口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒与其改进型试剂盒的比对试验

为了评估田东县动物疫病预防控制中心兽医实验室检验质量,了解同一检测项目不同检测试剂盒检验结果的差异情况,实验室于2020年11月25日进行了口蹄疫O型抗体检测试剂盒比对试验。目的在于检验口蹄疫O型抗体不同检测试剂盒对检验结果的影响及敏感度,以及时发现存在问题,解决问题,不断提高实验室检测能力水平。

两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究

为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性,对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒和固相竞争ELISA检测试剂盒进行了检测,并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。结果表明,两种试剂盒在应用方面各有优劣,口蹄疫固相竞争ELISA检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点,更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测;口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值,更适用于口蹄疫抗体定量检测。

O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。

O型口蹄疫抗体不同检测方法的检测结果比较分析

为更好开展O型口蹄疫免疫质量评估,客观评价不同抗体检测方法的相关性和特点,试验选择猪、牛、羊血清样品299份和2个规模猪场日常检测血清样品180份,采用正向间接血凝(IHA)、液相阻断ELSIA(Lp B)和VP1结构蛋白ELISA(VP1)三种方法进行0型口蹄疫免疫抗体检测。结果显示,采用IHA方法检测的免疫抗体更符合临床实际免疫变化规律。采用合成肽疫苗免疫的猪场不宜采用IHA方法检测抗体,但可采用Lp B和VP1方法检测,两种方法检测结果符合率较高。

猪场口蹄疫O型病毒抗体检测与分析

为切实了解猪场口蹄疫抗体水平,科学评价口蹄疫疫苗免疫效果,我疫控中心在3个猪场采集血清,用猪口蹄疫O型病毒VPI结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验的方法检测口蹄疫O型病毒VPI结构蛋白抗体,对免疫结果进行评价,检测结果 3个猪场的口蹄疫O型病毒VPI结构蛋白抗体合格率都比较高,均超过了国家规定的大于80%的标准,群体免疫合格率100%,整体免疫效果很好,说明猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果确实有效。

安顺市平坝区2020年春季散养户猪O型口蹄疫免疫抗体监测分析

为评估平坝区生猪散养户使用0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果,采用间接酶联免疫吸附试验对全区9个乡镇送检的164份猪血清样品进行猪O型口蹄疫VP1结构蛋白抗体检测。结果:检测免疫抗体合格数154份,不合格数10份,合格率为93.9%,免疫抗体合格率达到农业农村部规定≥70%的要求。结论:O型口蹄疫合成肽疫苗能够诱导生猪产生高水平的免疫抗体,具有良好的免疫保护效果。

固相阻断ELISA法检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度评定

目的:以口蹄疫病毒O型抗体(固相阻断ELISA法)检测的不确定度评定为例,以两种方法评定检测的不确定度。方法:分别使用“影响因素分析法”和“对照样品法”对检测口蹄疫病毒O型抗体的不确定度进行评定。结果:“影响因素分析法”的合成不确定度为0.1297,扩展不确定度为0.2593;“对照样品法”的合成不确定度为0.1040,扩展不确定度为0.2080。结论:对新方法进行不确定度评定时,“影响因素分析法”更适用,可帮助检测员更了解试验过程及注意事项,而“对照样品法”直接评估该试验过程的合成不确定度,减少大量计算过程,快速得出结论。

猪场口蹄疫与猪瘟抗体水平监测与分析

为了解柳城县某猪场口蹄疫O型抗体和猪瘟抗体水平情况,2016年共采集10次总计332份血样分别检测口蹄疫O型和猪瘟抗体水平。检测方法是用液相阻断-酶联免疫吸附法。检测结果是口蹄疫O型抗体合格率分别是91.6%、90.0%、96.6%、96.6%、93.3%、86.6%、76.6%、76.6%、81.2%、86.6%,平均合格率是87.9%,猪瘟抗体检测合格率分别是95.0%、93.3%、100%、96.6%、96.6%、86.6%、100%、93.3%、100%、100%,平均合格率是96.0%。

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法,广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场在某肥育场进行了此次试验。试验猪分3组,分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型OS/99株灭活疫苗,并采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验(HI)分别对使用上述口蹄疫疫苗免疫效果进行检测。结果表明,猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后,用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率达到100%;用正向间接血凝试验方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型OS/99株灭活疫苗后,用VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率只有30%;用HI方法进行检测,抗体阳性率为60%。

不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测

为更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法,浦口区兽医站在某猪场进行了此次试验。试验猪分3组,分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗、猪口蹄疫O型(OZK/93株+OS/99株)灭活疫苗,并采用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒、口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验(HI)分别对使用上述口蹄疫苗免疫效果进行检测。结果表明,猪注射口蹄疫O型合成肽疫苗后,用猪O型口蹄疫VPI抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率达到100%;用正向间接血凝和液相阻断ELISA方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。免疫猪口蹄疫O型(OZK/93株+OS/99株)灭活疫苗后,用VPI抗体检测试剂盒检测,抗体阳性率只有40%;用HI方法进行检测,抗体阳性率为75%;用液相阻断ELISA方法进行检测,抗体阳性率为70%。

复合菌培养物及酵母类多糖对羔羊免疫功能影响的研究

为研究复合菌培养物及复合酵母多糖对羔羊免疫功能的影响,本实验选取150只40~50日龄健康羔羊,随机分为5组,在实验开始时同时给各组羊免疫O型口蹄疫(FMD)疫苗并饲喂实验饲料,对照组饲喂基础饲粮,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在基础饲粮上分别添加复合菌培养物(50 g/kg)、复合酵母多糖(10 g/kg)、β-葡聚糖和甘露聚糖均为2 g/kg。分别于实验期第1 d、30 d和60 d采血,分别采用ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、干扰素-γ (IFN-γ)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)含量及O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体效价(1 d、15 d和30 d)。结果显示,第1 d和30 d各组各检测指标差异不显著;第60 d,与对照组相比,Ⅰ组羔羊血清中TNF-α、IFN-γ、 IL-4、IL-1β、IL-2、IL-6及LZM、ACP含量及O型FMDV抗体效价均显著升高(P<0.05);Ⅱ组羔羊血清中LZM、IL-4及ACP含量显著提高(P<0.05);Ⅲ组羔羊血清中IL-1β、IL-6、IL-4、IFN-γ、LZM、ACP含量及O型FMDV抗体效价均显著升高(P<0.05);Ⅳ组羔羊血清中IL-4含量显著升高(P<0.05)。分别对上述时间点采集的抗凝血裂解红细胞后加入各荧光标记的抗体,采用流式细胞术检测各组羊外周血T淋巴细胞亚群百分比及CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值。结果显示,与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组羔羊外周血CD4^(+)T淋巴细胞的百分比显著升高(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组羔羊外周血CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究首次证实添加复合菌培养物、复合酵母多糖和β-葡聚糖能够在一定程度上提高羔羊的天然免疫、体液免疫及细胞免疫反应,从而提高羔羊的抗FMD能力,且以复合菌培养物的效果最优,为复合菌培养物在羔羊养殖中的应用提供参考依据。

进口佐剂羊O型口蹄疫高效苗免疫程序的研究与应用

2002-2004年,应用新型合成肽口蹄疫诊断技术,开展了羊O型口蹄疫高效疫苗免疫程序的修正与推广试验。经过3年来的试验,初步摸清了羔羊母源抗体消长规律;确定了保护性抗体的临界值;在免疫监测基础上,制定出进口佐剂羊口蹄疫疫苗免疫程序。通过生产中应用证明,该免疫程序是切实可行的。

2015—2017年猪场O型口蹄疫免疫效果调查报告

采用检测和调查相结合的方法对河南省某猪场2015—2017年O型口蹄疫抗体情况进行调查,总体抗体合格率为83.6%,超过国家规定的70%的抗体合格率标准;调查3个阶段种猪群抗体情况,种公猪抗体合格率最高,为95.2%;在不同月份调查检测中,12月抗体合格率最高,为92.2%。