鼠产生了特异性的细胞免疫和体液免疫应答。 展开更多
关键词 病毒 多价dna疫苗 体液免 细胞免
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抗O型口蹄疫病毒DNA疫苗的建立 被引量:6
7
作者 赵凯 邹仕平 +5 位作者 张震宇 郑兆鑫 徐泉兴 尤永进 朱彩珠 冯霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期89-92,共4页
目的 :研制抗“O”型FMDV的DNA疫苗。方法 :以“O”型口蹄疫病毒 (FMDV)Vp1免疫活性肽基因串联片段取代猪IgGH链可变区的CDR3区 ,并与真核表达载体pCDM8相连构建表达载体pCDM FH。用表达载体pCDM FHDNA对豚鼠及猪进行肌肉注射 ,检测该... 目的 :研制抗“O”型FMDV的DNA疫苗。方法 :以“O”型口蹄疫病毒 (FMDV)Vp1免疫活性肽基因串联片段取代猪IgGH链可变区的CDR3区 ,并与真核表达载体pCDM8相连构建表达载体pCDM FH。用表达载体pCDM FHDNA对豚鼠及猪进行肌肉注射 ,检测该疫苗的免疫效果。结果 :该DNA疫苗可诱导出抗FMDV专一性的中和抗体及效应性T细胞。攻毒试验表明 ,DNA疫苗pCDM FH可使被免疫豚鼠及猪发病推迟 ,症状减轻。结论 :该DNA疫苗可激发明显的免疫应答及保护效果。 展开更多
关键词 FMDV dna疫苗 核酸疫苗 IGG H链 病毒
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口蹄疫病毒重组鸡痘病毒活载体疫苗和DNA疫苗免疫牛的试验研究 被引量:4
8
作者 郑敏 金宁一 +6 位作者 秦晓冰 金扩世 刘棋 田明尧 郭建顺 徐敬龙 李昌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期158-162,共5页
将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1-2A和猪白介素18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和... 将本课题组构建的共表达FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因以及蛋白酶3C基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及共表达P1-2A和猪白介素18基因的重组DNA疫苗(pVIRIL18P1),分别以单独及混合的共3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导牛产生特异性的体液及细胞免疫应答。其中重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫组以及联合免疫组(vUTAL3CP1/pVIRIL18P1,pVIRIL18P1/vUTAL3CP1)诱导的中和抗体滴度分别达到1∶64、1∶64和1∶54,已接近于常规灭活疫苗水平(1∶90),而特异性的T淋巴细胞增殖反应则比后者高得多(P<0.01)。该研究结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 dna疫苗 体液免 细胞免
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以乳酸杆菌为载体的口蹄疫病毒VP1基因DNA疫苗猪体免疫试验 被引量:4
9
作者 李云岗 田夫林 +5 位作者 王会波 马慧玲 陈静 李新生 高凤山 夏春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期601-605,共5页
给猪口服和肌肉注射以乳酸杆菌为载体的口蹄疫病毒VP1基因DNA疫苗(L.acido SFMD-1),以正向间接血凝试验(IHA)和MTT方法分别检测了免疫后FMDV VP1抗体的动态变化和特异性T细胞增殖反应情况,并与商用FMD油佐剂疫苗、裸质粒FMDV VP1基因DN... 给猪口服和肌肉注射以乳酸杆菌为载体的口蹄疫病毒VP1基因DNA疫苗(L.acido SFMD-1),以正向间接血凝试验(IHA)和MTT方法分别检测了免疫后FMDV VP1抗体的动态变化和特异性T细胞增殖反应情况,并与商用FMD油佐剂疫苗、裸质粒FMDV VP1基因DNA疫苗诱导的特异性免疫抗体水平进行了比较。结果显示,口服组猪在免疫后第21d抗体效价达到了1∶2^(7.7),而肌肉注射组猪为1∶2^(3.3)。加强免疫后2周,口服免疫组抗体水平下降到1∶2^(5.3),到第3周快速上升到1∶2~8;与此相对应,肌肉途径免疫组猪抗体效价缓慢地从1∶2^(5.3)上升到1∶2^(6.7)。口服途径和肌肉注射途径的刺激指数(SI)分别为1.93和2.00,2种免疫途径都可以诱导特异性T细胞增殖反应。证实,该疫苗能够在猪体诱发VP1特异性T细胞和B细胞反应,以乳酸杆菌为载体是DNA免疫和预防猪口蹄疫的一种极有前景的方法。 展开更多
关键词 乳酸杆菌 dna疫苗
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白细胞介素-10分子佐剂增强口蹄疫DNA疫苗黏膜免疫效果研究 被引量:5
10
作者 王潇 王志钢 杜瑞平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期3045-3052,共8页
【目的】研究白细胞介素-10作为黏膜分子佐剂是否可以增强口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)的黏膜免疫应答。【方法】利用RT-PCR技术以Balb/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,扩增出小鼠的IL-10基因,并构建真核表达质粒proVAX-IL-10,通过鼻腔接种方式,... 【目的】研究白细胞介素-10作为黏膜分子佐剂是否可以增强口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)的黏膜免疫应答。【方法】利用RT-PCR技术以Balb/c小鼠脾脏组织总RNA为模板,扩增出小鼠的IL-10基因,并构建真核表达质粒proVAX-IL-10,通过鼻腔接种方式,将口蹄疫DNA疫苗(pcD-VP1)和真核表达质粒(proVAX-IL-10)共同免疫小鼠,用ELISA法检测免疫小鼠黏膜部位(肺脏、生殖道)sIgA滴度,免疫组织化学法检测气管、生殖道和小肠中sIgA的表达情况,CSFE染色法检测小鼠扁桃体淋巴细胞增殖反应水平,用胞内细胞因子染色法通过流式细胞仪检测扁桃体部位CD4+阳性T细胞内IFN-γ和IL-4的表达量。【结果】成功构建了proVAX-IL-10真核重组质粒,且重组质粒可以在BHK细胞中有效表达;将proVAX-IL-10与口蹄疫DNA疫苗pcD-VP1共同免疫小鼠后发现,与单独接种pcD-VP1相比,加入IL-10分子佐剂后,可以诱导更高水平的黏膜sIgA的表达及分泌,极大的提高了黏膜部位抗原特异性T细胞增殖反应水平以及CD4+T细胞中IL-4的表达量。【结论】IL-10作为分子佐剂,通过鼻腔黏膜免疫后,可以有效增强机体对口蹄疫DNA疫苗的黏膜免疫应答,对于预防口蹄疫病毒的感染和清除体内病毒起到重要的作用。 展开更多
关键词 病毒 dna疫苗 白细胞介素-1 0 黏膜免
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抗口蹄疫蛋白疫苗与DNA疫苗混合物的免疫原性研究 被引量:3
11
作者 赵凯 张震宇 +1 位作者 卢永干 郑兆鑫 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期5-8,共4页
目的 研究抗口蹄疫蛋白及DNA疫苗混合物免疫原性。方法 以O型口蹄疫病毒 (FMDV)VP1免疫活性肽基因串连片段取代猪IgGH链基因可变区的CDR3区构成融合基因。然后分别与原核表达载体pET2 8b及真核表达载体pCDM- 8构建抗口蹄疫蛋白疫苗pET... 目的 研究抗口蹄疫蛋白及DNA疫苗混合物免疫原性。方法 以O型口蹄疫病毒 (FMDV)VP1免疫活性肽基因串连片段取代猪IgGH链基因可变区的CDR3区构成融合基因。然后分别与原核表达载体pET2 8b及真核表达载体pCDM- 8构建抗口蹄疫蛋白疫苗pET2 8b -FH及DNA疫苗PCDM -FH。用蛋白疫苗 pET2 8b -FH和DNA疫苗 pCDM -FH及其混合物免疫猪后 ,用攻毒实验检测其效果。结果 攻毒后 ,抗口蹄疫蛋白疫苗 pET2 8b -FH及DNA疫苗pCDM -FH单独免疫能分别使猪发病推迟 10天和 1天 ,症状减轻 ;而混合疫苗免疫效果比阴性对照好而不及这两个疫苗单独免疫效果。结论 抗口蹄疫蛋白疫苗 pET2 8b -FH及DNA疫苗pCDM -FH单独免疫能使猪发病推迟 ,症状减轻 ;而混合疫苗免疫效果较差 ,免疫方法仍需改进。 展开更多
关键词 FMDV 蛋白疫苗 dna疫苗 病毒 FMD
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牛对表达口蹄疫病毒复合多表位基因的重组鸡痘病毒以及DNA疫苗联合免疫的免疫应答 被引量:2
12
作者 郑敏 金宁一 +5 位作者 田明尧 李昌 秦晓冰 刘棋 贾雷立 张林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期5-8,共4页
将构建的共表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTA2-OAT以及DNA疫苗pVRI-OAT,分别以vUTA2-OAT/vVTA2-OAT(首免/加强免疫)、pVRI-OAT/vUTA2-OAT(首免/加强... 将构建的共表达口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)复合多表位基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTA2-OAT以及DNA疫苗pVRI-OAT,分别以vUTA2-OAT/vVTA2-OAT(首免/加强免疫)、pVRI-OAT/vUTA2-OAT(首免/加强免疫)和vUTA2-OAT/pVRI-OAT(首免/加强免疫)等3种方式接种牛,然后通过间接ELISA、中和试验和T淋巴细胞增殖试验评价其诱导的特异性体液和细胞免疫水平。结果表明,这3种方式均能诱导牛产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答,其中pVRI-OAT/vUTA2-OAT联合免疫方式的免疫效果最佳,诱导的中和抗体达1∶64,已接近于常规灭活疫苗免疫方式,而且其可以诱导比灭活疫苗免疫方式高得多的细胞免疫水平(P<0.01)。上述试验结果为进一步进行免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。 展开更多
关键词 (FMD) 重组鸡痘病毒(rFPV) dna疫苗 体液免破 细胞免
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重组鸡痘病毒和DNA疫苗对口蹄疫病毒的豚鼠免疫保护 被引量:3
13
作者 郑敏 金宁一 +4 位作者 张洪勇 李昌 田明尧 马鸣潇 贾雷立 《中国病毒学》 CSCD 2005年第4期379-382,共4页
将构建的携带FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C编码基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及编码FMDVP1-2A基因和猪IL-18基因的重组DNA疫苗pVIRIL18P1,分别以单独和混合的方式给豚鼠进行2次免疫,然后测定FMDV特异性结合抗体、中和抗体和... 将构建的携带FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C编码基因的重组鸡痘病毒活载体疫苗vUTAL3CP1以及编码FMDVP1-2A基因和猪IL-18基因的重组DNA疫苗pVIRIL18P1,分别以单独和混合的方式给豚鼠进行2次免疫,然后测定FMDV特异性结合抗体、中和抗体和T淋巴细胞增殖反应,并用250ID50的FMDV进行攻击,观察其保护效果。结果表明这2种基因工程疫苗均能诱导豚鼠产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答。其中以vUTAL3CP1两次免疫组的效果最好,其诱导的抗体水平已接近于常规灭活疫苗,而细胞免疫水平则比后者高得多。攻击保护结果表明该组完全保护率可达3/4,而另外两组也具有一定保护效果。上述研究结果为进一步进行大动物免疫攻毒试验,并最终筛选出最佳疫苗和免疫程序奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 dna疫苗 病毒 豚鼠 保护力
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口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响 被引量:2
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作者 郭慧琛 孙世琪 +7 位作者 云涛 张腾国 包慧芳 陈应理 马军武 刘湘涛 刘在新 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第3期12-17,共6页
将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA... 将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化 ,并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明 ,FMDDNA疫苗与 3D蛋白共同免疫豚鼠后 ,抗体水平没有明显提高 ,攻毒后的保护率为 2 5 %。 展开更多
关键词 病毒 3D蛋白 dna疫苗 效果
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融合表达牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因和O型口蹄疫病毒P12A3C基因的DNA疫苗的构建及其免疫应答 被引量:3
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作者 陈关平 吴涛 +1 位作者 黄勤锋 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期973-977,共5页
用小鼠模型评价融合表达牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因和O型口蹄疫病毒P12A3C基因的DNA疫苗和不同免疫策略的免疫应答。用PCR方法扩增牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因和O型口蹄疫病毒P12A3C基因,分别克隆到pMD18-T载体并测序验证正确后将其克隆到质粒p... 用小鼠模型评价融合表达牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因和O型口蹄疫病毒P12A3C基因的DNA疫苗和不同免疫策略的免疫应答。用PCR方法扩增牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因和O型口蹄疫病毒P12A3C基因,分别克隆到pMD18-T载体并测序验证正确后将其克隆到质粒pcDNA的相应位点获得质粒pcDNA-VP22-P12A3C。然后将BALB/c小鼠分成7组进行免疫。结果表明,DNA疫苗pcDNA-VP22-P12A3C诱导的细胞免疫水平超过了灭活疫苗,DNA疫苗与灭活疫苗联合免疫组体液免疫水平接近灭活疫苗组而细胞免疫水平远高于灭活疫苗组,为进一步研究VP22和P12A3C融合表达的基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型VP22基因 O型病毒P12A3C基因 dna疫苗 应答
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联用抗口蹄疫病毒重组多肽及DNA疫苗诱发豚鼠产生特异免疫应答
16
作者 李光金 吴永庆 +5 位作者 严维耀 徐泉兴 盛祖恬 尤永进 葛燕 郑兆鑫 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第6期1-4,共4页
选择一株O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位及 1 41~ 1 60位氨基酸残基两个抗原表位 ,组成串联结构 1 41~ 1 60 ( 2 0AA) 2 1~ 40 ( 2 0AA) 1 41~ 1 60( 2 0AA) ,并与大肠杆菌β 半乳糖苷酶相连 ,在大肠杆菌中表达了... 选择一株O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位及 1 41~ 1 60位氨基酸残基两个抗原表位 ,组成串联结构 1 41~ 1 60 ( 2 0AA) 2 1~ 40 ( 2 0AA) 1 41~ 1 60( 2 0AA) ,并与大肠杆菌β 半乳糖苷酶相连 ,在大肠杆菌中表达了此融合蛋白。同时将编码此融合蛋白的基因克隆进真核表达载体中 ,构建成重组表达质粒 pCDM8FZ1。将pCDM8FZ1DNA与融合蛋白混合 ,免疫豚鼠一次 ,观察豚鼠产生免疫应答情况。结果显示 ,豚鼠可产生抗FMDV中和抗体及特异性T细胞增殖反应 ,部分豚鼠能抵抗FMDV的攻击 ,保护率为 50 % ,证明将DNA疫苗与重组多肽疫苗结合起来作一次免疫 ,是可望用于预防FMDV感染的新途径 ,值得进一步探索。 展开更多
关键词 病毒 dna疫苗 苗组多肽疫苗 应答 预防 大肠杆菌 接种
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口蹄疫DNA疫苗海藻酸钠微球的制备及体外释放的研究 被引量:6
17
作者 刘善奎 钟延强 +2 位作者 王芳 孙树汉 高申 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2004年第2期107-110,共4页
目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥 离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其... 目的 :研制DNA疫苗海藻酸钠微球 ,并对其体外释药特性进行考察。 方法 :以口蹄疫DNA疫苗为DNA疫苗的模型药物 ,采用喷雾干燥 离子交联法制备DNA疫苗海藻酸钠微球 ;考察粒径大小、外观、载药量等理化特性 ;考察微球的体外释药特性及其影响因素。 结果 :微球球形圆整 ,分散性好 ,平均粒径为 11.9μm ,载药量为 5 % ,产率为 5 3.2 %。微球的体外释放速率受载药量影响较小 ,而壳聚糖的交联固化度增高 ,微球的体外释放速率变慢。 结论 :以生物降解材料海藻酸钠、壳聚糖 ,用喷雾干燥法制备DNA疫苗微球 ,不需要超声和有机溶剂 ,因而有利于DNA疫苗结构和功能的稳定性 ;工艺简便 ,易于工业化生产。 展开更多
关键词 dna疫苗 海藻酸钠 微球 喷雾干燥 体外释药
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甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球作为口蹄疫病毒核酸疫苗递送载体的特性评价
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作者 李显 张中旺 +3 位作者 张富东 吕建亮 李嘉豪 潘丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3557-3568,共12页
旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的... 旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物(mannose modified chitosan,MCS),然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球(MCS-PLGA-NPs)。采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-NPs粒径分布和表面电势(zeta)、扫描电镜考察其形态、琼脂糖凝胶电泳观察其对质粒的吸附和吸附质粒后抵抗核酸酶降解能力、CCK-8法检测MCS-PLGA-NPs的细胞毒性、激光共聚焦观察巨噬细胞对MCS-PLGA-NPs-质粒DNA复合物的摄取、荧光显微镜和Western blot验证MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA在细胞中的表达。元素分析结果表明,成功制备了取代度为5%~10%的MCS。纳米粒径测定和扫描电镜结果表明,MCS-PLGA-NPs的zeta为正值、粒径分布均匀且形态规则呈球形。琼脂糖凝胶电泳结果显示,MCS-PLGA-NPs吸附质粒的能力随着其质量的增加而增强并且可以在一定程度上抵抗核酸酶降解质粒DNA。在细胞毒性试验中,不同浓度的MCS-PLGA-NPs与RAW264.7细胞共孵育24 h后,细胞存活率仍在85%以上。在细胞摄取试验中,用激光共聚焦显微镜可以明显观察到质粒DNA结合到纳米微球表面被RAW264.7细胞摄取。荧光显微镜和Western blot试验证明MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA可以在细胞中进行表达。综上表明,本研究成功制备了MCS以及具有递送核酸疫苗能力的MCS-PLGA-NPs,为FMDV核酸疫苗的递送研究提供了新的方向和见解,也为该递送载体携带特定抗原靶向抗原递呈细胞表面甘露糖受体以及应用于动物免疫的研究奠定基础。 展开更多
关键词 病毒 甘露糖修饰的壳聚糖 壳聚糖接枝聚乳酸-羟基乙酸共聚物 纳米微球 递送载体 核酸疫苗
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新型纳米佐剂用于口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗的研究 被引量:3
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作者 王永林 武勇 赵卓 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期236-238,共3页
采用新型纳米佐剂按照不同比例配制口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗,对疫苗的各项指标进行测定,同时免疫接种SPF豚鼠,通过测定血清抗体效价对新型纳米佐剂的免疫增强效果进行初步评估。结果初步表明新型佐剂疫苗黏度低易注射、稳定性... 采用新型纳米佐剂按照不同比例配制口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗,对疫苗的各项指标进行测定,同时免疫接种SPF豚鼠,通过测定血清抗体效价对新型纳米佐剂的免疫增强效果进行初步评估。结果初步表明新型佐剂疫苗黏度低易注射、稳定性好、安全、免疫副反应小、其免疫效果与采用ISA206佐剂制备的口蹄疫灭活疫苗免疫效果相当。 展开更多
关键词 灭活疫苗 新型纳米佐剂 新型纳米佐剂 效果
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口蹄疫病毒的基因枪DNA疫苗 被引量:1
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作者 胡薛英 《畜牧兽医科技信息》 2001年第11期14-14,共1页
口蹄疫是对偶蹄兽非常危险的疾病。尽管有免疫计划。在中东及世界上一些地区仍造成极大危害。本试验用口蹄疫病毒(FMDV)的表达构建物作为疫苗,检测此疫苗免疫猪的保护效果。
关键词 病毒 dna疫苗 基因枪 巨细胞病毒 保护效果 疫苗 脑心肌炎病毒 荧光 FMDV
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