可溶性耐药相关钙结合蛋白的生物质谱分析与鉴定

The protein profiles of the drug-resistant cell line K562/A02 and its sensitive parental cell line K562 were compared by using high resolution two-dimensional gel electrophoresis with IPG strip of pH 4\^7\5\^9. One protein spot was found to be differentially expressed, which was identified as the soluble resistance-related calcium binding protein（sorcin）. Tandem mass spectrometric analysis of one tryptic peptide by a TOF-TOF analyzer as well as the western blot analysis substantiates the result derived from peptide mapping fingerprint data.

可溶性耐药相关钙结合蛋白同肿瘤多药耐药关系的研究进展

可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一种广泛存在于多种正常组织细胞及肿瘤细胞中的胞浆蛋白。sorcin可在多种耐药细胞中高表达,其耐药机制可能是它可以与细胞中钙离子结合,也可能与其阻断内质网膜上钙离子通道引起的细胞凋亡相关,但sorcin表达的量与耐药程度之间的关系还不明了。本文主要对sorcin的结构及其在耐药肿瘤细胞中的表达和导致耐药的机制进行综述。

可溶性耐药相关钙结合蛋白

可溶性耐药相关钙结合蛋白 (sorcin) ,是一种 2 2ku的胞浆蛋白 ,具有典型的“E Fhand”钙结合位点。sorcin可在多种耐药细胞株中高表达 ,推测可能是通过影响细胞内Ca2 + 浓度而参与耐药表型的维持 ,但sorcin表达的量与耐药程度之间的关系还不明了。在多种正常组织中也发现sorcin的表达 ,在心肌细胞中 ,sorcin通过影响Ca2 + 通道的活性而在兴奋 收缩偶联循环中发挥重要作用。

可溶性耐药相关钙结合蛋白

可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)是一个21·6kD的胞浆蛋白,具有典型的EF手臂(EF-hand)钙结合位点,广泛存在于多种组织中,在心肌细胞中含量最丰富.Sorcin可与肌浆网钙离子通道RyR相互作用,影响心肌细胞兴奋——收缩偶联.另一方面,sorcin在肿瘤耐药细胞中大量表达,它可以与细胞中钙离子结合,引起细胞内游离钙离子浓度下降,然后导致钙离子所介导的磷酸酶活性降低,使得具有排药功能的P-gp糖蛋白磷酸化水平下降,最终导致耐药.一旦明确引发和维持细胞耐药的作用机制,就可为克服肿瘤耐药提供新的靶点.同时随着RyR活性抑制作用研究的深入,有望通过sorcin转基因技术治疗心力衰竭.本文主要对sorcin的结构特点和生物学特性进行综述,并初步分析其耐药机制.

可溶性耐药相关钙结合蛋白在乳腺癌组织中的表达及预后

目的:研究可溶性耐药相关钙结合蛋白(Soluble resistance-related calciumbinding protein,Sorcin)在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(IHC)检测47例手术切除的乳腺癌组织中Sorcin的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:(1)Sorcin在乳腺癌组织中的阳性表达率为85.1%(40/47例),其中高表达27例(57.4%);(2)Sorcin与月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移、组织分级和雌激素受体状况差异均无显著性(P>0.05),但与孕激素受体状况似有一定关系(P<0.05);(3)Kaplan-Meier生存分析结果表明Sorcin表达与无瘤生存期和总生存期差异均无显著性(P>0.05);(4)COX多因素分析显示肿瘤大小、淋巴结转移与无瘤生存期及总生存期明显相关(P<0.05),组织分级也与无瘤生存期明显相关(P<0.05)。结论:Sorcin在乳腺癌组织中具有高表达,但与乳腺癌患者无瘤生存期和总生存期均无关。

可溶性耐药相关钙结合蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与预后关系

目的:探讨可溶性耐药相关钙结合蛋白(Solubleresistance-relatedcalciumbindingprotein,Sorcin)在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(IHC)检测60例手术切除的乳腺癌组织中Sorcin的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:1)Sorcin在乳腺癌组织中的阳性表达率为56.7%(34/60);2)Sorcin与月经状况、肿瘤大小、淋巴结转移、组织分级和激素受体状况均无明显差异(P>0.05);3)Kaplan-Meier生存分析结果表明Sorcin表达与无瘤生存期和总生存期均无明显差异(P>0.05);4)COX单因素分析和多因素分析显示肿瘤大小、淋巴结转移和ER与无瘤生存期及总生存期(P<0.05)明显相关,PR与总生存期(P<0.05)明显相关。结论:Sorcin在乳腺癌组织中具有高表达,与乳腺癌的无瘤生存期和总生存期皆无明显差异。

肝素结合蛋白联合APACHEⅡ评分在多重耐药菌感染呼吸机相关性肺炎中的诊断价值

目的探讨肝素结合蛋白(HBP)联合急性生理学和慢性健康状况评分系统(APACHE)Ⅱ评分在多重耐药菌(MDRO)感染呼吸机相关性肺炎(VAP)中的诊断价值。方法选取2016年1月至2020年1月在桂林市人民医院住院的64例VAP患者作为研究对象,根据痰培养的药敏试验是否耐药分为普通VAP组(34例)和MDRO感染VAP组(30例);选取同期无VAP的30例需要气管插管或气管切开有创机械通气治疗的患者作为非VAP组。比较三组患者的HBP、降钙素原(PCT)水平和APACHEⅡ评分,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)判断HBP、PCT、APACHEⅡ评分鉴别诊断MROD引起VAP的价值。结果三组患者的HBP、PCT水平和APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01),其中普通VAP组和MDRO感染VAP组的HBP、PCT水平和APACHEⅡ评分高于非VAP组;MDRO感染VAP组的HBP水平低于普通VAP组[(28.19±2.76)μg/L比(33.77±3.55)μg/L],PCT水平和APACHEⅡ评分高于普通VAP组[0.32(0.23,0.43)μg/L比0.25(0.17,0.37)μg/L、(19.70±3.01)分比(16.56±1.08)分](均P<0.05)。ROC曲线分析显示,HBP诊断MROD感染VAP的最佳临界值为30.456μg/L,灵敏度和特异度分别为83.33%和85.29%;APACHEⅡ评分诊断MROD感染VAP的最佳临界值为17.500分,灵敏度和特异度分别为80.00%和88.24%;HBP+APACHEⅡ评分诊断MROD感染VAP的最佳临界值为0.348,灵敏度和特异度分别为93.33%和82.35%。结论HBP联合APACHEⅡ评分对MORD感染VAP具有较高的诊断价值,早期检测HBP并结合APACHEⅡ评分可及时协助诊断,有助于提高MDRO感染VAP早期治疗的有效性。

反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响

目的 研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用。方法 采用Northern杂交 ,检测SGC790 1细胞及SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA表达水平的差异。将hCacyBPcDNA克隆到 pcDNA3.1中 ,构建反义核酸真核表达载体 pcDNA3.1/hCacyBP ,并转染耐阿霉素人胃癌细胞 ,用RT PCR检测转染细胞中hCacyBPmRNA水平的变化。用MTT比色法和FCM ,分别检测SGC790 1/ADR细胞、pcDNA3.1/hCacyBP 和 pcDNA3.1分别转染的SGC790 1/ADR细胞 ,对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度。结果 Northern杂交证实 ,SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA表达的水平显著高于SGC790 1细胞。成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP 。以 pcDNA3.1/hCacyBP 转染的SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA的表达水平 ,显著低于空载体转染及未转染的SGC790 1/ADR细胞。MTT检测表明 ,转染pcDNA3.1/hCacyBP 的细胞 ,对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC790 1/ADR细胞有所增高 ,生存率较后两者为低。FCM显示 ,转染 pcD NA3.1/hCacyBP 的SGC790 1/ADR细胞、转染 pcDNA3.1及未转染的SGC790 1/ADR细胞内ADR的蓄积浓度 ,分别为6 .72、5 .6 2和 5 .5 4。结论 hCacyBP碥码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响 。

Sorcin蛋白质高表达与胃癌细胞多药耐药的关系

目的:应用蛋白质组学技术筛选胃癌耐药相关的蛋白质。方法:以胃癌细胞SGC7901和长春新碱诱导的耐药胃癌细胞SGC7901/VCR为研究对象,应用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术分离两种细胞的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。Western blot验证差异蛋白质的表达水平,反义核酸技术分析差异蛋白与胃癌耐药的关系。结果:可溶性耐药相关性钙结合蛋白(sorcin)在SGC7901/VCR细胞中高表达,反义核酸抑制sorcin表达可增强SGC7901/VCR对长春新碱的化疗敏感性。结论:Sorcin蛋白质高表达与胃癌细胞多药耐药密切相关。

HMGA1、S100A4与子宫内膜癌浸润、转移及顺铂耐药的相关性

目的研究高迁移率族蛋白A1(HMGA1)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)与子宫内膜癌浸润、转移及顺铂耐药的相关性。方法收集行手术切除的96例子宫内膜癌组织标本,另选因子宫内膜增生手术切除的病理子宫组织标本45例作为对照组。检测两组织标本HMGA1、S100A4表达情况,比较其在不同临床病理参数中表达水平,通过logistics分析危险因素,再经相关性分析其与HMGA1、S100A4表达的关系。结果子宫内膜癌组HMGA1表达水平高于对照组(P<0.05),且S100A4阳性表达率高于对照组(P<0.05)。子宫内膜癌组织HMGA1、S100A4表达情况在不同年龄中差异无统计学意义(P>0.05),在组织学分级、FIGO分期、肌层浸润程度、有无淋巴结转移、对顺铂有无耐药方面,差异具有统计学意义(P<0.05)。经logistics分析,HMGA1、S100A4高表达是子宫内膜癌组织肌层浸润≥1/2、淋巴结转移、对顺铂耐药的危险因素。经相关性分析,HMGA1高表达、S100A4阳性表达与肌层浸润深度、淋巴结转移、对顺铂耐药呈正相关(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中HMGA1表达上调、S100A4呈阳性表达,组织肌层浸润程度、淋巴结转移、对顺铂耐药与其密切相关,可作为临床观察有效指标。

细粒棘球蚴可溶性耐药相关钙结合蛋白的生物信息学分析及反应原性鉴定

目的采用在线生物信息学软件对细粒棘球蚴可溶性耐药相关钙结合蛋白(EgSorcin)的理化特性、结构和功能进行预测和分析,原核表达细粒棘球蚴sorcin基因,鉴定重组蛋白的反应原性,为研发细粒棘球蚴病新型防控制剂提供依据。方法从GenBank数据库下载EgSorcin的氨基酸序列及其编码基因的核苷酸序列,运用在线生物信息学软件预测EgSorcin蛋白的理化性质、保守结构域、翻译后修饰位点、T细胞和B细胞抗原表位、二级和三级结构;比对分析不同物种间Sorcin序列的一致性,构建系统发育进化树。提取细粒棘球绦虫原头蚴总RNA,RT-PCR扩增egsorcin基因片段,构建重组质粒pET-28a-egsorcin,转化大肠埃希菌,原核表达重组EgSorcin蛋白,利用Western blot鉴定该蛋白的反应原性。结果生物信息学软件预测EgSorcin编码基因长519 bp,编码172个氨基酸残基。该蛋白含有5个EF-Hand结构域,属于EF-Hand蛋白家族;含有10个潜在的B细胞表位、6个CTL细胞表位和11个Th细胞表位;二级结构以α螺旋为主,占58.14%;EgSorcin的三级结构模型为同型二聚体。成功扩增egsorcin基因片段并构建重组质粒pET-28a-egsorcin,利用原核表达系统表达的重组EgSorcin蛋白分子质量约为20 ku,与预期相符。Western blot分析显示,该重组蛋白可与细粒棘球蚴感染羊血清、细粒棘球绦虫感染犬血清反应,而不与健康羊血清、健康犬血清反应。结论EgSorcin蛋白含有5个EF-Hand结构域及多个B、T细胞表位;原核表达的重组EgSorcin蛋白具有良好的反应原性,可能成为潜在的细粒棘球蚴病诊断候选抗原分子。

Sorcin表达受抑乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/A02对化疗药物敏感性的观察

目的观察可溶性耐药相关钙结合蛋白基因(Sorcin)表达受抑乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/A02对化疗药物敏感性的影响,并探讨其机制。方法将MCF-7/A02细胞分为两组,观察组转染针对Sorcin基因的siRNA,对照组不转染。MTT法检测细胞对阿霉素(ADR)、依托泊苷(VP-16)、高三尖杉酯碱(HHT)、长春新碱(VCR)的敏感性,用流式细胞仪检测细胞对碱性蕊香红-123(Rho-123)的外排功能及VP16处理后的细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中的Bcl-2、Bax蛋白。结果观察组ADR、VP-16、HHT、VCR的IC50分别为(19.92±1.29)(、31.47±2.36)(、4.19±0.27)(、2.96±0.23)μg/ml,对照组分别为(111.57±5.60)(、144.77±20.43)(、24.30±0.43)、(5.89±0.28)μg/ml,两组比较,P均<0.01。观察组细胞凋亡率为9.15%±0.25%,对照组为4.10%±0.12%,两组比较,P<0.01。观察组细胞内Rho-123的荧光强度为6.34±0.86,对照组为5.42±0.73,两组比较,P>0.05。观察组细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达量为0.59±0.0321、.80±0.03,对照组分别为0.69±0.025、1.94±0.04,两组比较,P均<0.05。结论抑制Sorcin表达可显著增强MCF-7/A02细胞对化疗药物的敏感性;这种作用可能与其调节Bcl-2/Bax通路促进MCF-7/A02细胞凋亡有关。

sorcin与肿瘤耐药的关系

sorcin是可溶性耐药相关钙结合蛋白,广泛存在于多种组织中,相比正常组织,它在肿瘤组织中高表达。有研究证实,sorcin高表达与肿瘤多药耐药密切相关,明确其耐药机制,可为肿瘤耐药诊断和治疗提供新靶点。

Sorcin表达水平影响卵巢癌患者化学药物治疗耐药及生存时间

目的:探讨可溶性耐药相关钙结合蛋白质(soluble resistance-related calcium-binding protein,Sorcin)与卵巢癌化学药物治疗(以下简称化疗)耐药的关系及对患者生存时间的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测27例卵巢癌化疗耐药和37例卵巢癌化疗敏感患者组织中Sorcin的表达情况,分析Sorcin与卵巢癌患者化疗耐药及临床病理特征的相关性;采用Log-rank检验对患者生存时间与Sorcin进行单因素影响分析;采用Cox回归模型分析各临床病理因素与生存时间之间的关系;采用Kaplan-Meier方法分析化疗耐药组与敏感组的生存率。结果:卵巢癌化疗耐药组的Sorcin免疫组织化学半定量评分显著高于敏感组(P<0.001)。64例卵巢癌患者Sorcin的表达在不同年龄组、有无腹水组、有无大网膜转移组、不同临床分期、不同病理分级和组织类型组间的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。64例卵巢癌患者的Sorcin表达与生存时间呈负相关(r=–0.326,P<0.05)。Log-rank检验显示Sorcin的表达升高对卵巢癌患者的生存时间有影响(P<0.05)。Cox回归模型分析显示化疗耐药对生存时间有显著性影响[相对危险度(RR)为8.635,P<0.001]。患者年龄、有无腹水、有无大网膜转移、临床分期、病理分级、组织类型对生存时间均无影响(P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示化疗敏感组的生存率明显优于耐药组(P<0.05)。结论:Sorcin可能与卵巢癌化疗耐药相关。Sorcin表达水平可能影响卵巢癌患者的生存时间。化疗耐药是卵巢癌患者预后不良的独立危险因素。

可溶性钙结合蛋白与肿瘤多药耐药

可溶性钙结合蛋白sorcin主要作用是调节细胞内的钙平衡,在肿瘤多药耐药(MDR)中起重要作用。Sorcin不仅自身可导致耐药,而且可通过增加P-糖蛋白(P-gp)表达等途径间接导致耐药,因此可能在临床对肿瘤的治疗中成为逆转肿瘤MDR的靶点。与sorcin相关的治疗MDR的新方法包括反义寡核苷酸转染技术、二氢杨梅素和钙通道阻滞剂治疗等。针对sorcin的作用机制和治疗方法做一综述,为临床逆转MDR提供依据。

Sorcin蛋白高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的关系

目的探讨Sorcin高表达与肺癌细胞NCI-H446多药耐药的相关性。方法研究对象为肺癌细胞NCI-H446,以顺铂为诱导药物,建立多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP;应用反义核酸技术抑制NCI-H446/CDDP细胞Sorcin的表达建立转染细胞,为反义核酸组,同时设空白对照组。通过RT-PCR及Western-blot分别检测各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达;MTT法测定NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组3组细胞在不同化疗药物DDP、VCR、ADM、VP-16作用下生存率;用Pearson相关分析Sorcin高表达与肺癌细胞株NCI-H446多药耐药的相关性。结果各组细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平的表达,NCI-H446/CDDP组与空白对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05),NCI-H446组、反义核酸组、NCI-H446/CDDP组各组间比较均具有显著性意义(P<0.05);NCI-H446/CDDP细胞中Sorcin在核酸及蛋白水平均明显高于NCI-H446细胞,分别为NCI-H446细胞的9.81倍和7.67倍。各组细胞在不同化疗药物作用下IC50:NCI-H446/CDDP组>反义核酸组>NCI-H446组,各组间比较差异具有显著性意义(P<0.05)。Pearson相关提示:Sorcin核酸及蛋白水平的表达与在不同化疗药物作用下各组细胞的IC50值呈负相关(P<0.05)。结论 Sorcin蛋白的高表达与肺癌多药耐药相关,抑制Sorcin蛋白的表达可以逆转肺癌多药耐药性。

SORCIN与肿瘤耐药及耐药相关转运体研究进展

可溶性耐药相关钙结合蛋白(soluble resistance-related calcium-binding protein,SORCIN)是一个22k Da的具有典型"EF-hand"结构的钙结合蛋白,参与细胞内钙稳态调节。SORCIN广泛分布于多种组织,其中在正常的心脏与脑组织中高表达,而在部分肿瘤组织中过表达。近年来,大量的临床数据显示SORCIN与肿瘤耐药性密切相关。基础研究表明SORCIN不仅参与肿瘤细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的形成,且与肿瘤的恶性程度、不良预后密切相关。此外,部分研究证明SORCIN参与ATP结合盒转运体(ABC transporter)的调节,进而对肿瘤耐药性产生影响。因此,SORCIN有望成为肿瘤耐药诊断及治疗的新靶点。本文对SORCIN及其在肿瘤耐药方面的研究进展进行综述。

汉防己甲素对K562/A02细胞株SORCIN基因表达的影响

本研究旨在探讨汉防己甲素(Tet)在逆转K562/A02细胞耐药与耐药相关的可溶性钙结合蛋白(SORCIN)基因表达之间的关系,为Tet的临床应用提供新的理论基础。通过MTT法筛选出所需浓度Tet,与K562/A02细胞株孵育培养48小时后,通过MTT检测Tet对柔红霉素(DNR)细胞毒性的影响,用RT-PCR方法检测SORCIN基因表达的变化,用Western blot方法检测sorcin表达蛋白的变化。结果表明:在所选浓度范围内,Tet可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用,(Tet浓度为0,0.5,1.0,2.0mg/L时DNR和Tet的IC50分别为11.3±0.17,5.15±0.10,3.91±0.06,2.52±0.04mg/L,p<0.01);K562/A02细胞中SORCIN基因高表达,且随着Tet浓度的增加SORCIN的表达先增强后减弱(Tet浓度为0.5mg/L时增强,1.0和2.0mg/L时减弱,p<0.05);K652细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,且随着Tet浓度的增加先增强后减弱(Tet浓度为0.5mg/L时增强、1.0和2.0mg/L时减弱,p<0.05)。结论:MTT检测显示Tet对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,Tet可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,但并不与其耐药逆转作用完全相关。

环孢菌素A对多发性骨髓瘤患者Sorcin基因表达和临床疗效的影响

目的探讨环孢菌素A（CsA）对多发性骨髓瘤（MM）患者可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin）基因表达和临床疗效的影响。方法选择32例MM患者（MM组）和27例正常人（对照组）为研究对象。MM组均行联合化疗，其中临床耐药者（M亚组）在联合化疗前24h开始予CsA8～12mg／（kg·d）静滴或口服，3d后改半量用2d。治疗前后采用RT—PCR方法检测两组骨髓Sorcin基因表达率，观察临床疗效。结果治疗前Sorcin基因表达率MM组和对照组分别为31．25％和0．30％（P〈0．05），M亚组和非临床耐药者（UM亚组）分别为75．00％和16.670％（P〈0．05）；M亚组治疗前后Sorcin基因表达率分别为75．00％和62.50％（P〉0．05），完全缓解（CR）率和总有效率分别为25．00％和62．50％（P〈0．05）。结论CsA可逆转MM患者多药耐药．增强临床疗效，但其机制与Sorcin基因表达无关。

Sorcin的表达影响人胶质瘤细胞对顺铂的敏感性

目的:研究可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin)在人胶质瘤细胞对顺铂敏感性中的作用。方法:构建pSilencerTM3.1-H1-sorcin siRNA表达质粒;质粒转染人胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blotting法检测sorcin mRNA和蛋白表达的变化;MTT法检测U251细胞的生存率;Western blotting检测耐药相关蛋白的表达变化。结果:经酶切和测序鉴定,成功构建pSilencerTM3.1-H1-sorcin siRNA表达载体;将该表达载体转染U251细胞,RT-PCR和Western blotting结果显示sorcin mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05);MTT结果显示,抑制sorcin表达可增强U251细胞对顺铂的敏感性(P<0.05);同时发现抑制U251细胞的sorcin表达能降低耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的蛋白水平(P<0.05)。结论:抑制sorcin表达增强U251细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与降低耐药相关蛋白P-gp和MRP1的表达有关,提示sorcin可能与胶质瘤细胞顺铂耐药有关。