载他克莫司可注射温敏水凝胶促牙髓干细胞成骨向分化作用研究

目的:研究载他克莫司可注射温敏水凝胶(FK506-TH)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响。方法:酶消化法体外分离培养hDPSCs,CCK-8法检测不同浓度FK506FK506-TH对hDPSCs增殖的影响,采用Real-time PCR、茜素红S和碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化能力的影响。结果:FK506-TH能促进hDPSCs增殖(P<0.05),Real-time PCR数据表明,FK506-TH组细胞成骨基因的mRNA均明显高于FK506药物组和单纯水凝胶组(P<0.05),且FK506-TH细胞矿化结节及ALP活性较FK506药物组和单纯水凝胶组明显增加(P<0.001)。结论:FK506-TH可提高hDPSCs的增殖能力以及成骨分化的潜能。

mXG/HBC复合可注射温敏水凝胶对粘连松解术后二次损伤的作用

目的腹腔粘连患者在行粘连松解术后再次形成二次粘连是外科手术常见的并发症之一,且目前缺乏足够的防治措施和相关的临床转化研究。文中旨在设计建立腹壁-盲肠再损伤粘连模型,并探究粘连松解术后基于mXG/HBC(改性木葡聚糖/羟丁基壳聚糖)复合温敏可注射水凝胶防治盲肠-腹壁再粘连的效果。方法通过建立腹壁-盲肠再损伤粘连模型,并随机将首次粘连评分相近的80只SD大鼠分为5组(每组16只):对照组(等渗盐水)、Film组(医用壳聚糖防粘连膜)、mXG组(注射改性木葡聚糖凝胶)、HBC组(注射羟丁基壳聚糖凝胶)、mXG/HBC组(注射改性木葡聚糖/羟丁基壳聚糖复合凝胶)。术后第7、14天观察各组腹壁与盲肠的粘连情况,并对各组防粘连效果进行评分。切取腹壁-盲肠粘连部位的组织或未粘连区域的腹壁和盲肠的创面组织进行HE、Masson和Van Gieson染色,使用光学显微镜进行病理学形态观察。结果温敏水凝胶防粘连效果观察显示,术后7天、14天,对照组、Film组和HBC组盲肠和腹壁发生了明显的粘连,而mXG组、mXG/HBC组分别有1只、2只发生粘连;mXG/HBC组腹壁创面已经完全愈合,愈合后的创面表面光洁平整,盲肠创面也愈合良好。术后第7、14天时,与mXG组粘连评分比较,对照组、Film组明显升高(P<0.05);与mXG/HBC组粘连评分[(0.25±0.43)分、(0.13±0.33)分]比较,HBC组明显升高[(4.74±0.70)分、(4.63±0.48)分,P<0.05]。防粘连效果组织学观察显示,术后第7天时,mXG/HBC组未看到有明显的残留凝胶,整个愈合的创面层次清晰、厚度均一,盲肠的创面也得到一定程度的修复;对照组、Film组和HBC组大鼠腹壁和盲肠之间存在明显的粘连区域;术后第14天,mXG/HBC组愈合的盲肠和腹壁表面平整,并且由一层成熟的间皮层所覆盖,其下方的炎性细胞数量较第7天明显减少,而且愈合后的创面组织变薄;对照组和HBC组粘连相对于第7天有所增加。结论mXG/HBC复合凝胶不仅能够有效地预防粘连松解术后再次粘连的发生,同时还能减轻炎症反应和促进创面愈合效果。

可注射釉基质蛋白水凝胶制备及其性能研究

目的:构建一种负载釉基质蛋白(EMP)的泊洛沙姆(Poloxamer)可注射温敏水凝胶,研究其性能。方法:提取6月龄幼猪牙胚EMP,制备空白凝胶以及负载釉基质蛋白(2 mg/mL)的凝胶(P407∶P188分别为23∶8和19∶1),采用试管倒置法测定胶凝温度,超微量蛋白定量法测定优选组方的EMP释放性能。结果:负载2 mg/mL EMP,P407∶P188为23∶8的泊洛沙姆可注射温敏水凝胶(编号FP1)胶凝温度为33℃,其释放性能符合Higuchi方程,适合临床应用。结论:构建了可缓释EMP的泊洛沙姆可注射温敏水凝胶,该体系具有合适的相转变温度和控释效能。

改性木葡聚糖温敏水凝胶的制备及生物相容性评价

背景:可注射温敏水凝胶能随环境温度变化发生可逆性相转变并可结合微创疗法,在术后防粘连领域得到了广泛关注,但现有的可注射温敏水凝胶在预防术后粘连方面存在生物安全性差及防粘连效果不佳等问题。目的:制备改性木葡聚糖可注射温敏水凝胶,评价其生物相容性。方法:通过温和的酶解反应脱除木葡聚糖侧链的部分半乳糖,得到具有可逆“溶胶-凝胶”转变的改性木葡聚糖可注射温敏水凝胶。通过活/死细胞染色定性检测与MTT 法定量检测改性木葡聚糖水凝胶浸提液对人肝癌细胞HepG2 和人肺腺癌细胞A549 的毒性。将人肺腺癌细胞A549 包埋于改性木葡聚糖水凝胶内,培养24 h后观察细胞形态。在抗凝兔血中分别加入改性木葡聚糖水凝胶浸提液与0.1,1 g/L 改性木葡聚糖溶液,1 h后检测溶血率。将改性木葡聚糖溶液注射至C57 小鼠(中国人民解放军军事医学科学院北京实验动物中心提供)背部皮下,跟踪材料的体内降解行为,评价植入部位及周围组织的炎性反应。动物实验获得华北理工大学实验动物伦理委员会批准,批准号:SYXK(冀)2015-0038。结果与结论:①AO/PI 染色与MTT 检测显示,不同浓度改性木葡聚糖水凝胶浸提液中的HepG2 细胞、A549细胞增殖活性均在100%左右;②包埋在改性木葡聚糖水凝胶内的A549 细胞仍有很好的活性;③改性木葡聚糖水凝胶浸提液与0.1,1 g/L 改性木葡聚糖溶液的溶血率均在2%以下;④随着注射时间的延长,动物体内的改性木葡聚糖水凝胶逐渐变小,约在6 周时降解完全;注射早期可引起炎症反应,但随着时间延长与材料的降解,炎症反应逐渐减轻和消失,注射部位未见明显组织病变损伤;⑤结果表明,改性木葡聚糖水凝胶具有温敏特性,还有良好的细胞相容性、血液相容性与生物降解性。

腹壁-盲肠损伤粘连模型的建立及mXG温敏水凝胶的防粘连机制研究

目的构建腹壁-盲肠损伤粘连模型并探究改性木葡聚糖(mXG)温敏水凝胶对腹壁-盲肠损伤粘连的防治效果。方法选用SD大鼠构建腹壁-盲肠损伤粘连模型,随机分为空白对照组(Control)、商业化壳聚糖膜对照组(Film)和mXG温敏凝胶组(Hydrogel),每组16只。Hydrogel组,将1 mL 4%(m/V)mXG溶液涂抹至腹壁和盲肠的创面,待凝胶形成(3 min)后关腹;Film组,关腹前将2 cm×3 cm大小的壳聚糖防粘连膜覆盖于腹壁创面;Control组,关腹前将1 mL生理盐水注射于腹壁和盲肠的创面。术后7 d和14 d,开腹检查腹壁与盲肠的粘连情况,采用双盲设计进行粘连评分。取同一部位粘连组织或创面组织,进行HE、Masson和Van Gieson染色后,进行防粘连效果组织学评价,免疫组织化学染色检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达情况。另取12只SD大鼠予以造模和mXG温敏水凝胶干预,术后第1周和6周取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器使用HE染色进行组织学检查,进行体内毒性评价。结果动物模型大体观察发现,Hydrogel组的大鼠基本未发生粘连,Film组发生轻度粘连,Control组发生了严重的粘连,差异有统计学意义(P<0.05)。组织学镜下观察发现,7 d时Hydrogel组创面恢复良好,未看到变异的组织,有一定程度的炎性细胞浸润;14 d时创面组织中的炎性细胞明显减少,新生间皮层下仅含有少量胶原纤维的愈合组织;而7 d、14 d,其余两组均出现不同程度粘连的病理表现。免疫组织化学染色发现,Hydrogel组TGF-β1和CTGF的阳性表达一致且较其它两组弱,差异有统计学意义(P<0.05)。体内毒性检测发现,使用mXG凝胶的动物在不同时间点各脏器的结构均没有出现明显变化。结论 mXG温敏水凝胶能够在粘连形成的关键时期起到良好的物理隔离作用,有效预防盲肠-腹壁粘连的发生。