日本血吸虫可溶性成虫抗原及虫卵抗原对CD4^+T细胞分化的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)及虫卵抗原(SEA)在诱导CD4+T细胞分化中的不同作用。方法分别用SWA、SEA免疫C57BL/6小鼠后分离脾细胞,或用SWA、SEA体外刺激正常小鼠来源的脾细胞后,采用流式细胞术(FCM)检测脾细胞中产生IFNγ及IL 4的细胞比例,以及CD4+T细胞中Th1、Th2细胞亚群的比例。结果SWA比SEA更能优势诱导CD4+T细胞产生IFNγ(P<0.05),SEA比SWA更能优势诱导CD4+T淋巴细胞产生IL 4(P<0.05)。结论SWA较SEA更能优势诱导Th1细胞分化,SEA较SWA更能优势诱导Th2细胞分化。

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原对CD4^+ T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)、可溶性虫卵抗原(SEA)对小鼠CD4+T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响。方法以免疫磁珠分选正常小鼠脾细胞中的CD4+T淋巴细胞后,与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记的抗原递呈细胞共培养,并分别以PBS、SWA、SEA刺激。36h后以流式细胞术(FCM)结合caspase-3荧光抗体标记技术检测CD4+T淋巴细胞的凋亡水平;96h后以碘化丙锭染色结合FCM分析CD4+T淋巴细胞周期分布情况。结果凋亡分析结果显示,经SEA和SWA刺激后,外周CD4+T细胞的凋亡百分比分别为(1.24±0.29)%和(1.52±0.38)%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。细胞周期分析表明,SWA组处于G1期、S期和G2/M期的细胞百分比分别为(78.91±2.98)%、(7.39±0.85%)和(10.69±1.05)%;与之相比,SEA组G1期细胞百分比[(59.42±1.32)%]显著降低,S期[(21.07±0.88)%]和G2/M期[(18.88±1.21)%]显著增加,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论SWA、SEA均可诱导CD4+T淋巴细胞凋亡,SEA促进CD4+T淋巴细胞进入分裂周期的作用更明显。

日本血吸虫可溶性成虫抗原和虫卵抗原诱导调节性T细胞能力差异的比较

目的观察并比较日本血吸虫可溶性成虫抗原(SWA)与可溶性虫卵抗原(SEA)诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞水平及其抑制能力的差异。方法分别以PBS、SWA和SEA免疫小鼠,取小鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组Treg细胞占CD4+T细胞的比例,以及Treg细胞中产IL 10、TGFβ的细胞比例。采用磁珠分选出各组小鼠的Treg细胞后,以3H TdR掺入法检测其抑制靶细胞增殖的能力。结果与SWA相比,SEA可诱导更多的Treg细胞(P<0.05),刺激Treg细胞免疫抑制功能的能力也更强(P<0.05);SWA、SEA免疫小鼠后,SEA刺激Treg细胞产生IL 10、TGFβ的能力更强(P<0.01)。结论SEA较SWA能更好地活化诱导Treg细胞发挥免疫抑制作用。

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性。方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原。分别以SDS-PAGE和W estern b lot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较。结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原。SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带。AWA-f见15条蛋白带,其中Mr26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带。AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带。SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带。结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠。该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白。

广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 探讨广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠的保护性免疫 ,为广州管圆线虫病的免疫预防研究提供科学依据。方法 以广州管圆线虫成虫可溶性抗原隔周腹腔注射免疫小鼠 1次 ,共 3次 ,末次免疫 1w后 ,用 30 0条广州管圆线虫第三期幼虫感染每鼠 ,攻击感染 4w后解剖每鼠检获虫体 ,计算减虫率 ,并观察、测量检获虫体形态、大小。此外 ,还检测了小鼠体内血清特异性抗体IgG和血液嗜酸性粒细胞含量。 结果 免疫组小鼠与对照组比较 ,有极显著的减虫效果 (P <0 .0 1) ,80 0 μg、40 0 μg和 2 0 0 μg免疫原组小鼠的减虫率分别是 44 .0 %、42 .6 %和 18.7%。免疫组小鼠体内检获的虫体比对照组要少。免疫组小鼠血清抗体水平及血液嗜酸性粒细胞绝对值均高于对照组 (P <0 .0 1)。

旋毛虫成虫可溶性抗原免疫小鼠攻击感染后的免疫应答

目的 探讨旋毛虫成虫可溶性抗原 (AWSAg)接种小鼠后诱发的免疫应答。 方法 制备旋毛虫AWSAg免疫小鼠 ,分别于攻击感染后 7、14、2 1、2 8和 3 5d ,动态观察免疫小鼠特异性IgG抗体水平、IL 2水平和T淋巴细胞亚群的变化。 结果 与非免疫鼠相比 ,免疫鼠血清特异性IgG抗体OD值在攻击感染后 7d明显升高 ,在观察期内一直高于非免疫鼠。感染后 7dIL 2水平明显增高 ,达观察期内最高值 ,2 1d后才逐渐减少 ,在感染后 2 8～ 3 5d仍高于正常组。免疫鼠CD4+ T细胞在攻击感染 7d明显增加并保持不变 ,非免疫鼠CD4+ T细胞及CD4/CD8比值明显较正常鼠减低。 结论 旋毛虫AWSAg免疫小鼠攻击感染后 ,出现细胞、体液免疫应答。

日本血吸虫尾蚴成虫及虫卵的早期诊断组分抗原分析

目的寻找具有血吸虫病早期诊断价值的组分抗原。方法以感染后不同时间的兔血清,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Westernblotting)方法,对日本血吸虫尾蚴、成虫和虫卵中的可溶性抗原的成分进行免疫分析。结果可溶性尾蚴抗原(SCA)94、48、41、40kDa和38kDa组分抗原最早出现免疫印迹反应,能被感染后2周兔血清所识别,可被感染后3周兔血清识别的SCA71、23kDa组分抗原反应最强。可溶性成虫抗原(AWA)最早出现反应的组分抗原是71、58kDa,能被感染后3周兔血清所识别。可溶性虫卵抗原(SEA)最早出现反应的组分抗原是270、151、73、69、50kDa和24kDa,能被感染后4周兔血清所识别。结论SCA94、71、48、41、40、38、23kDa,AWA71、58kDa和SEA270、151、73、69、50、24kDa能被急性感染兔血清所识别,是具有潜在早期诊断价值的组分抗原。

含日本血吸虫可溶性抗原及重组GST的免疫刺激复合物对小鼠的免疫试验

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。

筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究

目的筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原及其表位。方法制备日本血吸虫可溶性童虫抗原(SSA),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Westernblot后分别与日本血吸虫感染后10、21、42天兔血清进行酶联免疫印迹试验(EITB),筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分。用日本血吸虫感染后21天血清从噬菌体12随机肽库中筛选、富集、纯化、扩增与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验初步评估其对日本血吸虫感染的早期诊断效果。结果SDS-PAGE显示SSA的总条带数多于可溶性成虫抗原(SAWA),但大多为共同抗原。EITB结果显示SSA共出现12条早期反应抗原带,其中97kDa和47kDa抗原分子只能被感染后10天兔血清特异性识别;SAWA仅出现7条反应带,未显示只能被感染后10天兔血清识别的期特异性抗原分子。挑选出3个与感染后21天兔血清具有高亲和力的单克隆噬菌体,混合后分别用于检测感染日本血吸虫10、21d鼠血清中IgG特异性抗体,阳性检出率分别为48.8%和64.4%。结论SSA中的97kDa和44kDa抗原分子及3个噬菌体随机12肽抗原模拟表位可能具有日本血吸虫感染早期诊断价值。

猪免疫旋毛虫抗原和感染后的抗体应答

为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。

可溶性虫卵抗原和成虫抗原刺激日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答

目的研究可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWA)刺激日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染小鼠肠系膜淋巴结(MLN)Th17细胞的免疫应答。方法新西兰大白兔2只,经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(约1 000条/兔),45 d后收集成虫及虫卵,制备SWA和SEA。20只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为感染组和健康组(10只/组),感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,(40±5)条/鼠,感染后5~6周ELISA检测血清中SEA和SWA特异性IgG抗体。分离两组小鼠MLN中的淋巴细胞,均给予4种不同条件刺激:无刺激组(A组),SEA(100μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(B组),SWA(100μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(C组),抗-CD3 mAb(1μg/ml)+抗-CD28 mAb(1μg/ml)(D组)。培养9 h后,流式细胞仪检测Th17细胞;培养72 h后,ELISA检测细胞培养上清中的白细胞介素(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)。结果 ELISA检测结果显示,感染组小鼠血清SEA、SWA特异性IgG抗体的吸光度(A_(450)值)分别为2.66±0.20和1.68±0.66,高于健康组的0.19±0.05和0.25±0.12(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,B组刺激后,感染组淋巴细胞中CD4^+IL-17^+和CD4^+IFN-γ^+细胞分别占0.43%和0.56%,高于健康组的0.05%和0.20%(P<0.05);C组刺激后则分别占0.39%和0.76%,高于健康组的0.04%和0.19%(P<0.05)。两组小鼠的淋巴细胞体外经SEA(B组)刺激后,感染组淋巴细胞产生的IFN-γ和IL-17分别为(49.13±14.71)和(41.73±2.42)pg/ml,高于健康组的(3.27±0.33)和(9.22±0.58)pg/ml(P<0.01);经SWA(C组)刺激后则分别为(46.92±16.73)和(36.14±4.82)pg/ml,高于健康组的(3.38±0.34)和(8.78±0.93)pg/ml(P<0.01)。B组的IL-17含量高于C组(P<0.05)。结论SEA和SWA能体外诱导日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞分泌IL-17和IFN-γ,SEA刺激淋巴细胞产生IL-17的含量明显高于SWA;SEA和SWA均能诱导淋巴细胞分化为CD4^+IL-17^+细胞和CD4^+IFN-γ^+细胞。

不同佐剂免疫原对猪旋毛虫病的免疫保护作用比较研究

采用７ 日龄旋毛虫成虫可溶性抗原与弗氏完全佐剂（ＦＣＡ） 、白油司班佐剂、ＩＳＡ２０６佐剂和蜂胶佐剂乳化制备免疫原，对试验猪腹腔注射免疫３ 次，每次间隔７ｄ ，每头猪的免疫剂量为０５ｍｇ。最后一次免疫后７ｄ 攻击感染旋毛虫肌幼虫２００ 条／ｋｇ 体重。于感染后第３５ｄ 和第１２０ｄ 剖杀试验猪，用消化法检查计算每克肌肉的荷虫数。结果４ 种佐剂免疫猪肌幼虫的减虫率分别为９６１２ ％ 、８７９７ ％ 、８９８４ ％ 和９５１５ ％ ，其中以ＦＣＡ 和蜂胶佐剂免疫组的保护作用最好。表明４ 种佐剂均具有免疫增强作用，而蜂胶佐剂在乳化程序、注射、价格及免疫增强作用等方面都优于其它佐剂，更具有开发应用前景。

Dipstick法检测斯氏狸殖吸虫病血清抗体的建立及应用

目的建立简便的斯氏狸殖吸虫病Dipstick快速诊断法。方法以纯化的斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD为诊断抗原,胶体金标记的羊抗人IgG为显色剂,建立Dipstick快速诊断方法;检测斯氏狸殖吸虫病患者血清58例,日本血吸虫病患者血清32例,华支睾吸虫病患者血清23例,健康者血清28例。结果检测58例斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体,其阳性率为98.3%(57/58),分别检测健康者血清28例、日本血吸虫病患者血清32例和华支睾吸虫病患者血清23例,前者均为阴性,后两者的交叉反应率分别为3.1%(1/32)和0%(0/23)。结论斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD Dipstick快速诊断法具有较高的敏感性和特异性,简便快捷,勿须特殊仪器设备,是一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体较好的免疫诊断方法。

我国旋毛虫病的流行与研究进展

1 80年代以来国内旋毛虫病流行概况我国自1881年在福建厦门的猪体内发现旋毛虫以来,目前已有26省(市、区)有该病发生或流行的报道。近年来随着改革开放的深入发展,商业活动空前兴旺,活畜、畜产品易地贸易频繁,人口流动和膳食结构的改变,以及众多人口与食品卫生管理后滞的矛盾,为本病病原扩散及其流行提供了条件,病例不断增多,流行地区进一步扩大。

猪旋毛虫病疫苗后海穴位免疫效果好

中国农业科学院兰州兽医研究所窦兰清等,对猪旋毛虫病后海穴免疫进行了研究。将大鼠经口感染旋毛虫肌幼虫后3或7天剖杀,收集成虫,经超声波粉碎,高速离心制成可溶性抗原。

日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞

目的观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和可溶性成虫抗原(SWAP)诱导小鼠效应性B细胞分化情况。方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+B细胞,72 h后采用流式细胞术检测CD19+IL 6+及CD19+IFNγ+细胞比例;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL 6和IFNγ水平。用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,每周1次,共3次,末次免疫后7 d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+IL 6+及CD19+IFNγ+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL 6和IFNγ水平。结果 SEA与LPS可以体外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+IL 6+B细胞(F=5.099,P<0.05;F=6.951,P<0.05),并刺激脾脏B细胞分泌IL 6(F=55.184,P<0.01);SEA免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL 6(F=19.244,P<0.01),并诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL 6+B细胞(F=14.904,P<0.05)。SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为CD19+IFNγ+B细胞(F=3.277,P<0.05),但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFNγ+B细胞,也不能刺激脾脏B细胞分泌IFNγ;SWAP免疫小鼠后,可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFNγ(F=31.886,P<0.01),并诱导其分化为CD19+IFNγ+B细胞(F=49.873,P<0.01)。结论日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL 6+B细胞,而SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IFNγ+B细胞,但依赖于其他免疫细胞的参与。

斑点金免疫渗滤法检测肺吸虫抗体的评价

目的为寻求简便、可靠的方法，用于诊断肺吸虫感染。方法采用肺吸虫成虫可溶性抗原，金标记兔抗人IgO显色，建立检测肺吸虫抗体的DIGFA。用该法检测痰检肺吸虫虫卵阳性血清82份，其他各类血清201份，并与ELISA平行对照。结果两法检测肺吸虫抗体的敏感性分别达98．8％(81／82)和97．6％(80／82)；特异性92％(185／201)和93％(187／201)；youden’s，指数为0．908和0．906。两法差异无显著性(P>0．05)。结论实验提示DIGFA的各项检测指标与ELISA相近，而且无需特殊设备，且快速、简便，适合临床查病和血清流行病学调查。