自噬在可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用

目的:探讨自噬在可溶性尿酸(UA)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应中的作用。方法:(1)分别用可溶性UA、自噬增强剂雷帕霉素(RAP)联合可溶性UA和自噬抑制剂氯喹(CQ)联合可溶性UA刺激HK-2细胞,透射电镜观察自噬体,western blotting法检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、自噬微管相关的轻链蛋白3(LC3-Ⅱ)和自噬相关调控基因蛋白Beclin1的表达;(2)用Akt抑制剂Perifosine与可溶性UA溶液共刺激HK-2细胞,western blotting法检测p-Akt和MCP-1的表达。结果:与对照组比较,可溶性UA可诱导HK-2细胞MCP-1、LC3-Ⅱ和Beclin1表达上调(均P<0.05),透射电镜观察到自噬体数量增加。与UA组比较,RAP与可溶性UA共刺激HK-2细胞后,自噬增强而MCP-1表达减弱(均P<0.05),CQ与可溶性UA作用HK-2细胞后,自噬抑制而MCP-1表达增加(均P<0.05)。与单纯UA刺激的HK-2细胞比较,p-Akt阻断剂Perifosine联合UA共刺激细胞后MCP-1表达减弱(P<0.05)。结论:自噬参与调控可溶性UA诱导的肾小管上皮细胞炎症反应。

TLR4介导可溶性尿酸诱导的肾小管上皮细胞自噬流异常

目的:探寻Toll样受体4(TLR4)与可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞HK-2自噬的关系。方法:用可溶性尿酸或/和氯喹(CQ)刺激HK-2细胞,采用Western blot检测LC3-Ⅱ和P62的表达水平,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体形成。在可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242后采用RT-qPCR检测TLR4的mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平,并通过自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记观察细胞内自噬流的变化。结果:可溶性尿酸可诱导HK-2细胞LC3-Ⅱ和P62的表达上调,其与CQ共同处理后LC3-Ⅱ及P62的表达进一步增加,透射电子显微镜下观察到自噬小体增多,自噬溶酶体少见,提示自噬流受阻。Western blot结果显示,与正常对照组相比,可溶性尿酸组TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平增高,而TAK242则抑制可溶性尿酸诱导HK-2细胞的TLR4、LC3-Ⅱ和P62的表达水平。自噬双标腺病毒实验结果显示,可溶性尿酸组与对照组相比,自噬小体显著增多,且自噬溶酶体较少;而与可溶性尿酸组相比,TAK242+可溶性尿酸组自噬小体减少,自噬溶酶体相对增多,表明自噬小体与溶酶体融合现象增多,形成自噬溶酶体的进程更顺畅。结论:可溶性尿酸导致肾小管上皮细胞自噬流受阻;同时,可溶性尿酸可通过TLR4介导肾小管上皮细胞自噬流异常。

MiR-21-5p介导自噬异常在可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用

探讨可溶性尿酸(SUA)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应下miR-21-5p与自噬异常的关系。方法 建立SUA诱导HK-2细胞炎症模型,检测炎症因子MCP-1、miR-21-5p和自噬标志蛋白Beclin 1、LC3-II和P62的表达。将miR-21-5p转染至HK-2细胞,经SUA干预,检测MCP-1、LC3-II和P62的蛋白表达情况。结果 SUA诱导HK-2细胞炎症发生,miR-21-5p表达明显下降,自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-II和P62的表达均增加。可溶性尿酸干预miR-21-5p转染的HK-2细胞,检测显示:相较于NC组,UA组的炎症蛋白MCP-1、自噬标志蛋白LC3-II、P62表达显著增加;且相较于UA组,UA+miR-21 mimics组的MCP-1也表达增加,但LC3-II表达下降,P62表达增加;而UA+miR-21 inhibitor组LC3-II和P62的表达增加。结论 在可溶性尿酸诱导的HK-2细胞炎症反应中,miR-21-5p与炎症密切相关,可能通过介导自噬异常进行调控;其或可能成为可溶性尿酸诱导的肾小管上皮细胞炎症的一种新型的生物学标志物。 。

可溶性尿酸通过下调UCP2蛋白激活心肌细胞中NLRP3炎性小体的实验研究

目的观察尿酸处理下大鼠心肌细胞系H9C2的损伤和NLRP3炎性小体的活化情况,探讨可溶性尿酸活化NLRP3炎性小体的机制。方法采用不同质量浓度的尿酸处理H9C2 12h、24h和48h,通过MTS和乳酸脱氢酶(LDH)检测细胞活力,以反映细胞损伤情况,同时采用流式细胞术(FCM)分析H9C2凋亡情况。通过Western blot检测NLRP3炎性小体相关分子[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和Caspase-1]的蛋白水平。分离线粒体和胞质,Western blot检测细胞色素C的释放情况,评价线粒体损伤情况。MTS和LDH检测活性氧(ROS)抑制剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)对细胞活力的影响,real time-PCR及Western blot检测NAC对NLRP3炎性小体活化的改善情况。最后采用Western blot和免疫荧光检测解偶联蛋白2(UCP2)蛋白的表达。结果随着尿酸浓度的增加,细胞损伤和凋亡加剧,且具有时间依赖性;尿酸可上调NLRP3炎性小体相关分子的表达,并导致线粒体受损;NAC可改善细胞损伤并抑制NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白的活化;尿酸还可下调UCP2的表达。结论尿酸下调UCP2蛋白的表达,诱导线粒体损伤,激活NLRP3炎性小体,导致心肌细胞损伤。

非可溶性尿酸结晶免疫损伤机制研究进展

人体尿酸以可溶性尿酸及尿酸盐结晶两种形式存在。尿酸盐结晶不仅引起尿酸性肾石病，目前多项研究表明，非可溶性尿酸结晶（MSU）可通过多种免疫机制介导炎症的发生，MSU可通过直接与细胞膜接触（非受体依赖），也可以通过与Toll样受体（TLR）2／4结合激活固有细胞、补体、T淋巴细胞等从而引起各种免疫损伤。亦可作为佐剂与特殊蛋白结合增强炎症反应。

高尿酸血症与动脉粥样硬化的关系研究进展

随着人民生活水平的提高和饮食结构的改善,高尿酸血症和动脉粥样硬化的发病率均逐年上升,研究发现二者密切相关。但高尿酸血症导致动脉粥样硬化的机制目前并不十分明确。它可能通过以下途径促进疾病的发生发展:可溶性尿酸的直接作用、尿酸盐结晶引起的炎症反应,高血脂增强高尿酸与动脉粥样硬化的密切度。降低血尿酸水平可减少动脉粥样硬化的发生,提高心脑血管疾病患者的生存率,对患者远期生存质量的改善具有重要的临床意义,所以有必要对其相关的机制进行更深入和广泛的研究。

50%氯溴异氰尿酸可溶性粉剂防治小麦土传病害效果研究

小麦土传病害包括根腐病和全蚀病等,在安徽省临泉县常年发生。氯溴异氰尿酸,是一种高效、广谱、新型内吸性杀菌剂,可杀灭各种病菌。本文研究了50%氯溴异氰尿酸可溶性粉剂对小麦土传病害的防治效果,结果表明,50%氯溴异氰尿酸可溶性粉剂(地菌净)对小麦根腐病防效明显,宜在该县大力推广。