银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1的检测

目的检测银屑病患者血清中可溶性血小板T细胞活化抗原1(sCD226/PTA1)的水平,初步探讨该抗原与银屑病的关系。方法银屑病患者包括疗前30例,其中活动期17例、静止期13例,疗后10例,正常人对照15例。应用双抗体夹心ELISA法测定血清中sCD226/PTA1的浓度。结果银屑病组血清中sCD226/PTA1水平(823.88±569.93pg/mL)显著高于正常人(120.45±58.41pg/mL),t= 4.41,P<0.001。活动期(1036.07±598.97pg/mL)更高,依次高于静止期(546.39±399.28pg/mL)和正常人。疗后组(263.16±207.3pg/mL)显著低于相应的疗前组(751.51±648.07pg/mL),t= 3.42,P<0.005。与正常人比较,疗后组值仍偏高,但差异无显著性,t=2.02,P>0.05。结论银屑病患者血清中存在高水平的sCD226/PTA1,并在活动期、静止期及疗后呈现出不同的变化。提示CD226/PTA1可能参与银屑病的病理过程。

血小板T细胞活化抗原1与移植肾急性排斥反应的相关性

目的 :观察肾移植术后血清可溶性血小板T细胞活化抗原 1 (sPTA1 )水平及细胞膜性血小板T细胞活化抗原 1 (mPTA1 )的表达与排斥反应 (AR)的相关性。 方法 :选取 1 7例围手术期同种尸体肾移植患者以及 2例术后超过 1年的AR的患者 ,根据患者的不同病况每周采取血样 ,采用夹心ELISA法测定血清sPTA1水平 ,流式细胞术检测淋巴细胞mPTA1表达 ,对明确有排斥反应、可疑有排斥反应以及不能区分排斥反应的患者在B超引导下行移植肾活检穿刺病理检查。 结果 :术前sPTA1水平及mPTA1表达与对照无显著差异 (P >0 0 5)。术后第 1天sPTA1即有高水平的表达 ,与对照组差异显著 (P <0 0 5)。 1 9例尸体肾移植患者中经病理证实的 5例排斥反应患者sPTA1显著升高 ,mPTA1表达增强 ,与对照组差异非常显著 (P <0 0 1 )。经激素冲击治疗后 ,血清sPTA1下降 ,mPTA1表达下降。而且sPTA1水平变化早于AR的临床表现 ,持续时间较长。 结论 :PTA1可以作为移植物AR的预警和监测指标 ,与病理检查的结果有较好的一致性 ;

人血小板/T细胞活化抗原PTA1/Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

目的：获得人血小板／Ｔ细胞活化抗原１（ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ１，ＰＴＡ１）胞膜外区与人ＩｇＧ１Ｆｃ段融合蛋白，为ＰＴＡ１配体的鉴定及其功能的研究提供有力的工具。方法：针对人ＰＴＡ１ｃＤＮＡ序列设计３段引物，通过反转录、半套式ＰＣＲ方法从活化Ｊｕｒｋａｔ细胞中扩增出ＰＴＡ１胞膜外区基因片段，并将其克隆入融合蛋白表达载体ｐＩＧ中，通过酶切、ＰＣＲ及序列测定鉴定重组表达载体。重组载体通过ＤＥＡＥｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，经夹心ＥＬＩＳＡ及亲和层析、ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定融合蛋白的表达及免疫学活性。结果：经序列测定后证实重组表达载体含有正确的ＰＴＡ１胞膜外区序列及剪接供体序列，转染ＣＯＳ７细胞后，通过亲和层析纯化证实融合蛋白的Ｍｒ为８３０００，并能被抗ＰＴＡ１胞膜外区单抗及抗人ＩｇＧＦｃ的单抗同时识别。结论：ｐＰＴＡ１／Ｉｇ融合表达载体的构建及表达成功，为ＰＴＡ１的功能及配体（ＰＴＡ１Ｌ）的研究打下了良好的基础。

人血小板T细胞活化抗原PTA1基因探针的制备及初步鉴定

目的：制备地高辛标记的PTA1基因探针，以用于PTA1表达及功能的研究．方法：根据新克隆的人PTA1基因序列，设计针对PTA1分子不同结构域的引物，通过PCR扩增、地高辛标记的方法制备基因探针．结果：细胞原位杂交方法证实这种探针具有较高的敏感性和特异性．结论：PTA1基因探针的制备为进一步研究PTA1分子的分布、表达及功能打下了较好的基础．

地高辛标记的血小板T细胞活化抗原1cRNA探针的制备与鉴定

目的制备用地高辛 (digoxigenin ,Dig)标记的血小板T细胞活化抗原1(plateletandTcellactivationantigen1,PTA1)cRNA探针。方法构建重组质粒 pGEM 3ZF( +) PTA1 ,并做序列分析证实PTA1基因的插入方向正确后 ,用EcoRI消化得到线性DNA片段 ,再用SP6RNA聚合酶转录合成带有Dig标记的高比活度的单链cRNA探针。结果经斑点杂交证实 ,该探针敏感性高、特异性强。结论地高辛标记PTA1cRNA探针的制备 ,为进一步研究PTA1mR NA在组织、细胞的表达和分布提供了有效的工具。

抗人血小板／T细胞活化抗原1（PTA1）不同表位单克隆抗体的制备及鉴定

目的 研制一套可识别PTA1分子不同功能性表位的单克隆抗体（mAb)。方法 采用亲和层析法从血小板裂解液中纯化的天然PTA1分子免疫Balb/c小鼠，以间接ELISA筛选阳性杂交瘤，并以PTA1 cDNA转染COS7细胞，进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。竞争结合试验确定mAb识别PTA1分子的表位。纯化的PTA1经SDS－PAGE后，转移到PVDF膜，确定mAb是否可用于Western blot。结果 共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株，分别命名为FMU1，FMU2，FMU3，FMU4，FMU5，FMU6和FMU7。所有mAb与纯化天然PTA1和PTA1／Ig融合蛋白均有良好的免疫反应性，均可识别PTA1 cDNA转染的COS7细胞。流式细胞仪检测阳性荧光峰型与PTA1阳性对照Leo A1 mAb的荧光峰型相似；7株mAb识别PTA1分子的5个不同表位；FMU1，FMU2，FMU4，FMU5，FMU6和FMU7可应用于Westernblot。结论 成功地制备7株抗PTA1分子的特异性mAb。这些mAb可分别识别PTA1的5个表位，为PTA1分子结构与功能的研究提供了新的手段。

2型糖尿病患者血浆血小板活化因子和血清可溶性细胞间粘附分子-1测定的临床意义

目的 研究 2型糖尿病患者血浆血小板活化因子 (PAF)和血清可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)水平的变化及其临床意义。方法 采用ELISA法和生物学方法分别测定 5 5例 2型糖尿病患者 (其中糖尿病并发冠心病患者 2 4例 ,糖尿病未并发冠心病患者 31例 )和 32名健康人 (对照组 )血浆PAF和血清sICM 1水平。结果 糖尿病组PAF和sICAM 1水平与对照组PAF和sICAM 1相比均显著升高 (P <0 0 1) ;糖尿病并发冠心病组PAF和sICAM 1水平均显著高于糖尿病未并发冠心病组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;糖尿病患者PAF与sICAM 1水平呈正相关 (r=0 .6 37,P <0 0 1)。结论 血浆PAF和血清sICAM 1在糖尿病及其并发症的发生、发展中起作用 ,其测定可能有助于糖尿病及其并发症的早期诊断和病情的监测。

TRBC1作为潜在靶点治疗T细胞来源肿瘤的研究进展

T细胞来源肿瘤具有侵袭性、易耐药且预后不良的特点,常规治疗后复发率高,目前对于其的治疗不存在特效药。若能改进早期诊断和治疗手段,将有效改善患者的预后。细胞免疫治疗对B细胞来源的血液系统肿瘤获得较高的治愈率。却因为缺乏合适的靶点对治疗T细胞来源血液系统肿瘤的免疫治疗效果不佳。最新发现的T细胞受体β链恒定结构域1(TRBC1)作为一个潜在的治疗靶点,给T细胞来源肿瘤的诊断和治疗带来希望。本文将对TRBC1在当前的疾病诊断和细胞免疫治疗中研究进展进行综述。

一种新的恒河猴T淋巴细胞活化抗原PTA1

本文应用抗人Ｔ细胞活化抗原ＣＤ２５和ＰＴＡ１ＭｃＡｂ对恒河猴ＰＢＭＣ进行间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析，结果发现，恒河猴静止ＰＢＭＣＣＤ２５和ＰＴＡ１均为阴性，而ＰＨＡ活化后或经连续２个月注射ｒＨｕＴＮＦ－α恒河猴ＰＢＭＣ均表达高比率的ＣＤ２５和ＰＴＡ１阳性细胞。此结果表明，ＰＴＡ１抗原可作为恒河猴活化Ｔ淋巴细胞的一种有用标志，为ＰＴＡ１分子结构和功能研究以及采用恒河猴作为灵长类动物模型，观察细胞免疫功能状态提供了有用的资料。

依折麦布联合尼可地尔对老年冠心病患者血小板活化功能及sICAM-1、VEGF水平的影响

目的探讨依折麦布联合尼可地尔治疗老年冠心病的临床效果。方法选取2019年3月至2021年4月我院收治的102例老年冠心病患者作为研究对象,根据治疗方案不同将其分为对照组和观察组,各51例。对照组给予尼可地尔治疗,观察组在对照组基础上给予依折麦布治疗。比较两组的临床疗效、血小板活化功能指标、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平、全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、红细胞压积及纤维蛋白原水平。结果观察组的治疗总有效率为92.16%,高于对照组的76.47%,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的溶酶体膜糖蛋白(CD63)、血小板表面α-颗粒膜糖蛋白(CD62p)、血小板聚集率(PAR)低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的sICAM-1水平低于对照组,VEGF水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的全血低切黏度、全血高切黏度、血浆黏度、红细胞压积及纤维蛋白原水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论依折麦布联合尼可地尔治疗老年冠心病的效果显著,可改善血小板活化功能,调节sICAM-1、VEGF水平。

血小板表达的HLA-G对人类T淋巴细胞白血病1型病毒蛋白Tax表达的影响

目的探讨血小板表达的HLA-G对人类嗜T淋巴细胞1型病毒(HTLV-1)蛋白Tax表达的影响。方法从抗凝全血中分离血小板,运用流式细胞术检测血小板膜分子HLA-G;运用ELISA技术检测血小板裂解前后分泌型HLA-G分子含量;使用血小板裂解液(PL)培养HTLV-1的人淋巴瘤细胞MT2,采用蛋白免疫印迹技术(WB)评价血小板表达的HLA-G对HTLV-1蛋白Tax表达的影响。结果血小板膜表面高表达膜型mHLA-G;血小板裂解后分泌型sHLA-G表达量(ng/mL)升高(15.73±1.01vs6.65±0.47),且随着血小板含量的升高而升高,呈剂量依赖效应;与胎牛血清相比,PL明显促进MT2细胞高表达HLA-G蛋白和HTLV-1病毒Tax蛋白,在PL中加入抗HLA-G抗体可有效抑制MT2细胞表达Tax、HLA-G蛋白。结论血小板上高表达的免疫耐受分子HLA-G可诱导人淋巴瘤细胞MT2高表达HTLV-1蛋白Tax,进而促进病毒感染。

人类τ蛋白聚集可通过升高T细胞内抗原1促进神经炎症

目的:探讨人类τ蛋白(human tau protein,hTau)聚集促进神经炎症的分子机制。方法:在C57小鼠海马组织过表达hTau以及小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a转染hTau质粒后,通过Western blot、免疫荧光、免疫组化及RNA免疫沉淀等技术,检测炎症因子、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路、MAPK磷酸酶1(MAPK phosphatase 1,MKP1)及T细胞内抗原1(T-cell intracellular antigen 1,TIA1)等相关因子的表达变化。结果:过表达hTau上调促炎因子和TIA1蛋白水平,下调MKP1蛋白水平并激活MAPK通路。用小干扰RNA敲减TIA1可抑制hTau聚集诱导的MKP1蛋白水平下降和MAPK通路的激活;过表达TIA1则恢复hTau诱导的MKP1蛋白水平下调、MAPK通路激活和炎症因子水平上升。进一步研究发现,TIA1通过结合MKP1 mRNA而降低MKP1 mRNA水平,导致其蛋白水平下降。结论:hTau聚集通过上调TIA1抑制MKP1表达,诱导MAPK通路激活并促进下游炎症因子产生和释放,从而导致神经炎症的发生,促进τ蛋白病的发生和发展。

系统性红斑狼疮患者血小板PAC-1和CD62P表达的研究

目的探讨SLE患者外周血血小板PAC-1和CD62P的表达情况及其临床意义。方法用流式细胞仪检测40例SLE患者及20名健康志愿者(对照组)外周血PAC-1和CD62P的表达率,对40例SLE患者进行SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分,与PAC-1、CD62P与SLEDAI评分进行相关性分析。结果 SLE患者PAC-1和CD62P的阳性表达率高于对照组(P﹤0.05或0.01),其中狼疮活动组比狼疮非活动组明显升高(P﹤0.01)。SLE患者PAC-1、CD62P的阳性表达率与SLEDAI呈正相关(r分别为0.503,0.583,P均<0.05)。SLE患者狼疮性肾炎组与非狼疮性肾炎组的PAC-1和CD62P的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PAC-1和CD62P作为血小板活化的标志,在SLE患者外周血中的表达明显升高,并与SLEDAI评分呈正相关,表明血小板活化水平能反映狼疮病情活动,可作为狼疮活动监测指标;血小板活化可能在狼疮活动中发挥作用。

支气管哮喘患者T淋巴细胞PTA1的表达

目的:研究特异性血小板/T细胞活化抗原1（PTA1）在支气管哮喘患者外周血T淋巴细胞的表达,探索T细胞在支气管哮喘发病中的作用。方法:应用双色直接荧光标记,流式细胞仪分析支气管哮喘患者在急性期及缓解期时体内CD3,CD4,CD8淋巴细胞在PHA刺激下PTA1（CD226）表达。结果:支气管哮喘患者组CD3淋巴细胞上PTA1表达率高于正常对照组（P<0.01）;急性期组CD3,CD8细胞上PTA1表达比正常对照组及缓解期组均显著增高（P<0.01）,CD4细胞上PTA1表达也存在差异（P<0.05）;PTA1在缓解期组 CD4,CD8细胞上的表达与正常对照组差异无显著意义（P>0.05）。结论:支气管哮喘患者体内存在T细胞亚群异常活化,PTA1表达增高;CD4,CD8细胞活化程度与支气管哮喘疾病严重程度有关;PTA1可能参与了支气管哮喘的免疫发病机制。

4—1BBL／4—1BB共刺激信号在激活人外周血γδT细胞中的作用

目的：研究共刺激分子4-1BB在γδT细胞表面的表达及其在γδT细胞活化和增殖中的应用。方法：用结核杆菌（Mtb)低分子多肽抗原刺激人外周血单个核细胞，利用流式细胞术（FCAS）检测不同时相γδT细胞膜表面4-1BB的表达；用4-1BBL高表达的Jurkat细胞提供4-1BBL/4-1BB共刺激信号，同时用4-1BBL单抗阻断其刺激信号，PCAS检测γδT细胞的增殖比率和细胞内IFN-γ的表达情况。结果：静止的γδT细胞膜表面不表达4-1BB分子，Mtb抗原刺激48h4-1BB表达达到高峰（4979%）；阻断4-1BBL/4-1BB共刺激途径后，γδT细胞的增殖和细胞内IFN-γ的分泌均明显下降（P<0.05)。结论：4-1BB在γδT细胞活化后能迅速表达，4-1BBL/4-1BB共刺激信号在γδT细胞活化和增殖中发挥重要的作用。

血小板T细胞活化抗原1分子在NK细胞上的作用研究

目的 研究血小板T细胞活化抗原 1(PTA1)分子在NK细胞杀伤过程中的作用。方法 应用重导向细胞毒实验 ,探讨了PTA1分子对混合淋巴细胞反应中活化的NK细胞杀伤作用的影响。结果 在重导向细胞毒实验中 ,PTA1McAb能明显上调NK细胞及CTL的杀伤活性。结论 PTA1分子在NK细胞上具有刺激性受体的功能。

血小板/T细胞活化抗原1融合蛋白对内皮细胞表达的阻断作用

目的探讨用血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/Ig,亦简称CD226)融合蛋白预作用血小板后观察其对内皮细胞的黏附的阻断作用。方法妊娠高血压综合征患者血清与血管内皮细胞进行共培养,再与血小板进行粘附试验阻断实验,用间接免疫荧光法进行标记,用流式细胞仪检测受刺激后血管内皮细胞上血小板/T细胞活化抗原1的表达。结果妊娠高血压综合征患者和正常孕妇血清刺激的血管内皮细胞表达CD226的百分率分别为15.51%和7.15%,妊娠高血压综合征患者组显著高于对照组(P<0.001)。PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化血小板后可明显地阻断其与内皮细胞的黏附,阻断率为48.9%,明显高于PTA1/Ig融合蛋白预作用于活化内皮细胞后对两者的阻断作用(阻断率为13.6%)。结论妊娠高血压综合征患者血清具有刺激血管内皮细胞表达CD226的作用,内皮细胞与血小板的黏附过程中以血小板表面的T细胞活化抗原1(PTA1)配体与内皮细胞表面的PTA1分子相互作用为主。

血小板/T 细胞活化抗原1(PTA1)胞膜外区基因片段的克隆及其融合蛋白的表达

目的 克隆血小板／ Ｔ 细胞活化抗原１ （ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｎｄ Ｔｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ １ ， Ｐ Ｔ Ａ１）胞膜外区基因片段，构建、表达、纯化 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区与 Ｉｇ Ｇ Ｆｃ 融合蛋白，用于 Ｐ Ｔ Ａ１ 配体鉴定的研究。方法 针对人 Ｐ Ｔ Ａ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 设计引物，通过反转录、半套式 Ｐ Ｃ Ｒ 从 Ｔ Ｐ Ａ 活化的 Ｊｕｒｋａｔ 细胞中扩增 Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，并进行序列测定，而后将其进一步克隆入融合蛋白表达载体ｐ Ｉ Ｇ 中，构建重组表达载体ｐ Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ ，经 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｄｅｘｔｒａｎ 法转染 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞后通过亲和层析纯化，融合蛋白经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 鉴定。结果 获得７９３ｂｐ Ｐ Ｔ Ａ１ 胞膜外区基因片段，构建成功 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 融合蛋白表达载体，制备了可用于纯化 Ｐ Ｔ Ａ１／ Ｉｇ 的亲和层析柱，建立了检测融合蛋白的夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法。经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 证实融合蛋白在 Ｃ Ｏ Ｓ７ 细胞中获得表达，相对分子质量为８３ ×１０３ ，表达效率约为１ ．３ ｍｇ／ ?

血小板/T细胞活化抗原1(PTA1,CD226)

血小板 / T细胞活化抗原 1 ( PTA1 )是表达于活化 T细胞、NK细胞、活化内皮细胞以及巨核血小板谱系的 1种新的白细胞分化抗原 ,参与 NK细胞、杀伤性 T细胞、内皮细胞以及血小板的功能。新近的研究表明 PTA1胞膜外区第 1个结构域 ( D1 )与 PTA1分子的功能有关 ,D2结构域及部分 D1结构域可能被另一膜相关分子所掩盖 ;人血清和PBMC培养细胞上清液中存在可溶性 PTA1分子 ( s PTA1 ) ,s PTA1的产生与肿瘤等某些临床疾病有关 ;PTA1分子参与了活化内皮细胞和活化 T细胞的粘附 ;PTA1分子在人和灵长类动物间保守存在 ;PTA1的配体主要分布于 Colo2 0 5、Jurkat、C3 2、WM1 1 5、BC4、RD和 HS-91 3

血清sPTA1(CD226)在判别肾移植术后急性排斥反应中的作用

用夹心ELISA法测定肾移植患者血清sPTAP1水平。观察肾移植患者围手术期及急性排斥反应时血清可溶性血小板/T细胞活化抗原1（sPTA1,CD226）水平与排斥反应的相关性。结果显示,19例肾移植患者中经病理证实的排斥反应时sPTA1显著升高,经加强免疫抑制剂治疗后,血清sPTA1下降,且sPTA1水平的变化早于临床症状表现。研究表明,sPTA1是一项较为可靠的判别和监测急性排斥反应的指标,与病理检查的结果有较好的一致性,可以作为移植物急性排斥反应的监测和预警指标。