古典猪瘟病毒LOM株感染性cDNA克隆的构建及其生物学特性

古典猪瘟病毒(CSFV)引起猪的高度传染性疾病,严重影响全球经济。古典猪瘟病毒LOM株是由1956年从日本宫城分离的低毒株致弱而成。本研究通过RT-PCR获得LOM株基因组的8个DNA片段,用于确定其全基因序列并构建全长cDNA克隆(Flc-LOM)。序列分析结果表明,与亲本序列相比,重组克隆Flc-LOM有8个位点突变,导致2个氨基酸替换。LOM和Flc-LOM的RNA转录本直接感染PK-15细胞,与亲本病毒LOM株相比,拯救的Flc-LOM病毒在细胞中生长缓慢。肌肉注射Flc-LOM安全,且在猪体内有高度的免疫原性,观察35d,无临床症状,无病毒传染给其他动物。接种后14d可检测到猪瘟病毒特异性中和抗体。在CSFV强毒株SW03攻毒后,接种Flc-LOM的猪获得了完全保护。因此,本研究构建的CSFV感染性克隆Flc-LOM可作为猪瘟候选疫苗。

人工授精传播古典猪瘟病毒

在荷兰1997—1998年古典猪瘟(CSF)流行期间,CSF病毒被引进了一个人工授精中心。虽然认识到CSF病毒通过污染精液进一步传播的危险。但是,由于该机构没有可靠的资料,没有能进行评定。为了确定CSF病毒能否随污染精液通过人工授精传播,进行了一项动物试验。

用ELISA检测古典猪瘟病毒抗体

德国研究人员对一种可以检测抗古典猪瘟病毒(CSFV)抗体的ELISA进行了评价。这种方法建立在血清抗体与直接抗古典猪瘟病毒糖蛋白gp55(E2)的CSFV特异性单克隆抗体的竞争上。本研究共用553份从用不同瘟病毒试验感染猪获得的血清。

用不同方法检测低毒古典猪瘟病毒

德国研究人员对用病毒分离、商品抗原ELISA、RT-PCR和流式细胞仪检测感染早期血液中低毒古典猪瘟病毒(CSFV)的效果进行了评价。

用间接ELISA检测古典猪瘟病毒抗体

最近,瑞士研究人员应用古典猪瘟病毒(CSFV)株Alfort/187的重组包膜蛋白E2(gp55)代替全病毒作ELISA抗原,检测猪血清中的CSFV抗体。用杆状病毒系统表达E2的糖基化和非糖基化形态。用间接ELISA的阻断ELISA比较这两种蛋白的抗原特性,糖基化形态蛋白的敏感性和特异性都比较高。用源于粗细胞提取物或亲和纯化的糖基化E2进行间接ELISA,对2719份猪血清进行测试。

RT-PCR法快速检测与鉴别诊断猪瘟病毒野毒株和三个兔化弱毒疫苗株的研究

基于猪瘟病毒基因组中富含T的插入序列建立起的简捷一步法RT-PCR技术,用于同步检测与鉴别野毒株和疫苗株。依据猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株3′NTR独立存在富含T的插入序列,设计特异性的扩增引物,使用简捷一步法RT-PCR或巢式PCR之后用琼脂糖凝胶电泳或多毛细管电泳方法进行分析,能检测到并且准确鉴别在临床标本中的古典猪瘟病毒野毒株和兔化猪瘟疫苗株。这些检测技术至少可用于3个兔化弱毒疫苗株LPC、HCLV和C-株的检测。野毒株RT-PCR检测限量是6.3TCID50/mL,巢式PCR检测限量是0.63TCID50/mL。在前一次研究中,在猪瘟兔化弱毒疫苗株的基因组的3′NTR发现有12～13nt的富含T的插入序列;本次研究中,在LPC/PRK和LPC/TS兔化疫苗株的基因组中发现2个长为42和36nt富含T的插入序列。这些长为12、36、42nt富含T的插入序列增加PCR片段的大小,有利于遗传标记对猪瘟病毒野毒型和不同兔化疫苗株间的快速检测和鉴别。

猪瘟病毒传播、发病的实验观察

比利时兽医学博士H.Laevens等对古典猪瘟病毒(CSFV)的传播、发生及抗体应答做了详细地实验观察,在一隔离的猪场内有4个猪圈:中间1个,周围邻接3个,每个圈内养6头肥猪,给位于中间圈内的1头猪经肌肉内及鼻内接种CSFV。现察内容:第一,观察通过污染衣物和鞋间接接触。

检测猪瘟病毒抗原的酶联免疫试验

加拿大学者Clavijo.A等建立了一种抗原捕捉酶测定法(CIA),用于直接从10％(W/V)组织悬液中检测古典猪瘟病毒(CSFV)抗原。建立本方法是以夹心法为基础,使用以生物素标记单克隆抗体。

2016年山东省猪病毒性疫病的病原学检测

为了解2016年山东省几种主要猪病毒性疫病的流行情况,采用荧光定量RT-PCR或PCR方法,对山东省部分猪场送检的730份病料进行了病原学检测。结果检出248份阳性病料,样品个体阳性检出率由高到低的病原依次为猪圆环病毒2型(13.02%)、猪蓝耳病病毒(10.41%)、古典猪瘟病毒(8.08%)、猪流行性腹泻病毒(7.26%)、猪伪狂犬病毒(3.84%)、猪轮状病毒(1.65%)、猪传染性胃肠炎病毒(0.14%);样品混合感染阳性率为8.08%,以猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒2型混合感染最为常见(3.02%)。本次病原学检测为山东省猪场病毒性疾病的综合防控提供了数据参考。

慢病毒介导的RNA干扰鉴定RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在猪上皮细胞识别RNA病毒中的作用

病原体识别受体是宿主抗病毒免疫反应所必需的,这些特异的受体能识别保守的病毒化合物并诱导Ⅰ型干扰素(IFN)和促炎细胞因子。本试验在猪细胞系PK-15中研究了RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在IFN-β对古典猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡性口炎病毒(VSV)和A型流感病毒(IAV)的识别中的作用。本研究鉴定了猪基因特异性小干扰RNA序列,并用慢病毒(LV)系统来表达相应的短发夹RNA,构建了基因表达下调细胞系,并检测基因表达下调水平与时间和IFN-β刺激的相关性。试验细胞经多次传代,报告基因eGFP的表达和目的基因的RNA减少水平都是稳定的,而后者相对变化较大。IFN-β诱导干扰素应答基因(如RIG-Ⅰ)表达,但其水平在试验细胞系中仍低于对照细胞。病毒介导的IFN-βmRNA反应结果表明,在PK-15细胞中,口蹄疫病毒的识别完全是由MDA-5介导的,而VSV和IAV主要由RIG-Ⅰ检测到,MDA-5也起到一定作用,CSFV是通过MDA-5,RIG-Ⅰ和TLR3识别。

嵌合CSFV可以保护猪并引起可区分抗体反应

荷兰研究人员根据古典猪瘟病毒（CSFV）疫苗株C的感染性DNA拷贝构造了3个嵌合CSFV/牛病毒性腹泻病毒（BDV）全长DNA拷贝。用BDVⅡ株5250的同源顺序代替E2和/或完全ERNS基因的抗原区。从猪肾细胞（SK6）的上清中直接回收代替ERNS的活嵌合病毒Flc11,用全长DNA转染T7细胞。