片形吸虫分泌排泄抗原和虫体抗原的分析

用牛源肝片吸虫 (南京 )、牛源大片吸虫 (广西 )和羊源肝片吸虫 (实验感染 )制备可溶性虫体抗原 (BA)和分泌排泄抗原 (ES) ,以 SDS- PAGE电泳分析比较 ,结果显示 ,3株虫体可溶性虫体抗原至少有 2 0条以上的主要蛋白条带 ,分子量集中于 10～ 90 KD之间 ,它们之间无显著差异。而 3株分泌排泄抗原蛋白成分较简单 ,明显可分的条带不超过 5条 ,分子量集中于 10～ 30 KD之间 ,且均拥有 2 6～ 2 8KD的蛋白成分 ,提示该蛋白应为片形吸虫 ES抗原的主要免疫成分。

旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究

目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa^10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。

抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白（IgY），为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础。方法制备十二指肠钩虫成虫粗抗原，经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次，每只鸡每次的免疫剂量为200ug，初次免疫后28d进行加强免疫，加强免疫间隔时间为10d。水稀释法提取卯黄中的IgY，盐析、透析法纯化IgY，BCA法测定蛋白含量，并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和Westernblot分析。ELISA法动态检测抗体效价，观察抗体效价变化。结果免疫后55d的每个鸡蛋能提取40—55mg IgY，经SDS—PAGE和Western blot分析，纯化的IgY有2条主带，分子量分别是35ku和60ku，即IgY的轻链和重链。初次免疫后10d左右出现抗体，至免疫后50～55d为高峰，效价达到1：10000以上。IgV与人血清抗体均可识别30ku处钩虫抗原。结论十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体，为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础。

旋毛虫新生幼虫可溶性抗原的分析

目的初步分析云南大理旋毛虫不同时龄新生幼虫可溶性抗原的蛋白组分及其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白印迹（Westernblot）对旋毛虫不同时龄新生幼虫可溶性抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果SDS．PAGE结果显示：24h旋毛虫新生幼虫可溶性抗原显示36条蛋白染色条带，相对分子质量（幔）范围在160000—10000之间，其中主带8条，帆分别为73000、64000、58000、54000、46000、40000、34000、25000；48h旋毛虫新生幼虫可溶性抗原显示40条蛋白染色带，肘，范围在172000～10000之间，其中主带17条，恤分别为120000、102000、89000787000779000、74000、72000、64000、58000、54000、46000、40000、34000、32000、25000、18000、10000。Westernblot结果：以旋毛虫感染大鼠血清检测，24h旋毛虫新生幼虫可溶性抗原出现7条反应条带，恤分别为89000、78000、64000、58000、40000、34000、25000；48h新生幼虫可溶性抗原出现14条反应条带，M1分别为89000、87000、79000、74000、72000、64000、58000、40000、38000、34000、32000、25000、18000、10000。而正常大鼠血清在相应位置均无特异性反应条带出现。结论云南大理旋毛虫24、48h新生幼虫可溶性抗原存在7个共同蛋白组分，其中48h新生幼虫虫体可溶性抗原中存在24h新生幼虫可溶性抗原没有的5个蛋白组分，新生幼虫虫体可溶性抗原的蛋白组分随时龄的增大而增多。旋毛虫感染大鼠血清均可识别24、48h新生幼虫可溶性抗原中6个蛋白组分，说明这些蛋白组分具有较强的免疫反应性。

旋毛虫肌幼虫3种抗原的蛋白组分及免疫反应性比较研究

目的:研究大理猪源旋毛虫肌幼虫(Trichinela spiralis musclelarvae)3种抗原:虫体可溶性抗原(body soluble anti-gen,BSA)、表面抗原(surface antigen,SA)和排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen,ESA)的蛋白组分及其之间的差异,并进一步比较分析其免疫反应性,为分离和筛选出免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫肌幼虫抗原成分打基础。方法:采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对肌幼虫3种抗原蛋白成分进行分析;采用蛋白印迹(Western-blot)对成虫3种抗原蛋白组分进行免疫反应性分析。结果:SDS-PAGE电泳结果:BSA显示30条蛋白染色条带,分子量范围在100 kDa～12 kDa之间,其中主带11条;SA显示10条主要蛋白染色条带,分子量范围在105 kDa～28 kDa之间;ESA显示20条蛋白染色条带,分子量范围在112 kDa～10 kDa之间,其中主带11条。Western-blot结果:BSA出现25条反应条带,其中分子量为75 kDa、66 kDa、63 kDa、55 kDa、49 kDa、45 kDa、37 kDa、28 kDa、20 kDa、16 kDa的条带着色较深;SA出现7条反应条带;ESA显示14条反应带,其中53 kDa、49 kDa、45 kDa、43 kDa、35 kDa、27 kDa、18 kDa、12 kDa显色明显。结论:旋毛虫肌幼虫BSA与ESA较SA蛋白组分复杂,三者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度SA和ESA高于BSA,说明前两种抗原是旋毛虫肌幼虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。