低分子凝胶M2和交联透明质酸作为可注射性软骨再生支架的可行性研究

目的探讨以低分子量凝胶M2和交联透明质酸(Hyaluronic acid,HA)作为可注射性支架材料,在裸鼠体内构建组织工程软骨的可行性。方法常规分离、体外单层培养新生猪耳软骨细胞,将获得的软骨细胞以50×106 cells/m L和100×106cells/m L的浓度分别与M2凝胶混合,以100×106 cells/m L的浓度与交联HA混合,分别注射于裸鼠皮下,并于8周后取材。以单纯M2凝胶及单纯HA作为对照组。通过大体观察、组织化学检查、湿重测定、力学检测、蛋白聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)含量测定,判断低分子量凝胶M2及交联透明质酸在体内形成软骨的能力。结果实验组3组均可形成软骨样组织块。其中,M2+高浓度细胞组体积最大、质地较硬、表面光滑,软骨细胞位于成熟的陷窝中;M2+低浓度细胞组形成与高浓度细胞组质地相似的组织块,但体积相对较小;HA组形成不成熟的组织块,硬度差,含有的细胞数和分泌的基质最少。同时,实验组3组的力学和GAG含量结果也证实M2+高浓度细胞形成的软骨更加成熟。各组间具有显著性差异。2个对照组未有类软骨组织形成。结论低分子凝胶M2与软骨细胞的生物相容性优于交联HA,更适合作为可注射性支架材料用于组织工程化软骨的构建。

注射型猪小肠黏膜下层与脂肪间充质干细胞的体外共培养

背景:经脱细胞处理的猪小肠黏膜下层是一种具有生物活性的细胞外基质,主要由胶原、糖蛋白、蛋白多糖等组成,富含胶原、氨基葡聚糖和各种生长因子,这些组分在促进组织细胞的分化和快速增殖中发挥了重要作用。目的:制备可注射型猪小肠黏膜下层,观察其与大鼠脂肪间充质干细胞的体外共培养情况。方法:制备可注射型猪小肠黏膜下层与SD大鼠脂肪间充质干细胞。(1)CCK-8法检测细胞增殖:将第3代脂肪间充质干细胞接种到可注射型猪小肠黏膜下层上(实验组),以正常培养的细胞为对照组,培养1,3,5,7 d观察细胞增殖;(2)Live/dead染色法检测细胞存活:分别以猪小肠黏膜下层浸提液(实验组)与完全培养基培养(对照组)第3代脂肪间充质干细胞,培养1,3,5,7 d观察细胞存活。结果与结论:(1)扫描电镜观察结果:脂肪间充质干细胞能在材料上很好黏附,呈椭圆形和条索状生长;(2)细胞增殖结果:实验组培养1,5 d的细胞A值高于对照组(P<0.05);(3)细胞存活:随时间延长,两组中细胞数量均呈上升趋势,共培养第1天时,两组细胞基本全部存活,随后可见两组均有死细胞出现,两组死细胞数在各时间点无明显差别;(4)结果表明:可注射型猪小肠黏膜下层具有良好的细胞相容性。