人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδT细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδT细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδT细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδT细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI1640培养液对γδT细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδT细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδT细胞受体(Tcell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδT细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4℃条件下保存12h,细胞存活率仍达95%以上。结论:可溶性anti-TCRγδ抗体和含有人AB血浆的RPMI1640培养液可以用于人外周血γδT细胞的体外扩增,扩增得到的γδT细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。

可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

对噬菌体展示人单链抗体库进行筛选 ,得到与半抗原 S-二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯特异结合的单链抗体 3B1 0 .用计算机模拟分析了单链抗体的空间结构 ,发现抗原结合的 CDR3区位于抗体的表面 ,推测其可能进一步参加硒化反应 .利用突变引物 ,在大肠杆菌中表达了可溶性抗体蛋白 ,并用化学方法将催化必需基团硒代半胱氨酸 ( Sec)组装到 3B1 0抗原结合部位 ,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶活力的人源抗体酶 .动力学研究结果表明 ,抗体酶和天然酶一样 。

HBV相关慢加急肝衰竭患者血浆抗可溶性肝抗原抗体的检测及意义

目的评价血浆抗可溶性肝抗原抗体(抗SLA)检测在乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急肝衰竭(HA)患者中的意义。方法使用抗SLA酶联免疫检测试剂盒,检测H-A患者(H-A组)、肝硬化(LC)患者(LC组)、慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB组)和健康对照者(HC组)血浆抗SLA,分析不同临床组间抗SLA的表达差异,以及与肝功能相关指标的关系。结果慢性HBV感染(CHB+LC+H-A)组的抗SLA水平均显著高于HC组(P<0.001),而H-A组抗SLA的OD值显著高于CHB组(P<0.001)、LC组(P<0.001);在HBV感染者中,抗SLA的OD值水平与ALT(r=0.260,P=0.046)及TBIL(r=0.646,P<0.001)水平呈正相关,与HBV-DNA无明显相关性(r=-0.069,P=0.598)。在H-A组,抗SLA的OD值水平与总胆汁酸呈正相关(r=0.478,P=0.024),与凝血酶原活动度、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)无显著相关性。结论这种检测方法可用于评估不同慢性HBV感染者抗SLA的表达差异,H-A患者高表达抗SLA可能与肝细胞的严重损伤及免疫发病机制相关。

抗核抗体、抗双链DNA抗体和抗可溶性抗原抗体检测项目的方法学性能验证

目的建立抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(ds-DNA)和抗可溶性抗原抗体(ENA)检测项目方法学性能验证的方案,确保检测方法的性能满足实验室及临床诊疗的质量要求。方法按照ISO15189相关文件的要求,对其符合率、检出限、重复性、人员比对、设备与环境等5个方面进行验证。结果 5个方面的性能验证符合相应的标准要求。结论抗核抗体、抗双链DNA抗体和抗可溶性抗原抗体检测项目方法学性能验证的方案能够满足ISO15189的要求,同时满足临床实验室的要求,能够为临床实验室更合理的评价和应用检测方法提供参考。

单克隆抗体3D8可溶性单链抗体的表达

单克隆抗体３Ｄ８可溶性单链抗体的表达闫岩，汪美先，徐志凯，尹文，汪力亚，王海涛，祝道成，张劲翼（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）３Ｄ８是本室研制的具有高血凝抑制活性、高中和活性和高保护性的抗肾综合征出血热病毒血凝素小鼠单克隆抗体。作者已...

系统性红斑狼疮患者抗核抗体与抗可溶性抗原抗体谱检测结果分析

目的分析系统性红斑狼疮患者抗核抗体(ANA)与抗可溶性抗原(ENA)抗体谱检测结果。方法选择该院2016年12月至2018年12月诊治的100例系统性红斑狼疮患者为A组,同期收集92例其他类型的自身免疫病患者为B组,收集体检正常健康人群86例为C组。综合比较3组的ANA与抗ENA抗体谱检测结果。结果A组和B组的ANA与抗ENA抗体检测阳性率均高于C组(P<0.05),在ENA抗体谱中,dsDNA、His、Sm、nRNP/Sm、Rib和Nuc在A组和B组间差异有统计学意义(P<0.05)。在ANA滴度为1/1000、1/320、1/100时,A组和B组的阳性检出率均高于C组(P<0.05)。ANA、ENA抗体联合检测诊断系统性红斑狼疮的灵敏度为92.00%,特异度为89.74%。结论自身抗体联合检测能提高系统性红斑狼疮的确诊率,有助于系统性红斑狼疮患者的早期诊断和病情监测。

人源抗梭曼过渡态类似物(P6)的抗体筛选

目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗梭曼过渡态类似物的人源单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以膦酸梭曼水解过渡态类似物五配位-羟基膦酸酯,3-羟基-1-对硝基苯基甲膦酸单频哪基醇酯,为半抗原,通过吸附-洗脱-扩增过程从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性抗体,对其抗原结合活性进行鉴定。结果:经过4轮的筛选,分别获得14个抗梭曼类似物的阳性克隆。经DNA指纹分析,判断所获克隆分别包含4个不同的抗梭曼类似物的scFv基因。结论:利用噬菌体抗体库技术获得了特异性的人源抗梭曼类似物抗体。

从大容量抗体库中筛选抗蓖麻毒蛋白抗体

目的:从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗蓖麻毒蛋白的人源抗体。方法:将蓖麻毒蛋白固定在抗原管上,通过5轮"吸附-洗脱-扩增"过程从大容量抗体库中筛选到特异性抗体,并转染到HB2151菌中,经IPTG诱导,制备抗蓖麻毒蛋白的可溶性单链抗体。结果:经过5轮筛选,获得40个与蓖麻毒蛋白结合的阳性克隆,其中12个特异性结合的克隆,指纹分析有7种不同的可变区片段;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。并将其制备成可溶性的抗体。结论:利用单链大容量抗体库获得抗蓖麻毒蛋白的噬菌体抗体并且成功制备成可溶性抗体,为今后的研究和应用奠定基础。

可溶性白介素4受体(sIL-4R)和白介素5抗体(IL-5Ab)在预防迟发性变态反应所致咽鼓管功能障碍中的作用

对于分泌性中耳炎(SOM)的病因学和治疗尚有很多争论,其中之一即为SOM与变态反应的关系。IL-4和IL-5是参与迟发性变态反应的两种主要介质,这些细胞因子控制组织的炎症过程、水肿形成、粘液产生、

从人源大容量噬菌体抗体库中筛选抗生存素抗体

目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗生存素(survivin)的人源单链抗体(single chainfragment variable,scFv)并进行鉴定。方法以survivin为抗原,固化在抗原管上,通过吸附—洗脱—扩增过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性噬菌体抗体,并转染HB2151菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导制备成可溶性抗体,采用酶联免疫吸附测定法对其抗原结合活性进行检测,指纹图谱分析法分析抗体基因的种类。结果经过4轮筛选,共获得21个与survivin结合的阳性克隆,其中10个特异性结合的克隆,指纹分析有8种不同的抗survivin的scFv基因,在这8种中有5种获得可溶性表达。结论利用噬菌体抗体库技术获得了特异性的人源抗生存素抗体,为其在今后肿瘤治疗中的应用奠定基础。

自身抗体检测在儿童自身免疫性疾病中的意义

目的研究抗核抗体(ANA)、ANA荧光分型、抗可溶性抗原(ENA)抗体和抗双链DNA(ds-DNA)抗体检测在儿童自身免疫性疾病中的意义。方法对住院患儿中ANA、抗ENA,或抗ds-DNA抗体至少1项阳性者共135例进行总结,分别计算其阳性预测值(PV)。结果ANA阳性中自身免疫性疾病的PV=0.36,ANA荧光强度与PV成正比,ANA荧光分型中细颗粒型对于SLE有较高的PV;抗ENA抗体和抗ds-DNA抗体对自身免疫性疾病PV高于ANA。结论ANA荧光强度,抗ENA抗体和抗ds-DNA抗体阳性对自身免疫性疾病有较高的诊断价值。

噬菌体展示技术筛选DNA错配修复蛋白MutS高亲和性抗体

目的制备MutS的高亲和抗体,以有利于MutS的检测及应用。方法利用IPTG的诱导作用,在E.coli中诱导表达目标蛋白MutS。利用亲和层析方法获得目标蛋白,并利用凝胶阻滞实验分析其活性。将MutS作为抗原,在Tomlinson抗体库中利用噬菌体展示技术来筛选MutS的高亲和力噬菌粒。将其转化到大肠杆菌后,诱导表达并通过亲和层析的方法来获得可溶性的抗体片段,并检测其亲和力。结果纯化后的MutS具有识别、结合错配DNA双链的活性。ELISA分析表明,利用噬菌体展示技术可获得MutS高亲和力的噬菌粒。将其转化到大肠杆菌HB2151后,诱导表达并纯化到抗体片段,其亲和力为0.9×108L/mol。结论利用噬菌体展示技术筛选到MutS高亲和力的抗体。

ANA与抗ENA抗体谱联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值

目的探讨抗核抗体(ANA)和抗(可溶性抗原)ENA抗体谱联合检测对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法将78例SLE确诊患者纳入研究作为SLE组,将60例其他自身免疫性疾病(AID)患者作为疾病对照组(其他AID组),将55例健康者体检者作为健康对照组。分别采用间接免疫荧光法(IIF)和免疫印迹法(LIA)对ANA和抗ENA抗体(抗-ENA)谱进行检测。结果 SLE组和其他AID组的ANA和抗-ENA阳性率均明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。nRNP/Sm、Sm、dsDNA、Nuc、His和Rib 6项抗体指标在SLE组与其他AID组之间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。抗-ENA中,对SLE诊断的特异度较高的指标有:Sm(98.33%)、His(96.67%)、Nuc(96.67%)、dsDNA(96.00%)、Rib(95.00%);敏感度排序靠前依次为:SSA(64.10%)、Ro-52(52.56%)、nRNP/Sm(48.72%)、Nuc(43.59%)、dsDNA(42.30%)、Sm(34.62%);同时满足特异度强且敏感度较高的指标为:nRNP/Sm、Nuc、dsDNA、Rib、Sm、His。5种联合检测模式中,ANA+dsDNA+Nuc模式的阳性率明显高于其他4组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论联合检测ANA和抗-ENA谱可以提高SLE诊断的确诊率,减少漏诊、误诊,对SLE的早期诊断、治疗和病情监测有重要的临床价值。

壮族盐敏感者瘦素、瘦素抗体和胰岛素抵抗的相关性

目的探讨壮族盐敏感(SS)者瘦素、瘦素抗体和胰岛素抵抗的相关性。方法选择SS与盐不敏感(NSS)者各50例,检测瘦素、可溶性瘦素抗体、空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),分析壮族SS人群瘦素、瘦素抗体水平和胰岛素抵抗的相关性。结果与SS者对比,壮族SS者存在较高的瘦素水平、较低的瘦素抗体水平和程度更高的胰岛素抵抗。结论壮族SS者存在瘦素抵抗和胰岛素抵抗,瘦素、瘦素抗体、胰岛素抵抗可能和SS关系密切。

MTHFRC677T基因纯合突变、高Hcy伴多项自身抗体阳性脑梗死1例

病例男,46岁,因发作性右侧头面部麻木10余天,加重伴右侧肢体无力19 h,于2019年6月27日入院。患者10 d前曾检查头颅磁共振,未见新发梗死,口服“叶酸片、甲钻胺营养神经”治疗,效果不佳。既往体健,无吸烟饮酒史。查体:BP 140/90 mmHg,神志清楚,构音障碍,右侧眼裂小,右侧眼球震颤(+),右侧面部汗少,伸舌右偏,右侧指鼻试验欠稳准,右侧巴氏征可疑阳性,NIHSS评分2分,洼田饮水试验5级,GCS评分15分。

ENA多肽抗体免疫功能检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值

目的探讨可溶性核抗原(ENA)多肽抗体免疫功能检测在自身免疫性疾病(AID)中的应用价值.方法198例AID患者,其中系统性红斑狼疮(SLE)99例,类风湿关节炎(RA)45例,干燥综合征(SS)24例,混合性结缔组织病(MCTD)12例,系统性硬化症(PSS)8例,自身免疫性肝炎(AIH)6例,特发性血小板减少性紫癜(ITP)4例.另选取40例健康体检者作为对照组,均进行ENA多肽抗体免疫功能检测.观察不同类型AID患者及对照组不同抗原IgG类抗体的免疫功能检测结果.结果SLE患者的抗核小体抗体(抗NKS)阳性检出率为96.97%(96/99),RA患者的抗组蛋白抗体(抗His)阳性检出率为46.67%(21/45),SS患者的抗干燥综合征A抗体(抗SS-A)阳性检出率为66.67%(16/24),MCTD患者的抗SS-A阳性检出率为58.33%(7/12),PSS患者的抗硬皮病抗原70抗体(抗Scl-70)阳性检出率为62.50%(5/8),AIH患者的抗SS-A阳性检出率为50.00%(3/6),ITP患者的抗Scl-70阳性检出率为75.00%(3/4).结论ENA多肽抗体免疫功能检测可以作为AID的重要筛查手段,尤其是NKS、SS-A、Scl-70抗体的应用敏感度更高.

免疫印迹法检测ENA抗体在诊断自身免疫性疾病中的应用价值

目的:探究采用免疫印迹法(IBT)检测抗可溶性抗原(ENA)抗体在诊断自身免疫性疾病中的应用价值。方法:选择2020年1月至2021年1月东南大学医学院附属南京同仁医院收治的自身免疫性疾病患者72例作为研究对象。随机将其分为观察组和对照组,每组各有患者36例。采用IBT对观察组患者进行ENA抗体检测,采用酶联免疫斑点法对对照组患者进行ENA抗体检测。比较两组患者ENA抗体的检出率,统计观察组患者室内质控抗体的检出率。结果:在观察组36例患者中,有29例(占80.56%)患者检出至少2种ENA抗体。本研究中两组患者所患的自身免疫性疾病主要为混合性结缔组织病(MCTD)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、类风湿关节炎(RA)。与对照组患者相比,观察组患者中的PM/DM、RA、SLE、MCTD、SS患者其ENA抗体的阳性检出率均显著高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。采用IBT对观察组患者进行ENA抗体检测时,其抗Jo-1、Scl-70室内质控抗体的检出率均为100.00%,抗SS-A室内质控抗体的检出率为97.22%,抗U1-nRNP室内质控抗体的检出率为97.22%,抗SS-B、Sm室内质控抗体的检出率均为94.44%。提示采用IBT进行ENA抗体检测可靠、准确。结论:采用IBT检测ENA抗体对诊断自身免疫性疾病具有较高的应用价值。

酶免斑点法和免疫双扩散法检测系统性红斑狼疮抗ENA抗体

目的抗可溶性核抗原(ENA)抗体的检测是诊断系统性红斑狼疮(SLE)重要的血清学依据,用两种检测方法即酶免斑点法和免疫双扩散法(ID),对抗ENA抗体测定并进行对比分析。方法用酶免斑点法及ID法同时检测110例SLE患者及30例健康体检者血清中的抗ENA抗体。结果30例健康者,两法均为阴性;110例SLE患者,两法检测Sm、RNP、SSB抗体免酶阳性检测率较ID法高,二者有统计学差异,对SSA抗体两法无差异。结论两种方法检测抗核糖核蛋的抗原(RNP)、Sm、SSB抗体时,酶免斑点法阳性检测率较ID法高,二者有显著差异,两法检测SSA抗体时虽然酶免斑点法阳性检测率较ID法高,但不能替代ID法。

单克隆抗体在旋毛虫病研究中的应用

旋毛虫病(Trichinellosis)是一种人兽共患寄生虫病,其宿主范围十分广泛,可感染包括人在内的100多种哺乳动物,自1822年Tiedemann第一次从人体中发现本虫包囊幼虫,