采用核转染技术建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G_1的真核细胞系

目的建立稳定表达可溶性人类白细胞抗原G1(solublehumanleucocyteantigenG1,sHLA-G1)的真核细胞系。方法采用核转染技术将质粒pcDNA3-sHLA-G1转入不表达HLA-类分子的LCL721.221细胞,经G418筛选获得稳定转染细胞,通过RT-PCR及Dot-ELISA在基因和蛋白水平鉴定目的基因的表达。结果采用核转染法LCL721.221细胞转染效率可以达到约14%。RT-PCR检测发现了sHLA-G1基因特异性条带;采用Dot-ELISA方法利用sHLA-G1特异性抗体MEM-G/9检测,存在sHLA-G1蛋白。结论通过核转染方法成功建立了稳定表达sHLA-G1的真核细胞系。

彩色多普勒超声检查联合血清妊娠相关血浆蛋白-A、抑制素A、可溶性人类白细胞抗原G检测在先兆流产诊断和预后评估中的价值

目的:探讨彩色多普勒超声联合血清妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、抑制素A(INHA)、可溶性人类白细胞抗原G(sHLAG)在先兆流产诊断和预后中的价值。方法:选取108例先兆流产患者为研究对象,按治疗后妊娠结局分为继续妊娠组(65例)和流产组(43例),另选同期产检正常的健康孕妇为对照组(60例)。比较三组血清PAPP-A、sHLAG、INHA水平及子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期最高流速与舒张最低流速比(S/D),受试者工作特征曲线(ROC)分析血清PAPP-A、sHLAG、INHA及子宫动脉PI、RI、S/D单独和联合对先兆流产的诊断和预测价值。结果:108例先兆流产患者经保胎治疗10d,保胎失败43例,保胎成功65例。子宫动脉PI、RI、S/D值比较,流产组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于对照组,血清PAPP-A、sHLAG水平比较,对照组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于流产组,INHA水平流产组高于继续妊娠组,继续妊娠组高于对照组(均P<0.05)。血清PAPP-A、sHLAG、INHA和超声指标联合对先兆流产的诊断AUC较各指标单独诊断AUC升高(均P<0.05)。结论:彩色多普勒超声及血清PAPP-A、sHLAG、INHA联合对先兆流产的诊断及预后评估价值较高。

可溶性人类白细胞抗原-G1 cDNA的克隆及序列分析

目的建立表达可溶性 HL A- G1蛋白的真核表达载体 pc DNA3- s HL A- G1。方法从绒癌细胞系 Jeg- 3细胞中提取总 RNA,借助 RT- PCR技术扩增可溶性 HL A - G1的 c DNA并把其插入真核表达载体 pc DNA 3,然后经酶切和测序法鉴定。结果经酶切鉴定及测序分析 ,证实已成功构建 pc DNA3- s HL A- G1。结论本研究成功构建可溶性 HL A -

人类白细胞抗原G基因5’上游调控区多态性与慢性丙型病毒性肝炎病毒载量的关系

目的探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因5’上游调控区(URR)多态性与慢性丙型病毒性肝炎(简称丙型肝炎)病毒(HCV)载量的相关性。方法回顾性分析2015年4—12月在大连市公共卫生临床中心(原大连市第六人民医院)住院并确诊为慢性丙型肝炎的195例患者的临床资料。收集患者血样并提取基因组DNA和病毒核酸,采用聚合酶链式反应扩增HLA-G 5’-URR,然后使用基因测序技术检测患者HLA-G 5’-URR的16个多态性位点,采用定量PCR方法测定患者血清HCV病毒载量,分析HLA-G基因5’-URR基因多态性与HCV病毒载量的关系。结果195例慢性HCV感染者HLA-G基因5’-URR的16个多态性位点中,-762C>T、-725C>G>T、-716T>G、-689A>G、-666G>T、-633G>A、insG540、-509C>G、-486A>C、-443G>A、-400G>A、-398A>G、-201G>A和-56C>T 14个位点不同基因型患者的HCV病毒载量差异无统计学意义(P>0.05),而-477C>G、-369C>A 2个位点不同基因型患者的HCV病毒载量差异有统计学意义(P<0.05)。两两比较结果显示,-477C>G位点CG基因型的HCV病毒载量高于GG基因型(P<0.05),-369C>A位点AC基因型的病毒载量高于AA基因型(P<0.05)。结论HLA-G基因5’-URR-477C>G位点CG基因型的HCV病毒载量高于GG基因型,-369C>A位点AC基因型的HCV病毒载量高于AA基因型,可能与HLA-G的表达水平改变有关。

血清可溶性人类白细胞抗原G、白介素-17水平预测先兆流产患者保胎结局的研究

目的 分析血清可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)、白介素-17(IL-17)水平预测先兆流产患者保胎结局的价值。方法 选取2018年1月至2020年6月在海南省中医院接受保胎治疗的90例先兆流产患者作为研究对象,于治疗10d时根据保胎结局分为成功组(n=71)与失败组(n=19)。统计患者相关资料,分析治疗前血清sHLA-G、IL-17水平预测先兆流产患者保胎结局的价值。结果 90例患者中保胎失败19例,占21.11%;失败组与成功组血清sHLA-G、IL-17、孕酮(P)水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,先兆流产患者保胎治疗前血清sHLA-G、IL-17水平预测保胎失败风险的曲线下面积(AUC)均>0.80,均有较理想的预测价值,且联合预测价值最高。结论 保胎治疗前血清sHLA-G低表达、IL-17过表达可能提示先兆流产患者保胎失败风险高。

血清可溶性人类白细胞抗原-G、白介素-17对先兆流产保胎治疗孕妇妊娠结局的预测价值

目的分析血清可溶性人类白细胞抗原-G(sHLA-G)、白介素-17(IL-17)预测先兆流产(TA)保胎治疗孕妇妊娠结局不良的临床价值。方法选取2019年4月至2020年7月海南医学院第二附属医院收治的94例采用保胎治疗的TA孕妇作为研究对象。治疗前检测血清sHLA-G、IL-17水平,根据是否流产分为妊娠结局良好组(n=75)与妊娠结局不良组(n=19),分析并比较两组基线资料,分析治疗前血清sHLA-G、IL-17预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的临床价值。结果94例TA孕妇经保胎治疗后有19例妊娠结局不良,妊娠结局不良率为20.21%;经双变量Spearman直线相关检验发现,TA孕妇血清sHLA-G水平与孕酮、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)水平均呈正相关(r>0,P<0.05),血清IL-17水平与孕酮、β-HCG水平呈负相关(r<0,P<0.05);Logistic回归分析结果显示,血清孕酮、β-HCG、sHLA-G水平升高可能是TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的保护因素(OR<1,P<0.05);IL-17水平升高可能是TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的的风险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线发现,血清sHLA-G、IL-17单一及联合预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良的曲线下面积均>0.80,均具有一定预测价值。结论血清sHLA-G、IL-17预测TA保胎治疗孕妇妊娠结局不良具有一定的临床价值。

血清可溶性人类白细胞抗原G与孕酮联合检测预测先兆流产妊娠结局的临床价值

目的探讨血清可溶性人类白细胞抗原G(s HLA-G)与孕酮联合检测预测先兆流产妊娠结局的临床价值。方法选择2014年1月—2015年11月在辽阳市第三人民医院就诊临床诊断为先兆流产孕妇77例,根据妊娠结局将其分为继续妊娠组(45例)和难免流产组(32例)。另随机选取该院同期诊断的正常孕妇20例作为正常妊娠组。检测比较3组血清s HLA-G和孕酮水平。结果 3组血清s HLA-G和孕酮水平总体比较差异均有统计学意义(P<0.05)。继续妊娠组和难免流产组血清s HLA-G和孕酮水平均低于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。难免流产组血清s HLA-G和孕酮水平均低于继续妊娠组,差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论孕妇血清中s HLAG和孕酮水平过低可能预示妊娠失败。

可溶性人类白细胞抗原G联合癌胚抗原检测在恶性胸腔积液中诊断价值

胸水细胞学检查是诊断胸腔积液最常见的方法,但其诊断敏感度最高也仅有60%左右〔1〕。胸腔镜获取病理组织虽是诊断胸膜疾病的金标准,但部分患者不愿接受胸腔镜有创检查,且部分基层医院不具备开展胸腔镜的条件。因此,分子方法检测胸水性质用于鉴别良恶性胸腔积液具有重要意义。人类白细胞抗原(HLA)-G作为肿瘤相关分子有助于鉴别组织的良恶性〔2〕。可溶性HLA(s HLA)-G作为一个潜在的肿瘤标志物,

人类白细胞抗原-DQA1、细胞色素P4503A5*3基因多态性与特发性膜性肾病遗传易感性关联性研究

目的:探讨分析人类白细胞抗原(HLA)-DQA1、细胞色素P450(CYP)3A5*3基因多态性与特发性膜性肾病(IMN)遗传易感性的关联性。方法:将IMN患者62例作为研究组,另将健康者62例作为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)技术和基因测序技术检测入组患者的HLA-DQA1(rs2187668)、CYP3A5*3(rs776746)基因型,判断各基因型与IMN患者的关系。结果:研究组中HLA-DQA1 rs2187668基因型AA占比高于对照组(P<0.05),基因型GG、AG占比低于对照组(均P<0.05);研究组等位基因A占比高于对照组(P<0.05)。研究组与对照组CYP3A5*3 rs776746不同基因型占比及等位基因占比比较无统计学差异(均P>0.05)。HLA-DQA1 rs2187668AA基因型IMN患者24 h尿蛋白量和血肌酐水平显著高于AG和GG型,肾小球滤过率显著低于AG和GG型(均P<0.05)。结论:HLA-DQA1 rs2187668位点的基因多态性与IMN的发生有关,AA基因型和等位基因A可增加IMN易感性。

可溶性人类白细胞抗原-G在恶性肿瘤中诊断价值的研究进展

可溶性人类白细胞抗原(s HLA)-G在恶性肿瘤患者血浆中的表达水平明显升高〔1〕,s HLA-G可能成为一种潜在的肿瘤标记物,在鉴别良恶性肿瘤中发挥重要作用。肿瘤细胞表达HLA-G被认为是其逃避宿主免疫监视策略的主要途径〔2〕。目前,已经在多种肿瘤中发现异常的HLA表型,如:HLA多倍体、单倍体、等位基因丢失、HLA特定部位的低表达及上述异常可能同时存在〔3〕。

可溶性人类白细胞抗原G在肾移植术后肺部感染患者中的表达及临床意义

人类白细胞抗原G（HLA—G）属于非经典HLA-I类分子．与经典HLA—I类抗原不同，它组织分布局限，正常生理条件下HLA—G的表达与HLA其他抗原的普遍表达存在不同，仅限制性地表达在一些免疫赦免区．如母胎交界面、胸腺髓质间上皮细胞和眼球部分，病理状态下表达于感染、肿瘤细胞、自身免疫性疾病以及移植功能良好的情况下。HLA—G已经在无排斥的心脏移植、肾移植、肝移植和肝肾联合移植受者中检测到。

青海地区子痫前期患者血清可溶性人类白细胞相关抗原G检测及预诊指标的建立

目的总结青海地区子痫前期患者血清可溶性人类白细胞相关抗原G的特征,寻找子痫前期的预诊指标。方法收集34例重度子痫前期患者、26例轻度子痫前期患者和30例正常足月妊娠妇女的产前血清样品,应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血清中可溶性HLA-G的表达水平并行相关分析。结果 (1)重度子痫前期与轻度子痫前期患者血清中sHLA-G浓度均低于正常足月妊娠组,差异有统计学意义(P<0.05),轻重度之间差异亦有统计学意义(P<0.05)。(2)利用sHLA-G的ROC曲线界定值为848.665 ng/L,可以将该值作为诊断子痫前期的初筛指标。结论子痫前期血清sHLA-G浓度可能与子痫前期发病及病情轻重程度相关,血清sHLA-G拟可作为子痫前期初筛预诊指标。

可溶性人类白细胞抗原G与重度子痫前期的相关性研究

目的:在重度子痫前期患者血浆中的含量水平,探讨s HLA-G在早发型及晚发型重度子痫前期患者血浆中表达的差异性。方法:选择南京医科大学附属南京医院2013年07月至2014年04月间收治的6例早发型重度子痫前期患者(早发型组)、18例晚发型重度子痫前期患者(晚发型组)的临床资料,比较早发型组及晚发型组患者的一般临床情况;应用免疫组织化学染色法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),检测6例早发型组,18例晚发型组及32例正常足月妊娠者(正常对照组)的血清中s HLA-G的表达,并比较三组s HLA-G含量的差异。结果:1)早发型组与晚发型组的发病孕周,分娩孕周及期待治疗天数差异均有统计学意义(P<0.05),而年龄差异无统计学意义(P>0.05);2)早发型组与晚发型组的收缩压及舒张压差异均有统计学意义(P<0.05);3)早发型组中s HL A-G含量均值为(4.284±1.932)ng/m L,晚发型组中s HL A-G含量均值为(7.036±1.623)ng/m L,正常孕妇组中s HLA-G含量均值为(10.399±3.168)ng/m L。正常对照组s HLA-G含量高于重度子痫前期组(P<0.01),且早发型组低于晚发型组(P<0.05)。

人类白细胞抗原G(HLA-G)与非小细胞肺癌的研究进展

人类白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典主要组织相容性复合体Ⅰb(MHCⅠb)类分子,包括膜结合型和可溶性HLA-G两种形式,通过相应受体调节多种免疫细胞的功能,是形成母胎耐受、肿瘤免疫逃逸的重要免疫学机制之一。非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占比最高且预后差,研究发现HLA-G的基因多态性及表达水平与NSCLC发生发展密切相关,提示HLA-G可作为NSCLC早期诊断、亚型区分、治疗及预后等潜在的生物标志物,具有辅助诊断依据的临床价值,对其机制的深入研究更可能提供NSCLC诊疗的新策略。

卵裂期胚胎可溶性人类白细胞抗原G与胚胎种植的关系

目的探讨卵裂期胚胎可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)与胚胎种植的关系。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测移植后卵裂期胚胎(体外培养2天和3天)培养液中sHLA-G浓度。结果①3天胚胎培养液中sHLA-G表达阳性率为43.3%(26/60),其中妊娠组69.2%(18/26)未妊娠组23.5%(8/34);两者相比,差异有显著性(P<0.001)。②3天胚胎培养液中平均sHLA-G浓度,妊娠组2.16±0.98U/ml,未妊娠组1.50±0.91U/ml;两者相比,差异有显著性(P<0.01)。③平均sHLA-G浓度,2天胚胎为1.53±0.90U/ml,3天胚胎为1.78±0.94U/ml;两者比较,P>0.05,差异无显著性。结论卵裂期胚胎sHLA-G的表达及表达量与胚胎种植有关,可作为妊娠预测指标。

重度子痫前期患者可溶性人类白细胞抗原G在血浆和胎盘组织中的表达

目的：研究可溶性人类白细胞抗原G（sHLA-G）在孕晚期重度子痫前期患者血浆的含量水平及其亚型mRNA在胎盘组织中的表达，探讨sHLA-G的来源及其在子痫前期发病中的意义。方法：选择2008年10月至2009年4月第四军医大学唐都医院重度子痫前期患者20例（重度子痫前期组），20例正常足月妊娠者（正常足月妊娠组）及20例正常未妊娠者（正常未妊娠组），采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆sHLA—G的含量；采用实时荧光定量PCR法比较sHLA-G亚型（HLA．G5、G6）mRNA在重度子痫前期组和正常足月妊娠组胎盘组织表达的差异。结果：①重度子痫前期组血浆sHLA—G含量水平明显低于正常足月妊娠组（P〈0．05），正常未妊娠组与重度子痫前期组和正常足月妊娠组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②重度子痫前期组胎盘HLA．G5、G6mRNA相对表达量（0．32）明显低于正常足月妊娠组相对表达量（1．0）。结论：重度子痫前期患者血浆sHLA-G及其胎盘组织中亚型mRNA含量水平均降低，可能与子痫前期发病有关，胎盘可能是sHLA-G的来源之一。

可溶性人类白细胞抗原G对丙型肝炎初治患者标准化治疗疗效的影响

目的:探讨可溶性人类白细胞抗原G(s HLA-G)对慢性丙型肝炎(CHC)患者聚乙二醇干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗疗效的影响。方法:选择2013年10月至2015年10月就诊的63例CHC患者,分别采用基因芯片法、RT-PCR法和ELISA方法检测丙型肝炎病毒(HCV)基因型、HCV RNA和s HLA-G。所有患者接受聚乙二醇干扰素皮下注射,联合口服利巴韦林抗病毒治疗。分析获得持续病毒学应答(SVR)的影响因素。结果:SVR组女性和非基因1型比例均显著高于非持续病毒学应答(NSVR)组(女性:70.59%vs.44.83%,χ2=4.285;非基因1型:82.76%vs.55.88%,χ2=5.217,P均<0.05),其余基线指标均无统计学差异(P均>0.05)。NSVR组患者治疗前血浆s HLA-G水平显著高于SVR组[1.85(1.49-16.00)ng/L vs.1.53(1.36-2.80)ng/L;U=329.00,P<0.05]。经过多变量logistic回归分析,发现s HLA-G和HCV基因型是与治疗结局相关的独立影响因子,Exp(B)(95%CI)分别为0.922(0.868-0.978)、14.204(1.898-106.289)。结论:s HLA-G对丙型肝炎初治患者标准化治疗疗效有重要影响,特别是低水平者更容易获得持续病毒学应答。

人类白细胞抗原G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究

目的研究转染人类白细胞抗原G1(humanleukocyteantigenG1,HLA-G1)基因后的猪内皮细胞系(porcineendothelialcells,PECs)细胞,对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)和自然杀伤细胞92(naturekillercell92,NK-92)细胞介导的杀伤作用的改变。方法利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染PECs细胞,在蛋白质水平通过间接免疫荧光法、在RNA水平通过RT-PCR,检测HLA-G1的表达;取6名健康志愿者,每人5ml静脉血,分离出单个核细胞和NK-92作为效应细胞,利用51Cr释放试验来检测其杀伤作用的改变。结果转染HLA-G1基因后,在转染的内皮细胞中蛋白质水平和RNA水平均检测到HLA-G1基因的表达;PBMC和NK-92细胞介导的对PECs细胞的杀伤作用均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转染HLA-G1后的PECs,可有效地降低由人NK细胞介导的杀伤作用,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路。

可溶性人类白细胞抗原-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中的表达

为了检测妊娠晚期重度子痫前期患者和正常妊娠妇女胎盘组织培养液中可溶性人类白细胞抗-G(soluble human leu-kocyte antigen-G,sHLA-G)的表达水平,探讨sHLA-G在子痫前期发病中的作用,选择了2008年10月至2009年4月第四军医大学唐都医院重度子痫前期患者20例(重度子痫前期组),正常足月妊娠者20例(正常足月妊娠组),用酶联免疫吸附法(ELISA)检测胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平。经检测重度子痫前期组胎盘组织培养液中sHLA-G的表达水平(26.78±5.17U/ml)明显低于正常妊娠组(53.64±28.85U/ml)(P<0.05)。实验表明,sHLA-G在重度子痫前期患者胎盘组织培养液中表达水平均明显降低,可能与子痫前期发病有关。

妊娠期肝内胆汁淤积症患者人类白细胞抗原G与Th1/Th2细胞因子的相关性

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者人类白细胞抗原G（HLA-G）与Th1/Th2细胞因子的相关性。方法选取2014年1月~2015年12月在江苏省常熟市中医院确诊的90例ICP剖宫产引产孕妇娩出的胎盘组织作为观察组,另选取同期90例因脐带绕颈或胎儿臀位行剖宫产的正常孕妇娩出的胎盘组织作为对照组,采用免疫组化法对胎盘组织中HLA-G表达情况进行检测,检测孕妇血清总胆汁酸（TBA）、白细胞介素-4（IL-4）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,比较两组TBA、IL-4和TNF-α水平及胎盘组织中HLA-G表达,并分析HLA-G与Th1/Th2细胞因子相关性。结果观察组TBA、TNF-α及TNF-α/IL-4水平均高于对照组,IL-4水平低于对照组（P〈0.01）。观察组胎盘组织中HLA-G阳性表达程度明显低于对照组（P〈0.01）。ICP患者胎盘组织中HLA-G与TNF-α和TNF-α/IL-4呈负相关（r=-0.751,P=0.024;r=-0.235,P=0.000）,与IL-4无明显相关性（P=0.305）。TBA与HLA-G呈负相关（r=-0.766,P=0.013）,与TNF-α和TNF-α/IL-4呈正相关（r=0.821,P=0.033;r=0.731,P=0.024）,与IL-4无明显相关性（P=0.479）。结论 HLA-G下降可能导致ICP患者TNF-α水平升高,使Th1表达处于优势状态,导致Th1/Th2失衡,促使母体对胎儿产生排斥。