古病毒复活及生态学思考

本文从《现代环境监测技术》课程中微生物环境监测知识点出发,分析了古病毒的来源及复活原因,论述了古病毒的生存状态及其与人类的关系,阐明了现阶段人类对病毒的防治和利用情况。通过教学扩大学生知识面,增强学生社会责任感,实现知识传授与价值引领的双重效果。

灰斑古毒蛾核型多角体病毒三个晚期表达因子基因

将灰斑古毒蛾(Orgyiaericae)单粒包埋型核型多角体病毒(OrerSNPV)基因组DNA的各EcoRI酶切片段进行克隆和测序。序列分析结果表明EcoRI-M(3.0kb)与EcoRI-P片段(2.2kb)相连处含有编码晚期表达因子(LEF-2)的开放阅读框(ORF)。同时在EcoRI-E(约10kb)片段两端分别含有lef-3和lef-11基因的部分序列。lef-2基因编码区由648bp组成,可编码216个氨基酸残基的多肽,预计蛋白质分子量为23.7kDa。将OrerSNPVLEF-2氨基酸序列与其它已知的27种杆状病毒的LEF-2序列比较,发现OrerSNPV与其它鳞翅目NPVLEF-2氨基酸有35%～49%同源性,其中与BusuSNPV、MaMNPV-A、HezeSNPV、HearSNPV和LdMNPV同源性最高,和GV有26%～31%同源性,与膜翅目松柏锯角叶蜂NPV的同源性为32%,与库蚊杆状病毒的同源性只有23%。根据氨基酸序列绘制的分子进化树表明28种杆状病毒lef-2基因可以分为鳞翅目NPV、GV、膜翅目NeseNPV与双翅目CulexnigripalpusBaculovirus四个分支。OrerSNPVlef-2与BusuSNPV在进化树上关系最为接近,而OrerSNPVlef-3和LdMNPV的最接近,OrerSNPVlef-11则和SeMNPV的关系最接近。

灰斑古毒蛾核型多角病毒EcoR I-O片段的克隆与生物信息学分析

分析了灰斑古毒蛾核型多角体病毒（Orgyia ericae nucleopolyhedrovirus,OrerNPV）EcoR I-O片段分子生物学特征,为研究egt基因分子特性和杆状病毒遗传改良提供科学依据。克隆和分析了OrerNPVEcoR I-O片段所包含的2个基因,并应用生物软件对OrerNPV蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶（egt）基因及其启动子进行了比对分析。结果表明OrerNPVEcoR I-O片段包含egt基因和Ol-129同源基因,在该区域中编码egt基因的开放阅读框（ORF）由1 539个核苷酸组成,可以编码512个氨基酸,预计蛋白质分子质量为57.9 kDa。OrerNPV和NPVs之间的同源性为46%-89%,与白斑天幕毛虫核型多角体病毒（Orgyia leucostigmaNPV,OlNPV）egt基因同源性最高,达89%,与棉褐带卷叶蛾核型多角体病毒（Adoxophyes oranaNPV,AoNPV）同源性最低为46%;而OrerNPV和GVs之间的同源性为44%-55%,小于与NPVs之间的同源性;与昆虫UGT间同源性最低,与家蚕UGT间同源性为41%。EcoR I-O片段＋M13端含有编码OlNPV ORF129（Ol-129）Ol-129同源基因ORF,由597 bp个核苷酸组成,在其起始密码子ATG上游-64,-24 nt处各有1个TATA box,其推测的氨基酸序列与Ol-129同源性最高达81%,与LdNPV ORF127同源性最低,为40%。明确了OrerNPVEcoR I-O片段的序列特征,以及OrerNPVegt基因特性。

灰斑古毒蛾核型多角体病毒EcoRⅠ-U片段的克隆与序列分析

【目的】分析灰斑古毒蛾核型多角体病毒（Orgyia ericae nucleopolyhedrovirus，OrerNPV）EcoRⅠ-U片段分子生物学特征，为研究其分子特性及其在OrerNPV感染周期中的功能提供科学依据。【方法】克隆、分析OrerNPV EcoRⅠ-U片段所包含的若干基因，并应用生物软件对OrerNPV泛素基因（Ubi基因）进行了进化分析。【结果】OrerNPV EcoRⅠ-U片段包含Ubi基因、AcORF34同源基因和39K基因部分序列，在该区域中编码Ubi基因的开放阅读框（ORF）由246个核苷酸组成，可以编码81个氨基酸，预汁蛋白质分子质量为8．9ku。OrerNPV Ubi基因与苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）、家蚕核型多角体病毒（BmNPV）、薄荷灰夜蛾核型多角体病毒（RaouM-NPV）的同源性最高，均达92％，与小菜蛾颗粒体病毒（Plutella xylostella granulovirus，PxGV）的同源性最低，为62％。OrerNPV与AcMNPV、BmNPV和RaouMNPV的亲源关系最近。EcoR Ⅰ-U片段＋M13端含有编码39K基因（pp31）的部分序列，该多肽与10种NPV的39K序列有48％～52％的同源性。【结论】明确了OrerNPV EcoRⅠ-U片段的序列特征及OrerNPV Ubi在泛素蛋白家族中的进化关系。