汉族可溶性环氧化物酶基因多态性与颅内动脉瘤的关系研究

目的探讨汉族人中可溶性环氧化物酶(EPHX2)基因多态性与颅内动脉瘤的关系。方法利用聚合酶链式反应(PCR)和PCR产物直接测序的方法检测EPHXZ,比较238例颅内动脉瘤(病例组)与221例无颅内动脉瘤(对照组)EPHX2基因rs751141、rs2291635多态性位点的基因型频率。结果女性颅内动脉瘤组与对照组中EPHX2 rs751141多态性基因型分布比较,差异有统计学意义,即前者GA+AA基因型频率(22.2%)低于后者(41.7%)(P=0.002);但在男性和不分性别患者中该基因型频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。rs2291635位点的基因型频率分布在男性、女性、不分性别患者中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论汉族人的rs751141基因异质性可能与女性颅内动脉瘤的发生相关。

可溶性环氧化物水解酶2基因与中国汉族人群非综合征型唇腭裂的关联研究

目的探究可溶性环氧化物水解酶2基因(EPHX2)的遗传变异位点与中国汉族人群非综合征型唇腭裂(NSCL/P)的相关性。方法本研究以159个中国汉族NSCL/P患者作为研究对象,对EPHX2基因区域开展了目标区域捕获测序,更全面地检测了EPHX2基因区域的遗传变异位点。以诺禾致源基因数据库的542名中国汉族健康人的全基因组测序数据作为对照,进行常见变异位点关联分析和针对罕见变异位点的负荷分析。结果在中国汉族人群NSCL/P的关联分析中发现,rs57699806的差异具有统计学意义(P=0.00013,OR=2.849,95%CI:1.691~4.800),其次为rs4732723(P=0.00650,OR=0.662,95%CI:0.491~0.892),rs7829267(P=0.00920,OR=1.496,95%CI:1.117~2.005),rs721619(P=0.01100,OR=1.474,95%CI:1.098~1.980)和rs7816586(P=0.04000,OR=1.310,95%CI:1.015~1.691)。其中rs4732723的C等位基因可能具有保护作用,而其他4个单核苷酸多态性位点的参考等位基因均可能增加NSCL/P的发生风险。罕见变异负荷分析2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究发现,EPHX2基因的5个单核苷酸多态性位rs57699806、rs4732723、rs7829267、rs721619和rs7816586与中国汉族人群NSCL/P的发生密切相关,其中rs57699806、rs4732723、rs7829267和rs7816586为新发现的易感位点。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对压力负荷增加所致小鼠心肌肥厚的影响

目的观察可溶性环氧化物水解酶抑制剂对心肌肥厚小鼠心脏及心肌肥厚标志基因的影响,并探讨该类药物影响心肌肥厚的可能机制。方法观察压力负荷增加及用可溶性环氧化物水解酶抑制剂干预后心脏的病理学改变,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测心肌肥厚基因(心房钠尿肽基因、α肌凝蛋白重链基因、β肌凝蛋白重链基因和骨骼肌α肌纤蛋白基因)表达的差异,用Western检测核因子κB的活化情况。结果可溶性环氧化物水解酶抑制剂可以明显使心脏重与体重的比值、左心室短轴缩短率和左心室收缩期末腔径明显改善,并减少压力负荷增加引起的小鼠心肌肥厚基因的表达,抑制核因子κB的表达。结论可溶性环氧化物水解酶抑制剂能抑制压力负荷增加所致的心肌肥厚,这一作用有可能通过抑制核因子κB途径来实现。

黄曲霉毒素高危区肝细胞癌患者微粒体环氧化物水解酶基因检测

目的 :探讨微粒体环氧化物水解酶 (microsomalepoxidehydrolase ,mEH)低活性基因型与肝细胞癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)的相关性。方法 :应用PCR RFLP和PCR方法检测 5 2例HCC患者和5 6例健康成人中微粒体环氧化物水解酶及谷胱甘肽硫转移酶M1和T1基因型频率的分布。结果 :发现mEH第 3外显子 113纯合组氨酸型和第 4外显子 139纯合组氨酸型都是低活性基因型 ,在HCC组和对照组分别占 5 7 1% (30 /5 2 )、4 8 2 % (2 7/5 6 ) ,82 7% (4 3/5 2 )、73 2 % (4 1/5 6 ) ,两组比较差异无显著意义 ,P >0 0 5。然而 ,mEH低活性型联合谷胱甘肽硫转移酶 (glutathiones transferase ,GST)M1和T1基因缺失型 ,差异有显著意义 ,P <0 0 5。结论 :mEH处于低活性基因型可能是地区性易感HCC的原因之一 ,但单一种解毒酶不起决定作用 ,多种解毒酶联合作用 。

细胞色素P450同工酶2C9及维生素K环氧化物还原酶亚单位1基因多态性对华法林用量的影响

目的探讨细胞色素P450同工酶2C9(CYP2C9)及维生素K环氧化物还原酶亚单位1(VKORC1)基因多态性分布情况及对华法林用量的影响。方法收集2014年3月至2016年10月宁波大学医学院附属医院临床口服华法林患者70例,应用PCR-荧光探针法检测CYP2C9和VKORC1基因多态性,记录患者年龄、体重、身高、凝血酶原时间、国际标准化比值、华法林剂量等指标。结果 VKORC1AA+CYP2C9*1/*1基因型58例(82.9%)、VKORC1AA+CYP2C9*1/*3基因型5例(7.1%)、VKORC1AG+CYP2C9*1/*1基因型5例(7.1%)、VKORC1GG+CYP2C 9*1/*1基因型2例(2.9%),服用华法林平均剂量分别为(3.1±0.5)mg/d、(1.6±0.1)mg/d、(4.4±0.4)mg/d、(5.5±0.4)mg/d。结论患者中CYP2C9和VKORC1基因存在多态性,且不同基因型患者间华法林用量差别较大。

可溶性环氧化物水解酶在疾病中的作用

花生四烯酸经过细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(epoxy eicosatrienoic acid,EETs),具有扩张血管、降低血压、抗炎等多种生物学功能。在哺乳动物系统中的可溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,s EH)具有α/β水解酶折叠结构,对环氧脂肪酸具有高度的选择性。s EH能够快速水解EETs,增加患心血管疾病的风险。目前,研究发现s EH抑制剂具有抑制s EH活性、提高EETs的含量的重要功能。在多种疾病动物模型中应用s EH抑制剂或s EH基因敲除,证实s EH在心肌肥厚、糖尿病、高血压和肾病等疾病中发挥重要的生理作用。因此,s EH已被作为疾病治疗的新靶点而进行研究。本文就s EH的分布、作用机制以及s EH与疾病的关系等方面进行了讨论。

赤峰市蒙古族心房颤动患者维生素K环氧化物还原酶复合物1-1639 G/A基因多态性研究

近年来,非瓣膜性心房颤动的发生率逐年升高。华法林作为预防血栓形成的一线药物,比阿司匹林在预防非瓣膜性心房颤动患者发生血栓栓塞方面更为出色。但研究显示,某些基因的遗传变异可能是造成华法林维持剂量个体间差异。赤峰地区属于蒙古族居民聚集的地区,使用华法林的蒙古民族非瓣膜性心房颤动患者为数不少。

可溶性环氧化物酶与缺血性脑卒中的防治

可溶性环氧化物酶（soluble epoxide hydrolase,sEH）由Gill等最早于1973年在研究类似昆虫保幼激素萜类环氧化物的代谢时发现,因其主要位于细胞的可溶性成分如过氧化物酶体和细胞质中而命名。1 sEH的生物学特性1.1 sEH的分布sEH是一组功能相似的酶系。根据底物的结构、酶的定位和物种,可分为哺乳动物类、植物类、

左西孟旦对老年急性心肌梗死合并心力衰竭患者血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白及髓过氧化物酶和基质金属蛋白酶9水平的影响

目的探究左西孟旦对老年急性心肌梗死(AMI)合并心力衰竭患者血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、髓过氧化物酶(MPO)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平的影响。方法回顾性分析2020年3月至2021年3月于空军军医大学第二附属医院接受治疗的85例老年AMI合并心力衰竭患者的临床资料。根据不同药物治疗方法将其分为观察组(43例)和对照组(42例)。所有患者均接受急诊经皮冠状动脉介入治疗。对照组予阿司匹林肠溶片、硫酸氢氯吡格雷片、阿托伐他汀钙等常规基础治疗,观察组在对照组基础上联合左西孟旦微量泵静脉输注治疗。2组均治疗1周。比较2组临床疗效,治疗前后血清sST2、MPO、MMP-9、炎症因子水平、超声心动图指标及不良反应发生情况。结果观察组总有效率高于对照组[97.7%(42/43)比71.4%(30/42)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组血清sST2、MPO、MMP-9、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、高敏C反应蛋白水平、左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径均较治疗前降低,且观察组均低于对照组[(81±6)μg/L比(93±7)μg/L、(456±21)μg/L比(499±22)μg/L、(63±7)μg/L比(83±8)μg/L、(20±3)ng/L比(26±4)ng/L、(15.1±2.0)ng/L比(20.3±2.0)ng/L、(16.8±1.9)mg/L比(27.2±2.7)mg/L、(51±3)mm比(57±3)mm、(40±4)mm比(45±4)mm],左心室射血分数均较治疗前升高,且观察组高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论左西孟旦可降低老年AMI合并心力衰竭患者血清sST2、MPO、MMP-9水平,抑制炎症反应,改善心功能,在短期治疗中具有较高的安全性与良好的临床效果。

炎症微环境下可溶性环氧化物酶抑制剂对人根尖牙乳头干细胞增殖及分化的影响

目的:探讨在炎症微环境下,可溶性环氧化物酶抑制剂(TPPU)对人根尖牙乳头干细胞(hSCAPs)增殖和分化的影响。方法:采用流式细胞仪以及成骨诱导后茜素红染色鉴定hSCAPs;1 mg/mL脂多糖(LPS)处理hSCAPs模拟炎症微环境,然后用10μmol/L TPPU作用于hSCAPs,分别在第1、3、5、7天,通过CCK-8法观察TPPU对hSCAPs增殖能力的影响;在第24小时,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测炎症相关因子表达。在成骨诱导后的第7、12天,通过qRT-PCR检测成骨分化相关基因的表达;第8天通过碱性磷酸酶染色来分析碱性磷酸酶活性,第21天用茜素红染色观察矿化结节形成。结果:流式细胞仪结果与茜素红染色鉴定实验细胞为hSCAPs。用1 mg/mL LPS处理hSCAPs后,在第1、3、5、7天时,TPPU+LPS组、LPS组和vehicle组细胞增殖无差异(P>0.05)。在用LPS处理hSCAPs 24 h后,相对于vehicle组,LPS组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达显著上调(P<0.05),LPS+TPPU组IL-1β、IL-6的表达明显低于LPS组(P<0.05)。成骨诱导液培养hSCAPs一定时间后,检测发现相对于LPS组,LPS+TPPU组碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达显著上调(P<0.05)。且TPPU处理组较LPS组碱性磷酸酶染色和茜素红染色均加深。结论:在体外炎症微环境下,TPPU可以抑制hSCAPs炎性因子的表达。其次,在炎症微环境下TPPU对hSCAPs的增殖可能并没有明显的促进作用,但TPPU可在一定程度上促进hSCAPs的成牙/成骨分化。

乳酸脱氢酶、腺苷脱氨酶、可溶性生长刺激表达基因2蛋白联合检测对结核性胸腔积液的诊断价值

目的 探讨结核性胸腔积液(pleural effusion,TPE)患者乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(soluble growth stimulation expressed gene 2,sST2)的表达水平,并分析3项联合检测对TPE的诊断价值。方法 选取2021年9月至2023年9月于西部战区总医院就诊的101例胸腔积液患者,依据是否存在结核分枝杆菌感染分为TPE组52例,对照组(非结核分枝杆菌感染)49例。收集一般资料,胸膜腔穿刺术收集患者胸腔积液,采用酶比色法检测LDH水平,波氏比色法检测ADA水平,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测sST2水平;应用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析LDH、ADA、sST2对TPE的诊断价值;多因素Logistic回归分析TPE发生的影响因素。结果 TPE组胸腔积液LDH、ADA与sST2水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线结果显示LDH、ADA、sST2单项及三项联合预测胸腔积液患者发生TPE的AUC分别为0.865、0.867、0.880、0.954,三项联合诊断优于LDH、ADA、sST2单项诊断(Z=2.981、2.232、2.689,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示LDH、ADA、sST2均是TPE发生的影响因素(P<0.05)。结论 结核性胸腔积液患者LDH、ADA、sST2水平升高,三项联合检测对TPE具有一定的诊断价值。

甘蔗可溶性酸性转化酶(SoSAI1)基因的克隆及表达分析

【目的】克隆甘蔗可溶性酸性转化酶基因(SoSAI1)全长cDNA序列和5侧翼启动子序列,并分析其序列特征和基因表达模式。【方法】利用RACE技术克隆SoSAI1的全长cDNA序列,应用生物信息学软件分析SoSAI1预期编码蛋白特征;采用Genome Walking技术克隆SoSAI1的启动子序列;采用实时荧光定量PCR分析不同生长期SoSAI1在甘蔗叶和茎中的表达,以及PEG 6000、100 mmol·L-1NaCl和6℃胁迫下,SoSAI1在甘蔗苗期根和叶中表达模式。【结果】SoSAI1的cDNA序列全长为2 387 bp,ORF长2 058 bp,编码685个氨基酸,预测其分子量和等电点分别为74.44 kD和5.6,GenBank登录号为JQ406875。5侧翼启动子序列长417 bp,含有胚乳特异表达顺式作用元件和参与干旱诱导的MYB结合位点,GenBank登录号为KC862314。SoSAI1表达在生理成熟期的花序和花序轴中较高,而在成熟茎和老茎中较低。15%PEG和6℃能诱导叶中SoSAI1表达,而15%PEG和NaCl能诱导根中SoSAI1表达。【结论】获得SoSAI1全长cDNA序列和部分启动子序列,SoSAI1在甘蔗生长发育和蔗糖积累,并在应对环境胁迫中发挥作用。

Wx^mp基因背景下可溶性淀粉合成酶基因SSⅡa和去分支酶基因PUL对水稻蒸煮食味品质的影响

【目的】分析在同一主效基因(Wx^mp)背景下可溶性淀粉合成酶基因SSⅡa和去分支酶基因PUL对稻米蒸煮食味品质的影响,以期为水稻品质遗传改良提供依据。【方法】选择在SSⅡa和PUL存在多态性而其他淀粉合成酶相关基因没有多态性的半糯品系宁0145和粳稻品种武运粳21进行杂交,获得F2群体与F3株系。利用分子标记,选择含有Wx^mp基因的F2单株与F3株系,将这些F2单株与F3株系分成SSⅡa^nPUL^n、SSⅡa^nPUL^w、SSⅡa^wPUL^n和SSⅡa^wPUL^w4种基因型(n和w分别表示该基因来源于宁0145和武运粳21),分析不同基因型蒸煮食味品质性状的差异,探讨同一Wxmp基因背景下不同SSⅡa和PUL等位基因对蒸煮食味品质性状的影响。【结果】不同基因型间蒸煮食味品质性状均存在显著差异,来源于武运粳21的SSⅡa^w基因和PUL^w基因分别使直链淀粉含量增加0.29%~1.00%和0.62%~1.18%,且PUL的效应大于SSⅡa,两者间存在互作效应。SSⅡa^w基因和PUL^w基因降低胶稠度和崩解值,提高了热浆黏度、冷胶黏度、消减值和回复值,对糊化温度、峰值黏度和峰值时间的作用较小。【结论】明确了Wx^mp背景下SSⅡa和PUL基因对稻米蒸煮食味品质的遗传效应,该研究结果为SSⅡa和PUL基因的分子标记辅助选择改良稻米品质提供了理论依据。

光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶小亚基基因的克隆

光合细菌 C.vinosum可溶性氢酶由 52 k Da和 2 1.5k Da两个亚基组成 .该酶大亚基 N-末端氨基酸序列为 :SRTITIEPVTRXEGHAR,小亚基 N末端氨基酸序列为 :STQPKITVATXL DG.根椐大、小亚基 N-末端氨基酸序列设计两套引物 ,Primer1:5′g AT(g/ C) g T g AT(g/ C) g T(g/ A) Cg3′和 Primer2 :5′A g C AC(C/ g) CAg CC(C/ g) AA(g/ A) ATC3′,通过 PCR扩增获得 0 .6 kb的扩增片段 .克隆并对该片段序列进行分析 ,结果表明 ,该片段包含小亚基基因的全序列 .可溶性氢酶小亚基由 179个氨基酸残基组成 ,分子量为 2 1.8k Da,含有 Ni Fe-氢酶保守的序列框 :Cxx C......Gx Cxxx G......

甘蔗可溶性酸性转化酶基因的克隆及序列分析

可溶性酸性转化酶在植物糖代谢中起着关键作用,为了研究甘蔗中可溶性酸性转化酶,利用电子克隆与RT-PCR方法从甘蔗中分离出1个甘蔗可溶性酸性转化酶基因DNA及cDNA序列,DNA序列长度为3 266 bp,含有3个外显子和2个内含子,cDNA序列长度为1 890 bp,包含1 656 bp的完整开放阅读框,编码551个氨基酸。BLASTX分析显示,该蛋白与其它植物已知的酸性可溶性蔗糖转化酶具有很高的同源性,推测该蛋白为可溶性酸性转化酶。预测甘蔗SAI家族可能只有1个基因,这可能与其大量积累蔗糖的能力有重要关系。

“库”对可溶性糖及碳氮代谢相关酶基因表达影响

【目的】分析不同"库"容量对水稻灌浆后期叶、茎、鞘中可溶性总糖含量及剑叶蔗糖代谢相关酶活性、Rubisco和谷氨酰胺合成酶同工型基因转录表达量的影响。【方法】选用寒地粳稻穗重型超级稻品种‘松粳9号’和穗数型高产品种‘龙稻11号’作为供试材料进行盆栽试验。在灌浆期分别进行不同剪穗处理,分别是无穗、半穗和全穗处理。【结果】表明,在同等的"源"条件下减小"库"容量有利于提高籽粒的粒重和成熟度,随着"库"容量的增加所需的灌浆时间就越长;没有"库"容时光合产物主要贮藏在叶、茎、鞘等营养器官中,但有"库"容时主要转移到"库"中,"库"越大转移的光合产物也越多;灌浆后期SPS、AI、SuS活性呈下降,期间的酶活性大小表现为全穗>半穗>无穗,"库"容量越大SPS、AI、SuS酶活性以及Rubisco和谷氨酰胺合成酶同工型基因的转录表达量也越高;Rubisco同工型基因和谷氨酰胺合成酶同工型基因的上调表达会促进蔗糖代谢相关酶活性。【结论】水稻高产甚至超产不仅要构建大的"库"容量,而且还要保障灌浆时间。

利用等位基因特异性PCR检测水稻可溶性淀粉合酶基因的单核苷酸多态性

单核苷酸多态性(SNP)广泛分布于水稻基因组中,SNP分型已成为水稻遗传作图、关联分析、资源鉴定和分子标记辅助选择等研究的重要技术。本文选择水稻可溶性淀粉合酶基因SSIIIa的12个SNP位点,研究了利用等位基因特异性PCR法检测SNP的可行性。按照等位基因特异性PCR原理设计引物3'末端碱基,并根据每个SNP位点引物3'端的错配类型,在上游引物3'末端第3位引入不同的错配碱基,结果均获得了很好的扩增特异性,PCR检测结果与测序结果吻合。表明,等位基因特异性PCR是一种简便、快捷、可靠和低成本的SNP分型方法,可有效应用于水稻可溶性淀粉合酶基因的种质资源鉴定和分子标记辅助选择育种等相关研究。

可溶性酸性转化酶SAI基因在不同甘蔗基因型中表达分析

探讨与蔗糖代谢相关的甘蔗可溶性酸性转化酶(soluble acid invertase,SAI)基因时空表达,比较了桂糖28号(GT28)、拔地拉、新台糖20号(ROC20)、新台糖22号(ROC22)四个甘蔗基因型的+1、0叶、幼嫩叶鞘和幼茎4个部位在工艺成熟期中甘蔗SAI基因的表达水平。结果表明,在工艺成熟期甘蔗SAI在4个甘蔗基因型中4个部位均检测到其有表达,但甘蔗SAI表达水平在不同甘蔗基因型与组织部位因在不同工艺成熟阶段而有所差异。其中,SAI基因在工艺成熟前期有较高表达,而后逐渐下低,但在不同基因型的不同部位中表达规律性不是很明显,这可能与所用的甘蔗材料遗传背景等有关。

滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究

目的为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的s PPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究。方法根据滇重楼c DNA文库中筛选到的s PPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将Pps PPase插入到原核表达载体p EASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行诱导表达。结果滇重楼中Pps PPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高为94%;Pps PPase编码的蛋白相对分子质量是23.4k Da,理论等电点p I为5.6,特异识别区域即位于98-104位之间即DNDPMDV。成功构建了原核表达载体p EASY-E1-Pps PPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大肠杆菌中能够表达,当IPTG诱导2h时表达量较高。结论首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考。

幽门螺杆菌肽脱甲酰基酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达与活性检测

幽门螺杆菌肽脱甲酰基酶(PDF)的可溶性表达是基于PDF靶位新药筛选的前提。本研究在克隆肽脱甲酰基酶基因(def)后,构建了其融合表达载体pTrcHisB-def,并在不同宿主菌(大肠杆菌BL21、DH5α和JM109)中进行了诱导表达。结果显示,只有在BL21(DE3)中获可溶性表达,产物经纯化后具有肽脱甲酰基酶活性。以上研究为PDF特性分析及PDF抑制剂筛选奠定了基础。