响应面法优化骨素酶解制备可溶性肽工艺研究

利用响应面法分析了酶解骨素制备可溶性肽的工艺,以酶解温度、时间、pH及酶用量为影响因素,酶解液中可溶性肽含量、酶解液的苦味和鲜味为优化指标。结果显示,酶解温度和pH对可溶性肽含量、酶解液鲜味有显著影响(p<0.05);拟合模型验证结果表明,所得模型在预测可溶性肽含量时具有一定可靠性;酶解骨素的最优工艺为温度60℃、时间2h、pH6、酶用量10000U/g,此时可溶性肽含量最高,酶解液的鲜味较强,无苦味。

Alcalase酶水解玉米蛋白粉制备可溶性肽最佳条件的研究

对影响Alcalase酶水解玉米蛋白粉水解度的主要因素为底物浓度、酶浓度、温度和pH值进行了研究。通过对正交试验数据的分析,结果表明,对水解度影响最大的因素为酶浓度,其次是底物浓度和温度,pH值影响最小。最佳水解条件为:酶浓度2.5%、底物浓度5%、温度50℃和pH值8.5,在此条件下,水解6h,水解度可达28.53%。以后随着时间的延长,水解度基本上没有变化。

酶法水解制备鲅鱼可溶性肽的工艺研究

为确定木瓜蛋白酶水解鲅鱼的最佳条件,为低值小鲅鱼的开发利用奠定基础。采用木瓜蛋白酶水解脱脂后的鲅鱼粉,以蛋白质水解度为评价指标,通过正交试验考查了酶浓度、底物浓度、水解温度和水解时间对水解效果的影响。确定最佳水解条件为:酶浓度5 000U/g,底物浓度5%,水解温度50℃和水解时间6h,在该条件下水解,水解度可以达到33.21%。在此工艺条件下,鲅鱼蛋白水解效果较好,且水解液色泽较浅,有浓郁的鱼香味。

枯草芽孢杆菌发酵玉米黄粉制备可溶性肽

采用枯草芽孢杆菌发酵玉米湿法生产淀粉的副产物来制备玉米可溶性肽。通过单因素和响应面试验对发酵培养基及培养条件进行了系统优化,得到最佳发酵培养基为:脱淀粉玉米黄粉(destarch corn gluten meal,DCGM)添加量100 g/L、蔗糖添加量8 g/L、NaCl添加量1.0 g/L。最佳发酵条件为:发酵时间42 h、培养基初始pH 9.0、发酵温度37℃、接种量4%、发酵转速180 r/min。在此优化条件下,摇瓶发酵获得可溶性肽含量为22.7 g/L,是优化前的13.3倍。理化分析显示,该可溶性肽以分子质量<1 000 Da的低聚肽为主(将近80%),具有突出的抗氧化活性,尤其是O^2-·清除率达60%,DPPH·清除率达80%,远优于目前的商品肽。该研究表明,利用枯草芽孢杆菌发酵玉米黄粉产可溶性肽是可行的,为玉米黄粉的高值化利用提供技术依据。

红曲霉发酵高温豆粕高产可溶性多肽

通过利用红曲霉发酵高温豆粕产生可溶性多肽,确定菌株对变性蛋白质有一定的分解作用;并采用紫外诱变红曲霉,经初筛和复筛,最终筛选出能高产可溶性多肽的菌株。结果表明：红曲霉发酵可分解高温豆粕中的蛋白质,并且产生分子质量介于7.8~20.1 kD的可溶性多肽。发酵120 h可产生（13.41±0.20）mg/mL的可溶性多肽,是原豆粕的3.60倍。15 W紫外线灯35 cm处,搅拌条件下照射50 s,红曲霉的致死率为（82.70±2.20）%。在此诱变条件下得到一株高产可溶性多肽的突变红曲霉0501100菌株。该菌株在发酵豆粕96h时产生的可溶性多肽含量达到（17.20±0.18）mg/mL,是原菌株在同等发酵时间条件下产生可溶性多肽的1.47倍,是原豆粕的4.61倍,缩短了发酵时间并且有较好的遗传稳定性。

豆渣中可溶性大豆蛋白肽的提取及结构表征

研究了豆渣的预处理条件,采用正交实验设计法确定了蛋白酶水解豆渣制备可溶性蛋白肽的最佳工艺,并对其结构进行表征。结果表明:豆渣在120℃、pH9·0条件下预处理15min,可明显增加可溶性蛋白肽的提取率。先采用碱性蛋白酶在pH9·0、温度55℃条件下作用4h后,再用木瓜蛋白酶在pH7·0下作用4h,可溶性蛋白肽提取率达到了63·03%,氨基酸态氮含量控制在5·15%;傅里叶变换红外光谱分析表明,该可溶性大豆蛋白肽具有蛋白质和多肽的双重特征。

多普勒超声联合血清可溶性间皮素相关肽及癌胚抗原检测对早期卵巢癌的预测价值

目的探讨多普勒超声联合血清可溶性间皮素相关肽(SMRP)及癌胚抗原(CEA)检测对早期卵巢癌的预测价值。方法选取2015年1月-2017年1月该院收治的120例卵巢肿块患者依据病理诊断结果分为卵巢癌组(55例)和良性肿瘤组(65例),另选取同期来该院体检的50例正常女性作为健康人群组。所有患者均行彩色多普勒超声检查,同时采集外周血测定血清SMRP、CEA水平。与病理诊断结果作比较,分析多普勒超声、SMRP和CEA单独应用及联合诊断卵巢癌的诊断效能。结果卵巢癌组、良性肿瘤组、健康人群组3组间血清SMRP、CEA水平比较,差异有统计学意义(F=68.546和31.367,均P=0.000);卵巢癌组血清SMRP和CEA水平高于良性肿瘤组和健康人群组(P<0.05)。良性肿瘤组与健康对照组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组超声血流参数阻力指数(RI)和搏动指数(PI)低于良性肿瘤组(P<0.05)。超声联合血清SMRP、CEA水平联合检测的敏感性(92.7%)高于其他4项检测的敏感性(83.6%、72.7%、75.0%及80.0%)(P<0.05)。联合检测在提高卵巢癌检测敏感性的同时,还保持较高的特异性(80.0%),超声联合血清SMRP、CEA水平联合检测的ROC曲线下面积(0.846)大于各指标单独检测(0.810、0.665及0.730)(P <0.05)。结论超声联合血清SMRP、CEA水平检测可提高卵巢癌诊断的敏感性,并能够保持较高的特异性,对于卵巢癌的的早期筛查诊断具有一定价值。

经阴道超声联合血清SLPI、SMRP检测对卵巢肿瘤良恶性的诊断价值

目的探究经阴道超声(TVUS)联合血清分泌性白细胞肽酶抑制因子(SLPI)、可溶性间皮素相关肽(SMRP)检测对卵巢肿瘤良恶性的诊断价值。方法选择2022年1月—2023年6月陕西中医药大学第二附属医院妇科诊治的卵巢肿瘤患者120例,根据病理诊断结果分为良性组(70例)和恶性组(50例);使用彩色多普勒超声诊断仪对患者进行灰度超声检查和彩色多普勒超声检查并记录各项参数,ELISA检测血清SLPI、SMRP水平;多因素Logistic回归分析方法分析卵巢肿瘤良恶性的影响因素;ROC曲线分析TVUS联合SLPI、SMRP对卵巢肿瘤良恶性的诊断价值。结果良性组中TVUS阴性59例(84.3%)、阳性11例(15.7%),恶性组中阳性33例(66.0%),阴性17例(34.0%)(χ^(2)=31.759,P<0.001);恶性组病灶最大直径、收缩期最高峰值血流速度(Vs)、舒张期最低峰值血流速度(Vd)高于良性组(t/P=6.074/<0.001,3.247/0.002,3.048/0.003);与良性组比较,恶性组血清SLPI、SMRP水平较高(t=7.515,7.818,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果表明,SLPI高、SMRP高、Vs高、Vd高为卵巢恶性肿瘤的独立危险因素[OR(95%CI)=1.625(1.066~2.477),1.834(1.053~3.194),1.375(1.033~1.831),1.624(1.059~2.490)];ROC曲线分析结果表明,TVUS、血清SLPI、SMRP及三者联合诊断卵巢肿瘤良恶性的AUC分别为0.751、0.820、0.813、0.948,三者联合诊断的AUC优于各自单独诊断(Z=5.468、3.441、3.517,P均<0.001)。结论SLPI、SMRP在卵巢恶性肿瘤患者血清中表达上升,是恶性肿瘤发生的影响因素,TVUS联合血清SLPI、SMRP诊断卵巢肿瘤良恶性具有较高的价值,可用于临床实践。

饲料添加剂硒和谷胱甘肽对微囊藻毒素胁迫下罗非鱼肝脏去毒相关基因诱导表达的影响

为从分子水平探讨饲料添加剂硒(Se)和谷胱甘肽(GSH)对淡水养殖鱼类肝脏微囊藻毒素胁迫下去毒分子机理的影响,实验杂交罗非鱼一组喂食含0.15 mg/kg Se的富硒酵母粉饲料,一组喂食含普通酵母粉的饲料,喂食一个月以上;实验尼罗罗非鱼一组喂食含1 g/kg GSH的饲料,一组喂食普通饲料,两组均饱食10 d.所有实验组再均分两组,一组腹腔注射磷酸缓冲液(PBS),一组按体质量注射腹腔注射50μg/kg微囊藻毒素-LR(MC-LR),24 h后分离肝脏组织.以β-肌动蛋白作为外参照,采用半定量RT-PCR方法研究Se和GSH分别对罗非鱼肝脏去毒相关基因转录水平的诱导改变.结果表明,未喂食Se的实验组,杂交罗非鱼肝脏alpho-可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGSTA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)基因mRNA表达水平在腹腔注射50μg/kg MC-LR 24 h后,均较PBS组有诱导趋势;Se+MC-LR组sGSTA和GPX基因mRNA表达水平,均较Se+PBS组略低,可能与添加剂的低剂量添加相关.喂食GSH的实验组,尼罗罗非鱼腹腔注射MC-LR组,肝脏sGSTA基因mRNA表达水平较PBS组有诱导趋势;Se+MC-LR组GPX基因mRNA表达水平,较Se+PBS组有升高趋势,而sGSTA和rho-可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGSTR)基因mRNA表达水平则轻微降低.本实验首次从基因表达水平比较研究了Se和GSH对罗非鱼微囊藻毒素压力情况下,肝脏去毒酶基因表达的影响变化,为Se和GSH饲料添加剂在鱼类饲料中的合理添加提供分子水平的理论依据.

卵巢癌患者腹腔镜术后外周血IL-37、HK10、SMRP水平监测意义研究

目的探究卵巢癌腹腔镜根治术后外周血白介素-37(IL-37)、人激肽释放酶10(HK10)、可溶性间皮素相关肽(SMRP)水平与疗效及复发的相关性。方法选取2020年1月至2021年10月成都市第五人民医院收治的106例卵巢癌患者作为研究对象,设为研究组。另选取同期100例卵巢良性肿瘤患者作为对照组。比较两组血清IL-37、HK10、SMRP水平,比较研究组腹腔镜根治术不同疗效、复发情况患者术后血清IL-37、HK10、SMRP水平,分析血清IL-37、HK10、SMRP水平预测术后复发的价值。结果研究组术前血清IL-37、HK10、SMRP水平均高于对照组(P<0.05);研究组完全缓解患者术后7 d、化疗后血清IL-37、HK10、SMRP水平均低于部分缓解患者,部分缓解患者均低于稳定患者,稳定患者均低于进展患者(P<0.05);研究组复发患者术后7 d、化疗后血清IL-37、HK10、SMRP水平均高于未复发患者(P<0.05);化疗后血清IL-37、HK10、SMRP水平预测卵巢癌腹腔镜根治术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.801、0.768、0.742,联合预测的AUC最大,为0.910。结论卵巢癌腹腔镜根治术后血清IL-37、HK10、SMRP水平与疗效密切相关,且化疗后各指标联合在预测术后复发方面具有较高的预测效能。

ENA多肽抗体检测分析

目的 比较两种检测可溶性核抗原 (ENA)多肽抗体方法的敏感性和特异性 ,正确认识ENA抗体。方法 用免疫印迹法 (IBT法 )和免疫双扩散法 (ID)检测 13 3例结缔组织病和 413例非结缔组织病患者血清中的ENA抗体。结果 13 3例结缔组织病患者 ,IBT法检测抗Sm、抗u1RNP、抗SSA、抗SSB的敏感性均高于ID法 ,但由于IBT法抗原制作过程中某些技术性原因 ,造成IBT法不可避免的假阴性和假阳性。结论 IBT法检测ENA抗体敏感性高于ID法。IBT法和ID法在临床抗ENA抗体的检测中可以互相验证和补充 ,二者相结合可显著提高检出率。

ENA多肽抗体免疫功能检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值

目的探讨可溶性核抗原(ENA)多肽抗体免疫功能检测在自身免疫性疾病(AID)中的应用价值.方法198例AID患者,其中系统性红斑狼疮(SLE)99例,类风湿关节炎(RA)45例,干燥综合征(SS)24例,混合性结缔组织病(MCTD)12例,系统性硬化症(PSS)8例,自身免疫性肝炎(AIH)6例,特发性血小板减少性紫癜(ITP)4例.另选取40例健康体检者作为对照组,均进行ENA多肽抗体免疫功能检测.观察不同类型AID患者及对照组不同抗原IgG类抗体的免疫功能检测结果.结果SLE患者的抗核小体抗体(抗NKS)阳性检出率为96.97%(96/99),RA患者的抗组蛋白抗体(抗His)阳性检出率为46.67%(21/45),SS患者的抗干燥综合征A抗体(抗SS-A)阳性检出率为66.67%(16/24),MCTD患者的抗SS-A阳性检出率为58.33%(7/12),PSS患者的抗硬皮病抗原70抗体(抗Scl-70)阳性检出率为62.50%(5/8),AIH患者的抗SS-A阳性检出率为50.00%(3/6),ITP患者的抗Scl-70阳性检出率为75.00%(3/4).结论ENA多肽抗体免疫功能检测可以作为AID的重要筛查手段,尤其是NKS、SS-A、Scl-70抗体的应用敏感度更高.

高强度超声与低氯化钠盐协同作用下鲢鱼糜凝胶的品质变化

该实验以鲢鱼糜为研究对象,研究了高强度超声功率、时间及盐含量单因素对鱼糜凝胶破断力与凹陷深度的影响;在此基础之上,设计三因素五水平二次旋转正交实验,通过测定TCA-可溶性肽、持水性等指标分析各因素对鱼糜凝胶性能的影响,并建立回归方程,同时,通过绘制响应面分析因素间的交互作用。结果表明盐含量对鱼糜凝胶性能的影响最大,其次是超声时间,超声功率的影响最小。盐含量越高,鱼糜中蛋白质的降解程度越小,鱼糜凝胶持水性能越好。在低盐含量(<0.75%)下,TCA-可溶性肽随超声功率升高呈下降趋势;然而,在≥0.75%盐含量下,TCA-可溶性肽随超声功率升高而升高。综上,超声功率与低盐间存在协同效应,高强度超声处理可一定程度抑制低盐鱼糜中蛋白质的降解,提高了低盐鱼糜凝胶的持水性。

传统农家酱产蛋白酶菌株的分离及其在豆浆的应用

豆浆富含植物蛋白,但由于植物蛋白相较动物蛋白不易被人体吸收。利用产蛋白酶菌株发酵豆浆,可将植物蛋白降解成多肽和氨基酸,提高其消化吸收率。传统农家酱是以大豆为主要原料的传统发酵食品,含有大量能够水解大豆蛋白的优良菌株。该研究从传统农家酱中分离到8株产蛋白酶的芽孢杆菌并用于豆浆处理,处理后豆浆的可溶性肽含量显著提高,其中菌株BJ-20处理效果最显著;氨基态氮含量和水解度也有显著变化,其中BJ-6处理后的豆浆最佳,氨基态氮含量提高了10.87%,水解度为23.49%。同时,处理后豆浆的组织状态得到了明显改善。该研究丰富了豆类发酵菌种库,提高了大豆蛋白利用率,丰富了大豆产品种类,为大豆保健产品开发提供参考及理论支持。

外周血T细胞、SMRP、miR-4443在卵巢上皮性癌中的表达及相关性研究

目的:探究外周血T细胞、可溶性间皮素相关肽(SMRP)、微小RNA-4443(miR-4443)在卵巢上皮性癌中的表达及相关性研究。方法:选取2019年1月~2021年11月于天津市中心妇产科医院进行治疗的50例卵巢上皮性癌患者作为观察组,另选取卵巢上皮性良性肿瘤患者50例为对照组。采用流式细胞仪检测外周血T细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SMRP,实时荧光定量(Real-timePCR)检测miR-4443。分析外周血T细胞、SMRP、miR-4443与卵巢上皮性癌临床特征的关系及对卵巢上皮性癌的诊断价值。结果:观察组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平、SMRP表达量低于对照组,CD8^(+)、miR-4443水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、SMRP与临床分期,淋巴结转移、分化程度呈负相关,CD8^(+)、miR-4443与临床分期,淋巴结转移、分化程度呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、SMRP、miR-4443与临床分期,淋巴结转移、分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,联合检测对卵巢上皮性癌的诊断价值高于CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、SMRP、miR-4443单项诊断。结论:外周血T细胞、SMRP、miR-4443在卵巢上皮性癌中表达出现明显异常,且与患者病理特征相关,参与卵巢上皮性癌的发生、发展过程,联合检测具有较高的诊断价值。

羊骨蛋白酶解物免疫活性及酶解条件的研究

【目的】利用羊骨中胶原蛋白以获得免疫调节活性肽。【方法】利用木瓜蛋白酶对羊骨蛋白进行酶解,采用四元二次通用旋转设计,考察酶用量(E/S)、水解温度(Temp)、水解时间(t)和底物浓度(S)对免疫活性的影响,并选出最佳的酶解条件。同时采用Folin-酚法测定了酶解产物中可溶性肽的含量,采用SAS软件分析可溶性肽含量与免疫活性之间的相关关系。经Design expert7.1.2软件优选最佳酶解条件。【结果】得出木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:酶用量(E/S)1576U·g-1,水解温度为(Temp)64.05℃,水解时间(t)7.22h,底物浓度为(S)0.271kg·L-1。可溶性肽含量与免疫活性之间的相关系数r=0.045<r0.05=0.355,因此二者没有相关性。【结论】可溶性肽中含有具有免疫活性作用的肽,但它的含量并不决定免疫性的强弱。

利用大孔吸附树脂纯化花生水解蛋白

以水酶法制油工艺得到的花生水解蛋白为原料,从5种大孔吸附树脂中筛选出对花生水解蛋白中可溶性肽有较好吸附效果的DA201-C作为纯化树脂对其进行纯化。静态吸附试验表明,DA201-C对花生水解蛋白中可溶性肽有较好的吸附作用,能有效除去糖类杂质。DA201-C对可溶性肽吸附平衡时间为3 h,75%的乙醇解吸效果最好,解吸率为83.24%。动态试验结果显示,以pH为3的稀HAc溶液配制花生水解蛋白液能提高吸附率;解吸时,先用5BV去离子水洗去糖类杂质,再收集6BV75%乙醇洗脱的肽,水解蛋白中肽回收率为79.24%,除糖纯化后水解蛋白含量提高了近20%。

鲶鱼骨蛋白酶解产物抗菌性的酶解工艺优化

采用四因子二次通用旋转设计,以抑菌率为测定指标,对胃蛋白酶水解革胡子鲶Claris lareza鱼骨蛋白的条件进行了优化,同时测定了酶解产物中可溶性肽的含量,以分析抑菌率与可溶性肽含量之间的相关关系。经Design Expert 7.1.2软件优化,得出胃蛋白酶酶解鲶鱼骨蛋白的最优条件为:底物浓度0.277kg/L,加酶量1 408 U/g,水解温度39.2℃,水解时间4.86 h,在此条件下获得的水解物,对大肠杆菌、藤黄微球菌及枯草芽孢杆菌的抑菌率分别为71.40%、56.88%和64.54%。通过SAS软件分析二者的相关性,发现可溶性肽含量和抑菌率之间并不存在相关性。

微射流均质预处理提高大豆分离蛋白酶解效率及酶解产物乳化性能

为了探讨微射流均质预处理对大豆分离蛋白酶解效率及酶解产物乳化性能的影响，该文研究比较了微射流均质预处理前后大豆分离蛋白酶解产物的理化性质（水解度、亚基组成、蛋白溶解性、表面疏水性和分子量分布）和乳化性能（通过测定分析样品乳状液的平均粒径和微观结构评估样品的乳化性能）的变化。研究表明：大豆分离蛋白经过微射流均质预处理后采用木瓜蛋白酶水解，其酶解产物（水解度为1.7%）与对照大豆分离蛋白和未经预处理的酶解产物相比，在较低浓度下（30 g/L）制备出粒径细小的稳定乳状液（体积平均粒径≈1.6μm）。微射流均质预处理提高了大豆分离蛋白中α-7S和A-11S亚基的酶解敏感性，使酶解产物在水解度1.3%～1.7%范围内蛋白溶解性显著增加（P〈0.05），同时保持较高的表面疏水性值，与未经预处理的酶解产物相比形成了更多具有界面活性的可溶性多肽（分子量主要分布在11.3 kDa左右），在乳化过程中可有效防止乳液滴间发生桥联絮凝。因此微射流均质预处理是一种辅助提高大豆蛋白酶解效率和酶解产物乳化性能行之有效的方法。研究结果可为大豆蛋白深加工蛋白乳化剂提供理论和方法参考。

苜蓿叶蛋白及其酶解物抗氧化活性的比较

通过提取、酶解和超滤从苜蓿叶蛋白中分离得到相对分子质量不同的可溶性苜蓿叶蛋白及其酶解粗肽和精制肽,研究了其氨基酸组成和相对分子质量分布,并对其抗氧化活性进行了比较。结果表明:虽然从苜蓿叶分离的各种蛋白质其氨基酸组成相近,但相对分子质量大的可溶性苜蓿叶蛋白SALPr未发现抗氧化活性,而酶解后的粗肽CALPe以及超滤后的精制肽PALPe均表现出较强的抗氧化活性,并且存在剂量效应关系,而且PALPe抗氧化活性强于CALPe。这可能是由于PALPe中疏水性氨基酸和小分子肽的含量均高于CALPe。