血小板表达的HLA-G对人类T淋巴细胞白血病1型病毒蛋白Tax表达的影响

目的探讨血小板表达的HLA-G对人类嗜T淋巴细胞1型病毒(HTLV-1)蛋白Tax表达的影响。方法从抗凝全血中分离血小板,运用流式细胞术检测血小板膜分子HLA-G;运用ELISA技术检测血小板裂解前后分泌型HLA-G分子含量;使用血小板裂解液(PL)培养HTLV-1的人淋巴瘤细胞MT2,采用蛋白免疫印迹技术(WB)评价血小板表达的HLA-G对HTLV-1蛋白Tax表达的影响。结果血小板膜表面高表达膜型mHLA-G;血小板裂解后分泌型sHLA-G表达量(ng/mL)升高(15.73±1.01vs6.65±0.47),且随着血小板含量的升高而升高,呈剂量依赖效应;与胎牛血清相比,PL明显促进MT2细胞高表达HLA-G蛋白和HTLV-1病毒Tax蛋白,在PL中加入抗HLA-G抗体可有效抑制MT2细胞表达Tax、HLA-G蛋白。结论血小板上高表达的免疫耐受分子HLA-G可诱导人淋巴瘤细胞MT2高表达HTLV-1蛋白Tax,进而促进病毒感染。

肠道病毒71型感染手足口病患儿血浆可溶性人类白细胞抗原-G表达水平的研究

目的通过检测肠道病毒71型(EV71)感染手足口病(HFMD)患儿血浆可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,探讨其与儿童EV71感染的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测EV71感染HFMD患儿及正常对照儿童血浆中sHLA-G水平;采用ELISA检测EV71感染HFMD患儿及正常对照儿童的血浆IL-6、IL-10水平;根据卫生部《手足口病诊疗指南》(2010年版)的诊断标准,将患儿组分为普通病例组21例、重型组97例、危重型组19例,同时选取EV71病毒核酸检测阴性的健康体检儿童146例为对照组。结果患儿血浆sHLA-G水平135.1U/ml明显高于正常对照组的19.82U/ml,差异有统计学意义(P<0.01);血浆sHLA-G水平轻型组、重型组、危重型组分别为123.03、118.30、180.20U/ml,差异有统计学意义(P<0.01),其中危重型组的血浆sHLA-G水平高于轻型组和重型组(P=0.000);各组血浆IL-6、IL-10水平差异均有统计学意义(P<0.05),危重型组血浆IL-6、IL-10水平高于重型组和轻型组(Z=-3.057,P=0.002;Z=-2.656,P=0.008)。结论 sHLA-G参与了EV71感染的发生发展过程,血浆sHLA-G水平可作为EV71感染的辅助诊断指标。

不同类型的EBV感染患儿免疫功能与外周血sHLA-G的变化

目的分析不同类型的EB病毒(EBV)感染患儿免疫功能与外周血可溶型人类白细胞抗原-G(sHLA-G)的变化。方法选取2017年4月至2018年10月该院收治且确诊的EBV感染患儿132例。根据不同临床类型分为EBV相关淋巴组织细胞增生性噬血综合征(EBV-HLH)组(44例)、慢性活动性EBV感染(CAEBV)组(46例)和传染性单核细胞增多症(IM)组(42例),选取同期体检健康的儿童为对照组(35例)。检测各组的细胞免疫功能[CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞及CD4^+/CD8^+比值]、体液免疫功能[免疫球蛋白(Ig)M、IgG和IgA]和sHLA-G水平。结果与对照组比较,所有EBV感染组的细胞免疫功能均存在异常(P<0.05),IM组CD3^+T细胞水平升高(P<0.05),CAEBV组和EBV-HLH组CD3^+T细胞水平降低(P<0.05)。EBV-HLH组CD4^+T细胞水平最低(P<0.05),IM组CD8^+T细胞水平最高(P<0.05),EBV-HLH组CD4^+/CD8^+最低(P<0.05)。与对照组比较,所有EBV感染组的体液免疫功能均存在异常(P<0.05),EBV-HLH组IgA和IgG水平最低(P<0.05),IgM水平最高(P<0.05)。与对照组比较,所有EBV感染组sHLA-G水平均明显升高,IM组sHLA-G水平最低(P<0.05)。结论不同类型的EBV感染均与免疫功能紊乱相关,sHLA-G水平均明显升高,IM类型的EBV感染患儿较为特殊,T淋巴细胞处于激活状态,体液免疫功能变化较小,sHLA-G水平升高,但升高有限,检测细胞免疫功能、体液免疫功能及sHLA-G水平可鉴别IM类型的EBV感染。

胎膜早破孕妇胎膜组织中HLA-G、ox-AAT表达及与MMP-9相关性分析

目的:探究胎膜早破孕妇胎膜组织中人类白细胞抗原G(HLA-G)、氧化型α1-抗胰蛋白酶(ox-AAT)表达及与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的相关性。方法:回顾性分析本院2020年1月-2021年1月收治的148例胎膜早破孕妇的临床资料,依据其分娩情况分为足月胎膜早破(A组,86例)与足月前胎膜早破(B组,62例),另选取同期正常足月妊娠的60例孕妇作为健康对照组(对照组),对比三组孕妇HLA-G、ox-AAT、MMP-9水平差异,采用Person相关性分析胎膜组织中HLA-G、ox-AAT表达与MMP-9水平的关系。结果:A、B组孕妇母血、脐血、胎膜组织中HLA-G水平显著低于对照组,水平由低至高依次为B组<A组<对照组;A、B组孕妇母血、脐血、胎膜组织中ox-AAT与MMP-9水平均显著高于对照组,水平由低至高依次为对照组<A组<B组(P<0.05)。Person相关性分析结果显示,HLA-G与MMP-9水平呈显著负相关(r=-0.117,P<0.05),ox-AAT与MMP-9水平呈现显著正相关(r=0.727,P<0.05)。结论:胎膜早破孕妇胎膜组织中的HLA-G、ox-AAT水平的变化与MMP-9相关性显著,能够将其作为临床判断孕妇胎膜早破及早产的可靠指标。

硝苯地平联合硫酸镁对子痫前期患者HLA⁃G、HCY水平的影响

目的分析硝苯地平联合硫酸镁对子痫前期患者人类白细胞抗原G(HLA⁃G)、同型半胱氨酸(HCY)水平的影响。方法选取2020年1月至2022年7月唐山市妇幼保健院收治的108例子痫前期患者为研究对象,根据电脑抽签法分为对照组和试验组,各54例。对照组以硫酸镁治疗,试验组在对照组的基础上增加硝苯地平治疗。对比两组临床疗效、血清学指标、胎盘血流灌注参数、母婴结局、治疗安全性。结果试验组总有效率(92.59%,50/54)高于对照组(77.78%,42/54),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,试验组HCY、血清胱抑素C(Cys C)低于对照组,HLA⁃G水平高于对照组,试验组胎盘血流灌注参数血流指数(FI)、血管化指数(VI)、血管化⁃血流指数(VFI)高于对照组,试验组母婴结局包括早产、剖宫产、产后大出血、胎儿窘迫、新生儿窒息发生率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间试验组和对照组不良反应发生率比较(11.11%vs.7.41%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论硝苯地平联合硫酸镁治疗子痫前期效果良好,可改善患者血清学指标HCY、Cys C、HLA⁃G水平,增加胎盘血流灌注,改善患者分娩后母婴结局,治疗安全性较好。

人类T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)Tax蛋白对HLA-G表达的影响

目的:研究人类白细胞抗原G(HLA-G)在人类T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染中的表达情况,探讨HLA-G在HTLV-1逃逸宿主免疫应答中的功能和机制。方法:采用HTLV-1稳定感染的细胞系MT2分别感染HeLa和THP-1细胞,qRT-PCR和Western blot检测HLA-G异构体在mRNA和蛋白质水平的表达情况,流式细胞术检测HLA-G1的表达情况。在HeLa细胞中通过转染上调HLA-G的表达以及采用siRNA基因沉默HLA-G,再用HTLV-1感染细胞,从蛋白质水平上验证HTLV-1特征性病毒蛋白Tax的改变。结果:HTLV-1感染HeLa和THP-1细胞能诱导HLA-G异构体的差异性表达,以HLA-G1、HLA-G5为主;HTLV-1病毒感染宿主细胞24 h后HLA-G mRNA和蛋白质水平表达明显上调。同时,过表达HLA-G的HeLa细胞被HTLV-1病毒感染后病毒蛋白Tax明显升高,采用siRNA的手段将HeLa细胞HLA-G基因沉默后,则得到相反的结果。结论:免疫耐受分子HLA-G在HTLV-1感染细胞后表达量明显上升,从而促进HTLV-1病毒蛋白的传播和复制,进而导致病毒的持续感染。

HLA-G在人T淋巴细胞白血病1型病毒阳性T细胞中的表达及功能

目的观察人白细胞抗原G(human leukocyte antigen G,HLA-G)在人T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)阳性T细胞中的表达情况,研究其在影响HTLV-1感染发生发展中的作用。方法采用Western blot及real-time PCR检测HLA-G在HTLV-1阳性T细胞系(MT2和MT4)中的表达。构建HLA-G基因沉默的siRNA,用于敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G,在mRNA和蛋白质水平观察HLA-G对HTLV-1蛋白Tax、P19表达的影响,同时在RNA水平监测HLA-G基因沉默后MT2和MT4细胞中细胞因子的表达变化。CCK8法观察MT2和MT4细胞的增殖能力,Western blot检测信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)通路相关蛋白。结果与HTLV-1阴性T细胞(Jurkat和MOLT4)比较,MT2和MT4细胞均高表达HLA-G分子。siRNA敲低MT2和MT4细胞中的HLA-G后,HTLV-1 Tax和P19的mRNA和蛋白质表达水平均下降,抗病毒因子IFN-γ和TNF-α表达升高,MT2和MT4细胞的增殖能力和STAT3磷酸化水平均降低。结论HTLV-1能诱导T细胞高表达免疫耐受分子HLA-G,抑制HLA-G表达可促进抗病毒因子的产生,降低IL-6及STAT3磷酸化水平,从而有效抑制HTLV-1的复制。

HLA-E与oHSV2 VP5蛋白相互作用研究

溶瘤病毒代表了一类新的免疫治疗药物。它通过选择性杀伤肿瘤细胞和诱导全身性抗肿瘤免疫的双重作用机制,促进抗肿瘤反应。溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2是由单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)基因改造而来的新型溶瘤病毒。人类白细胞抗原E(HLA-E)是一种HLAⅠb类分子,是CD94/NKG2A的强效抑制配体,它们的结合会抑制CTL细胞和NK细胞功能。多项研究已证实HLA-E会在人肿瘤细胞表面过表达,研究团队前期研究也表明oHSV2会在体外上调部分肿瘤细胞系表面HLA-E的表达。应用GST pull-down和质谱技术确定oHSV2的VP5蛋白(由UL19基因编码)为HLA-E的相互作用蛋白,并通过激光共聚焦实验进行了初步验证。它们相互作用的确定,为探究oHSV2是否干扰HLA-E和CD94/NKG2A的结合奠定研究基础。

解毒活血中药对急性冠脉综合征患者PCI术后CD40-L及tPA的影响

目的检测解毒活血中药对急性冠脉综合征(ACS)患者冠脉介入术(PCI)术后白细胞分化抗原40及其配体(CD40-L)及组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的影响,探讨解毒活血中药治疗急性冠脉综合征不稳定斑块的机制。方法采用经皮Seldinger穿刺法或经桡动脉穿刺法选择性冠脉造影术。检测PCI术前及PCI术后用药30d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定CD40-L、tPA水平。结果治疗组治疗后CD40-L及tPA水平下降更明显(P<0.05)。结论解毒活血中药能降低ACS患者PCI术后CD40-L及tPA水平,抑制PCI术后炎症。

肥胖与精液质量及精浆肿瘤标志物的相关性研究

目的探讨肥胖对精液质量及精浆肿瘤标志物表达的影响。方法选取2019年1月至6月在河北省人类精子库捐精的44例体重指数(BMI)<24kg/m^(2)的志愿者作为对照组,另选取河北省生殖医学中心就诊的39例BMI≥28kg/m^(2)的男性不育患者作为观察组。采用计算机辅助精液分析(CASA)系统检测精液参数,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测精浆糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原153(CA153)、转化生长因子β1(TGF-β1)、表皮生长因子(EGF)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、酸性成纤维细胞生长因子-1(aFGF-1)、癌胚抗原(CEA)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、可溶型人白细胞抗原-G(sHLA-G)水平。结果与对照组比较,观察组体重、BMI明显升高(P<0.01),精子浓度、精子总数明显降低(P<0.05),精浆VEGF表达水平明显降低(P<0.01),sHLA-G表达水平明显升高(P<0.01);除VEGF、sHLA-G两个因子外,CA125、CA199、CA153、TGF-β1、CEA、NSE、CYFRA21、EGF、aFGF-1、IGF-1相互间均显著相关(P<0.01),sHLA-G仅与IGF-1因子具有相关性(P<0.05),VEGF与其他因子均无相关性(P>0.05)。结论肥胖导致精液质量下降,精浆VEGF与sHLA-G水平可能是肥胖人群精液质量下降的重要原因之一。

主动免疫治疗对URSA患者外周血sHLA-G的表达影响的研究

目的检测URSA患者经主动免疫治疗前后外周血中sHLA-G的水平表达,为主动免疫治疗对URSA患者疗效评价提供一定的理论及方法学依据。方法将研究对象分为四组,URSA组、URSA主动免疫治疗组、正常早孕组及正常未孕组。用ELISA法定量检测样本中sHLA-G的表达情况,RT-PCR半定量检测外周血中sHLA-G的表达情况。结果(1)正常早孕组血清中sHLA-G的表达水平显著高于原因不明性流产组以及正常未孕组(P<0.05);URSA患者主动免疫治疗组sHLA-G的表达水平高于原因不明性流产组以及正常未孕组(P<0.05),与正常早孕组相比无统计学意义(P>0.05);(2)RT-PCR半定量检测显示URSA组及正常未孕组sHLA-G表达均低于正常早孕组及治疗组(P<0.05)。结论淋巴细胞主动免疫治疗可以提高外周血中sHLA-G的表达,主动免疫治疗能够有效治疗URSA妊娠后的流产患者。

HLA-G 3′UTR基因多态性与不明原因复发性流产发生风险的相关性研究

目的:探讨人类白细胞抗原G 3′非翻译区(human leucocyte antigen-g 3′untranslated region,HLA-G 3′UTR)基因单核苷酸多态性以及单倍型在不明原因复发性流产患者中的分布情况及可能的预测作用。方法:采用病例对照研究。选择2017年6月至2018年7月温州市中医院70例不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)妊娠患者(病例组)以及54例产前检查健康妇女(对照组),采集外周全血和血清。离心柱法提取外周全血基因DNA,PCR扩增HLA-G 3′UTR DNA。Sanger测序法测得基因序列并进行基因分型。SHEsis在线软件分析单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点等位基因和基因型的频率,比较分析对照组和病例组的分布差异。Phase软件构建单倍型。ELISA检测血清可溶性HLA-G(soluble human leucocyte antigen-G,sHLA-G)浓度。两组间SNP位点基因型及单倍型比较采用χ^2检验,两组sHLA-G浓度比较采用t检验。结果:URSA组和对照组均检测出8个多态性位点,包括14bp ins/del、+3003C/T、+3010G/C、+3027A/C、+3035C/T、+3142C/G、+3187A/G及+3196C/G,均符合哈迪-温伯格平衡(Hardy-Weinberg,H-W)检验平衡检验,比较分析显示+3010G/C、+3142C/G、+3187A/G三个位点在两组间的分布差异有统计学意义(χ^2=8.514,P=0.004;χ^2=0.552,P=0.021;χ^2=8.183,P=0.005)。携带+3010C等位基因、+3142G等位基因患病风险相对较高(OR=2.131,95%CI=1.278~3.552,χ^2=8.514,P=0.004;OR=1.813,95%CI=1.091~3.013,χ^2=0.552,P=0.021);携带+3187G等位基因患病风险相对较低(OR=0.476,95%CI=0.285~0.794,χ^2=8.183,P=0.005)。8个位点紧密连锁,单倍型分析显示UTR-1(DTGCCCGC)可能是URSA的保护因素(OR=0.497,95%CI=0.295~0.837,χ^2=6.987,P=0.008),UTR-3(DTCCCGAC)可能是URSA的危险因素(OR=1.732,95%CI=1.009~2.974,χ^2=3.998,P=0.045)。UTR-1/UTR-1纯合子频率在URSA患者中显著低于健康妊娠人群(OR=0.381,95%CI=0.165~0.879,χ^2=5.292,P=0.024),可能是URSA的一个保护因素。未发现血清sHLA-G与HLA-G 3′UTR基因单倍型的关联性(t=1.578,P=0.119)。结论:HLA-G 3′UTR基因多态性及单倍型与URSA具有一定相关性,可能为临床诊疗和预测提供依据。