利用盘基网柄菌表达可溶性人Fas配体

用PCR扩增从激活的人中性粒细胞中得到的编码可溶性Fas配体胞外区中第14 1个到第2 81个氨基酸的cDNA ,将其与hCG_β信号肽片段融合到质粒MB12neo中,随后导入到盘基网柄菌AX3细胞中,得到分泌性表达hFasL的重组菌AX3_H3。为提高shFasL的表达量,对质粒pMB12neo作了改造,得到衍生质粒pMB74。利用质粒pMB74克隆表达shFasL ,得到高通量表达shFasL的重组菌AX3_pLu8。在复杂培养基HL_5C中,重组菌的细胞密度可达(1 5～2 )×10 7 mL ,AX3_H3及AX3_pLu8分泌的shFasL浓度分别为2 3 5 μg L及2 0 6 μg L。利用合成培养基SIH培养重组菌AX3_H3及AX3_pLu8,细胞密度均达到(4～5 )×10 7 mL ,shFasL浓度则分别达到111μg L和4 2 0 μg L。