可卡因-苯丙胺调节转录肽激活ERK促进海马神经元合成BDNF

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)上调大鼠海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)表达中的作用。方法:取18d的SD大鼠胚胎(E18),分离海马神经元,体外原代培养7d,以不同剂量CART处理细胞,用Western blotting方法分别检测不同处理时点p-ERK表达。再以ERK通路特异性阻断剂PD98059(25μmol/L)预处理细胞,进一步观察CART对p-ERK表达及BDNF合成的影响。结果:同对照组比较,CART处理组海马神经元p-ERK表达明显增高(P<0.01),BDNF合成增加。PD98059能阻断内源性ERK磷酸化、也能阻断CART诱导的ERK磷酸化,同时抑制CRAT引起的BDNF合成。结论:CART通过激活ERK促进海马神经元BDNF的合成,从而发挥神经营养作用。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对脑缺血-再灌注损伤小鼠脑保护机制的研究

目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注小鼠脑梗死体积、脑组织8-羟基-2'-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)水平的影响。方法选用10～12周龄的健康雄性昆明小鼠264只,随机分为缺血-再灌注组、CART组、等渗盐水组(各72只)及假手术组(48只)。建立大脑中动脉闭塞(MCAO)2 h,再灌注12、24、48及72 h模型(每时间点6只)。CART组于再灌注前经尾静脉注射CART55-102(0.5μg/kg,浓度12nmol/L;每24h重复给药1次),等渗盐水组给予同体积等渗盐水作对照。采用酶联免疫吸附实验双抗体夹心法测定脑组织中的8-OHdG和3-NT含量。结果①CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均小于缺血-再灌注组和等渗盐水组,其中24、48和72 h差异均有统计学意义(P<0.01)。②与假手术组比较,缺血-再灌注组、CART组及等渗盐水组在再灌注后各时间点脑组织中8-OHdG和3-NT含量均升高。③与缺血-再灌注组、等渗盐水组比较,CART组再灌注后各时间点脑组织中的8-OHdG和3-NT含量均有所下调。其中8-OHdG仅在12 h差异有统计学意义(P<0.05),3-NT在24、48及72 h时间点差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CART对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用可能与下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激有关。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血-再灌注模型小鼠皮质突触可塑性的影响

目的观察可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对缺血-再灌注(I/R)小鼠皮质突触可塑性的影响。方法选用10~12周龄的健康雄性清洁级昆明小鼠288只,按照随机数字表法完全随机分为I/R组(81只)、I/R+CART组(81只)和假手术组(63只)、假手术+CART组(63只)。建立大脑中动脉阻塞(MCAO)2h再灌注模型。I/R+CART组于再灌注前经尾静脉注射CART(0.5μg,200μl),假手术+CART组予以等剂量CART;每24小时重复给药1次。在实现再灌注后不同时间点(24h、72h和7d)采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测I/R组和I/R+CART组脑梗死体积;采用透射电镜观察各组不同时间点突触超微结构变化,并对突触形态学参数进行定量分析;采用Western Blot法观察再灌注72h皮质梗死周围区突触后致密物95(PSD-95)蛋白表达水平。结果(1)与假手术组比较,I/R组小鼠造模后24、72h和7d皮质切片中突触数量明显减少[3.37±0.38)个/μm^2比(7.04±0.55)个/μm^2,(2.89±0.22)个/μm^2比(6.89±0.04)个/μm^2,(3.25±0.18)个/μm^2比(6.78±0.42)个/μm^2;均P<0.05],PSD密度明显下降[24.4±2.8)nm比(47.3±6.1)nm,(23.8±3.7)nm比(46.5±7.5)nm,(24.6±2.2)nm比(48.1±5.1)nm:均P<0.05],突触间隙宽度增大[25.2±2.1)nm比(21.5±1.6)nm、(25.2±1.4)nm比(21.3±1.0)nm,(23.7±2.6)nm比(21.6±1.6)nm;均P<0.05];再灌注后72h时间点PSD-95蛋白表达水平下降(P<0.05);(2)与I/R组比较,I/R+CART组小鼠I/R后24、72h和7d脑梗死体积缩小[分别为(29.0±1.9)%比(36.3±1.4)%,(38.1±1.4)%比(47.6±2.7)%,(36.0±2.8)%比(42.5±2.0)%;均P<0.05];再灌注后72h时间点突触数量[4.32±0.35)个/μm^2]明显增多(P<0.05),PSD-95蛋白表达水平增加(P<0.05);再灌注后24、72 h和7d各时间点PSD密度[分别为(33.8±3.4)、(34.2±4.6)、(38.2±4.0)nm]增厚(均P<0.05);而各时间点突触间隙宽度差异无统计学意义(均P>0.05)。结论CART可缩小I/R小鼠脑梗死体积,改善缺血损伤后小鼠脑皮质神经细胞突触可塑性。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对缺血性脑损伤及其神经元半胱天冬氨酸蛋白酶活性的影响

目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽对缺血性脑损伤及其半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)活性的影响。方法将12只小鼠随机分为CART组与对照组,CART组小鼠侧脑室注射CART多肽,对照组注射生理盐水,然后制作脑缺血模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量梗死体积。体外培养小鼠皮质神经元,制作缺糖缺氧神经元模型,加入CART多肽或生理盐水,用噻唑蓝染色测细胞生存率,酶联法检测Caspase-3活性。结果CART组脑梗死体积[(0.225±0.044)mm3]显著小于对照组[(0.389±0.055)mm3](P<0.05);CART组神经元生存率(0.494±0.056)显著高于对照组(0.348±0.174)(P<0.05);CART组神经元Caspase-3活性(45674±9780)显著低于对照组(51172±2776)(P<0.01)。结论CART多肽可明显减少缺血性脑梗死体积,提高缺氧神经元的生存率,并降低缺氧神经元的Caspase-3活性。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠缺血/再灌注的保护作用及脑组织8-OHdG和3-NT含量变化的研究

目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(Cocain and am-phetamine regulated transcript peptides,CART)对脑缺血小鼠脑组织8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)和3-硝基酪氨酸(3-nitrtyrosine,3-NT)水平的影响。方法健康雄性昆明白小鼠随机分为4组:脑缺血组(每时间点n=15),CART组(每时间点n=15),生理盐水(NS)对照组(每时间点n=15),假手术组(每时间点n=12)。建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,CART组、生理盐水对照组于缺血2h即刻分别经尾静脉注射给予CART55-102(0.5μg)或同体积NS。在脑缺血不同时间点分别进行脑梗死体积和脑组织8-OHdG及3-NT水平检测。结果脑缺血后不同时间点脑组织8-OHdG及3-NT含量均被上调,CART可下调缺血后脑内8-OHdG及3-NT水平的升高,缩小梗死体积。结论 CART能通过下调8-OHdG及3-NT水平,抑制氧化应激,有效保护小鼠缺血性脑损伤。

可卡因-苯丙胺调节转录肽与肥胖关系研究进展

可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides,CART)是近年来发现的一种内源性神经肽,参与人和动物多方面的生理功能。CART在进食行为和体内能量调节方面的作用受到广泛的关注,本文就CART的分布、结构特点及其与肥胖关系的研究进展作一综述。

可卡因-苯丙胺转录调节肽与糖尿病关系研究进展

可卡因-苯丙胺转录调节肽(cocaine and amphetamineregulated transcript,CART)是一种丰富表达下丘脑及胰腺组织的神经肽。该文就CART基因表达与糖尿病易感性、CART对进食和胰岛素分泌的调节及其自身表达调控、CART受体及可能的受体后信号通路进行阐述,并提出CART与糖尿病关系,研究亟待解决的问题。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠吗啡依赖和复发的作用

目的：研究可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠吗啡依赖和复发的作用。方法：制备和纯化两种不同形式的CART，观察对吗啡诱导小鼠条件性位置偏爱的影响以及对身体依赖和自发活动的影响。结果：两种不同形式的CART蛋白对Mor诱导的身体依赖和CPP形成无显著影响，且无自身精神依赖性。复性的CART增强已形成的Mor诱导的CPP，使消退的Mor诱导的CPP再现，并且显著增加小鼠活动的总路程。还原的CART可以部分拮抗已形成Mor CPP和复发。复性的CART诱导的CPP再现，可以被还原的CART、Ru38486和氟哌啶醇拮抗。还原的CART的具有部分拮抗小剂量Mor和拈抗Hyd诱导复发的作用以及Mor诱导的自发活动的增加。结论：CART影响小鼠条件性位置偏爱的形成与复发以及小鼠的自发活动，是一种具有介导或调节精神活性物质作用，在阿片类药物依赖和复发中发挥关键作用的肽类递质，并且其结构与活性密切相关。其精神活性作用可能与多巴胺系统和皮质激素系统有关。

可卡因-苯丙胺调节转录肽DNA疫苗在阿片依赖和复发中的作用

目的：研究可卡因-苯阿胺调节转录肽（CART）DNA疫苗在阿片依赖和复发中的作用。方法：制备CARTDNA疫苗，观察其对吗啡诱导的小鼠与大鼠条件性位置偏爱、对海洛因诱导的大鼠自身给药行为以及对小鼠身体依赖的影响。结果：成功制备CARTDNA疫苗，该重组质粒不仅可在体外哺乳细胞中表达，动物免疫后血清中还可检测到抗CART的抗体，并且这种抗体可维持相当长的时间（〉60天）。CARTDNA疫苗不仅可以抑制吗啡诱导的小鼠及大鼠位置偏爱的形成，而且对吗啡点燃的位置偏爱再现具有抑制作用。CARTDNA疫苗可明显抑制环境刺激和条件刺激诱导的大鼠海洛因自身给药行为。CARTDNA疫苗对Mor诱导的身体依赖小鼠的戒断症状无显著影响。结论：CARTDNA疫苗可以影响阿片依赖的形成与复发，对抗动物的觅药行为，表明CARTDNA疫苗具有防治精神活性物质依赖和复发的潜力。

慢性吗啡处理加强可卡因-苯丙胺调节转录肽mRNA在大鼠下丘脑的表达

目的··:观察可卡因 -苯丙胺调节转录肽 (CART)mRNAs在慢性吗啡处理后大鼠的下丘脑中表达的变化。方法·· :采用PT -PCR克隆CART基因 ,用原位杂交观察慢性吗啡依赖大鼠下丘脑中CARTmRNAs的表达。结果··:在视上核 (SON)和室旁核 (PVN) ,正常组的CARTmRNAs阳性细胞数分别为44.2±s14.3和85.3±s34.6 ,慢性吗啡处理组分别为63.8±s18.2和118.5±s55.0 ;纳洛酮可阻断慢性吗啡处理引起的CARTmRNAs阳性细胞数的增加,与吗啡依赖组相比分别减少34.0 %和58.6 %。结论·· :CART可能参与吗啡依赖的形成;由于中枢CART的增加可明显抑制动物的进食行为 ,降低动物的体重 。

可卡因-苯丙胺调节转录肽

可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine amphetam ine regu lated transcript,CART肽)是一种在体内分布广泛的神经肽类物质。它具有广泛的生理作用,在奖赏与强化、进食与肥胖、精神焦虑行为、体液平衡、免疫功能、新陈代谢、内分泌以及其他的一些生理过程中均有作用。尤其CART肽在药物依赖中的作用研究使其自1981年发现以来迅速成为神经肽方面研究热点。

可卡因-苯丙胺调节转录肽蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用

目的:检测可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用。方法:利用基因克隆技术构建pGE-4T3-CART_(55-102)表达质粒,通过谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析法纯化出GST-CART蛋白。实验分为6组:空白对照组,生理盐水组,GST+弗氏佐剂组,CART蛋白疫苗5μg组、10μg组和20μg组,免疫两次后热板法对各组进行痛反应检测。皮下注射6 mg/kg吗啡进行镇痛效应检测,计算最大镇痛效应百分率(MPE%)。随后建立吗啡耐受模型,并于末次给药12 h后皮下注射6 mg/kg吗啡进行耐受效应检测。结果:CART蛋白疫苗本身对基础痛阈没有影响(P>0.05)。10μg CART蛋白疫苗组显著降低了吗啡镇痛效应(P<0.05)。对比生理盐水组,疫苗组显示出抗耐受的潜力,其中10μg组MPE%增高具有显著性差异(P<0.05)。结论:CART蛋白疫苗本身对痛反应没有影响,但削弱了吗啡的镇痛效应,同时对吗啡镇痛耐受具有拮抗作用。

可卡因-安非他明调节转录肽基因与超重、肥胖的关联研究

目的 对可卡因 安非他明调节转录肽 (CART)基因在中国华南地区汉族人多态性情况及其与肥胖的关系进行探讨。方法 本研究用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)的方法 ,对无亲缘关系的正常体重组〔体重指数 (BMI) <2 3kg/m2 者 ,76例〕及BMI≥ 2 3者的超重或肥胖组(10 4例 )CART基因的 3个外显子进行筛查 ,并测序。结果 在正常体重组中国汉族人中存在着CART基因的多态性 ,为DNA链 145 7位上的碱基A缺失 ,位于外显子 3的 3′端非翻译区。等位基因频率为 :A +0 .849、A - 0 .15 1,基因型频率为 :A +A +0 .711、A +A - 0 .2 76、A -A - 0 .0 13 ,已达到Hardy Weinberg遗传平衡。在超重及肥胖组中CART A的等位基因频率为 :A +0 .82 7、A - 0 .173 ,基因型频率为 :A +A +0 .673、A +A - 0 .3 0 8、A -A - 0 .0 19,CART基因A的缺失和超重及肥胖无明显关联。结论 中国汉族人中存在着CART基因DNA链 145 7位上的碱基A缺失 ,此多态性与肥胖无明显关联。

可卡因-安非他明调节转录肽基因与2型糖尿病的关联研究

目的 探讨可卡因 安非他明调节转录肽 (CARTpeptides)基因在国人中的多态性及与 2型糖尿病及其临床特征的关系。方法 用聚合酶链反应 单链构象多态 (PCR SSCP)的方法 ,对无亲缘关系的 40 1例华南地区汉族人CART基因的 3个外显子及内含子连接部进行筛查 (包括 180例糖耐量正常者及 2 2 1例 2型糖尿病患者 )并进行测序鉴定。结果 (1)在中国汉族人中存在着CART基因的多态性 ,为DNA链 145 7位上的碱基A缺失 ,位于外显子 3的 3′端非翻译区。等位基因频率为 :A +83 6%、A - 16 4% ,基因型频率为 :A +A +68 9%、A +A - 2 9 4%、A -A - 1 7%。 (2 )在糖尿病组中CART A的等位基因频率为 :A +84 6%、A - 15 4% ,基因型频率为 :A +A +71 9%、A +A 2 5 3 %、A A 2 7% ,CART基因A的缺失与糖尿病无明显关联。 (3 )在糖尿病中有CART基因A缺失的基因型中总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇与对照组有明显差异。结论 中国汉族人中存在着CART基因的多态性 ,此多态性与糖尿病无明显关联 ,但涉及糖尿病脂代谢紊乱。

可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)在绵羊下丘脑中的分布

可卡因-苯丙胺调节转录肽（CART）是一类具有调控动物食欲和体质量等生理功能的重要因子。但有关CART神经元在绵羊下丘脑的分布部位和基本神经投射通路尚无报道，限制了对其潜在功能的进一步研究。本试验以绵羊下丘脑为研究材料，运用免疫荧光技术研究CART神经元在下丘脑的分布。结果表明，CART神经元集中分布在绵羊下丘脑腹内侧视前核（ventromedial preoptic nucleus，VMP0）区域，且均有较为明晰的神经元胞体及纤维结构，与小鼠CART神经元的分布部位有明显的差异，但公母绵羊之间没有明显的分布差异。这一结果为进一步研究CART在绵羊机体能量代谢平衡中的生物学作用奠定了基础。

可卡因-苯丙胺调节转录肽与脑缺血研究进展

可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)是一种内源性神经肽,参与多方面的生理功能。本文就可卡因-苯丙胺调节转录肽的功能及其与脑缺血的研究进展作一综述。

可卡因-苯丙胺调节转录肽在脑缺血中的神经保护机制

可卡因一苯丙胺调节转录肽（cocaine—andamphetamine—regulatedtranscriptpeptides，CART）是一种存在于人和动物的内源性神经肽，参与调节体内多种生理和病理学过程。多项研究提示，CART在中枢神经系统中广泛分布，具有一定的中枢神经保护作用。文章对CART在脑缺血中的神经保护机制进行了综述。

CART肽通过激活ERK抑制氧糖剥夺诱导的星形胶质细胞AQP-4上调

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录(CART)肽抑制星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)性损伤及调节水通道蛋白4(AQP-4)表达的分子机制。方法:体外培养新生ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色鉴定细胞。所得细胞随机分为4组:对照组、模型组、CART组和CART+PD98059(ERK信号通路特异性阻断剂)组,MTT法检测星形胶质细胞活力,Western blot检测ERK及AQP-4的表达。结果:OGD处理后,CART肽能显著提高OGD后星形胶质细胞的活力(P<0.01);CART肽能够提升星形胶质细胞内ERK的磷酸化水平(P<0.05);PD98059能够阻断CART肽诱导的ERK磷酸化(P<0.01),并减弱CART肽抑制AQP-4表达的作用(P<0.05)。结论:CART肽提高OGD处理后星形胶质细胞的活力,并通过激活ERK通路抑制OGD处理后细胞AQP-4的表达。

CART肽抑制NMDA诱导海马神经元凋亡的机制

目的:探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)对兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸(NM-DA)诱导海马神经元凋亡的作用和机制。方法:18dSD大鼠胚胎(E18)海马神经元原代培养8d,用MTT吸光度值、DNA ladder、Hoechst染色、Western blotting方法观察NMDA引起的神经元凋亡,以及CART肽对NMDA诱导的细胞凋亡的影响,分析CART肽的作用机制。结果:CART肽预处理组海马神经元存活率明显高于NMDA组(P<0.05);DNA ladder和核形态Hoechst染色证明,CART肽明显抑制NMDA诱导的海马神经元凋亡(P<0.01)。CART肽预处理明显促进NMDA组海马神经元中Bcl-2表达(P<0.01),增加Bcl-2/Bax比值,抑制caspase-9及caspase-3活化(P<0.01);但CART肽对Bax的表达及caspase-8活化无显著影响。结论:CART肽抑制NM-DA诱导的海马神经元凋亡,呈明显的神经保护作用,其神经保护机制主要是提高抗凋亡分子Bcl-2表达,抑制线粒体凋亡途径启动分子caspase-9和执行分子caspase-3的活化。

胆囊收缩素参与脑-肠轴调控机制的研究进展

迷走传入神经元接受脑-肠肽的信号刺激并传递至下丘脑，对摄食行为进行调节。胆囊收缩素（CCK）作为一种重要的胃肠激素，在脑-肠轴调控机制中起关键作用，它能够兴奋迷走传入神经元，调节某些G蛋白偶联受体的兴奋性以及其他肽类神经递质的释放。本文就关于胃肠激素参与脑-肠轴调控机制的进展，特别是CCK在迷走传入神经途径中的“枢纽”作用作一综述。