复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的工艺优化

为研究蛋膜蛋白的利用,采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及胃蛋白酶进行单一酶解筛选实验,然后进行复合酶解实验。采用二次正交旋转组合设计,以水解度、氮收率为指标,研究酶制剂种类、加酶方式、复合酶比例、总加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备多肽工艺的影响。综合考虑水解度和氮收率因素,最终确定复合酶解可溶性蛋膜蛋白制备多肽的最佳工艺条件为:总加酶量16000U/g,并以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶的酶活力配比为8:2先后加入;酶解时间为碱性蛋白酶2h、木瓜蛋白酶1h;pH值为碱性蛋白酶9.0、木瓜蛋白酶5.5;酶解温度为50℃。该条件下制备的蛋膜蛋白酶解产物水解度和氮收率分别为46.12%、85.56%。

蛋膜蛋白光谱分析及其酶解液抗氧化性研究

对实验制得的可溶性蛋膜蛋白进行光谱分析。由紫外扫描及FI-IR红外光谱分析可初步断定,蛋膜蛋白中主要成分为Ⅰ型胶原,且较大程度地保留了其三股螺旋结构。采用不同的酶制剂对蛋膜蛋白溶液进行酶解并得相应的酶解液,并采用电脑化学发光仪测定了蛋膜蛋白及其酶解液清除超氧阴离子自由基的能力。结果表明,蛋膜蛋白及其酶解液均具有较好的超氧阴离子清除能力,且胰蛋白酶酶解液的IC50最小,为0.270mg/ml。